Le but de ce protocole est de montrer comment charger la CFDA dans différents sites des parties inférieures de l' Arabidopsis. Nous présentons ensuite le modèle de distribution de CF dans les pousses.
Article de méthode
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Le but de ce protocole est de montrer comment charger la CFDA dans différents sites des parties inférieures de l' Arabidopsis. Nous présentons ensuite le modèle de distribution de CF dans les pousses.
Le traceur symplastique 5 (6)-carboxyfluorescéine diacétate (CFDA) a été largement appliqué dans les plantes vivantes pour démontrer la connexion intercellulaire, le transport de phloème et le modelage vasculaire. Ce protocole montre le mouvement de la carboxyfluorescéine de bas en haut (CF) dans l' Arabidopsis à l’aide de la procédure de découpage des racines et de l’hypocotyle-pincement respectivement. Ces deux procédures différentes résultent en différentes efficacités du mouvement des FC: environ 91% de l’apparition de CF dans les pousses avec la procédure d’hypocotyle-pincement, alors que seulement environ 70% de l’apparition de CF avec la procédure de coupe des racines. Le simple changement des sites de chargement, entraînant des changements significatifs dans l’efficacité mobile de ce colorant symplastique, suggère que le mouvement des FC pourrait être soumis à la régulation symplasique, probablement par la jonction racine-hypocotyle.
De nombreux traceurs fluorescents avec une gamme de propriétés spectrales, comme l’acide 5 (6)-carboxyfluorescéine (CF) 1,8-hydroxypyrène-1, 3, 6-trisulphonique2, Lucifer Yellow ch (Lych)3, esculine et cter4, ont été développés et appliqué dans les plantes pour surveiller le mouvement symplastique et l’activité de phloème. En général, un colorant symplastique est chargé dans une coupe dans le tissu cible et la dispersion séquentielle du reporter dans d’autres parties de la plante démontrera la communication intercellulaire. Bien que le mécanisme d’absorption des colorants n....
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1. Arabidopsis croissance verticale dans le milieu MS
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Le mouvement symplastic est souvent soumis à des fluctuations environnementales. Perturbation de l’état de culture de la plante, et même le processus de préparation tissulaire affectera la limite d’exclusion de la taille des plasmodesmes, affectant ainsi le transport symplastique22. Pour améliorer l’efficacité de coloration, nous limitons notre fonctionnement dans la salle de croissance, où la température et l’humidité est étroitement contrôlée, et aussi effectuer .......
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Des études émergentes ont montré que les plantes peuvent réagir rapidement aux stimuli externes23, y compris la manipulation introduite dans les procédures expérimentales22. Dans notre expérience initiale, notre surveillance de cette connaissance conduit souvent à l’échec de coloration. Avec ces leçons, nous suggérons que les précautions suivantes doivent être maintenues à l’esprit lors de l’exécution de cette expérience: (1) les semences après la récolte doivent être conse.......
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Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Ce travail a été financé par la Fondation nationale des sciences naturelles de la Chine (31671257) et le centre d’innovation collaborative Hubei pour l’industrie céréalière (LXT-16-18).
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| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| KNO3 ; ; | Réactif chimique Sinopharm | 10017218 | |
| KH2PO4 ; | Réactif chimique Sinopharm | 10017608 | |
| MgSO4· ; 7H2O | Réactif chimique Sinopharm | 10013018 | |
| CaCl2· ; 2H2O | Réactif chimique Sinopharm | 20011160 | |
| MnSO4· ; H2O ; | Réactif chimique Sinopharm | 10013418 | |
| Na2MoO4· ; 2H2O | Réactif chimique Sinopharm | 10019818 | |
| Acide borique | Réactif chimique Sinopharm | 10004818 | |
| ZnSo4· ; 7H2O | Réactif chimique Sinopharm | 10024018 | |
| CuSO4· ; 5H2O | Réactif chimique Sinopharm | 10008218 | |
| CoCl2· ; 6H2O | Réactif chimique Sinopharm | 10007216 | |
| KI | Réactif chimique Sinopharm | 10017160 | |
| FeSO4· ; 7H2O | Réactif chimique Sinopharm | 10012118 | |
| EDTA ; | Réactif chimique Sinopharm | 10009717 | |
| Réactif chimique NaOH | Sinopharm | 10019718 | |
| KOH | Réactif chimique Sinopharm | 10017018 | |
| Saccharose | Réactif chimique Sinopharm | 10021418 | |
| Myo-inositol ; ; | MACKLIN | I811835 | |
| Acide nicotinique ; | MACKLIN | N814565 | |
| Pyridoxine HCl | MACKLIN | V820447 | |
| Thiamine HCl | MACKLIN | T818865 | |
| Glycine | MACKLIN | G800880 | |
| Poudre de gélose | Novon | ZZ14022 | |
| Microscope à fluorescence | Zeiss | Axio Zoom V16 | |
| Microscope à dissection | SDPTOP | SRE-1030 | |
| 200&mu ; l pipette | Dragon Laboratory Instruments | 713111110000-20-200ul | |
| 2.5&mu ; l pipette | Eppendorf | 3120000011 | |
| Pince fine ; | PINCE | ST-15 | |
| Parafilm | PARAFILM | PM-996 | |
| Lame double face en acier inoxydable | Gillette | Platinum-Plus Lame |
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