Nous fournissons une méthode simple et efficace pour transplanter 2'-deoxyguanosine traité E18.5 thymus dans la capsule rénale d'une souris nue. Cette méthode devrait aider dans l'étude de la fonction des cellules épithéliales thymiques et de la maturation des lymphocytes T.
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Article de méthode
Transplantation sous-capsulaire rénale du thym embryonnaire Murine traité à la déoxyguanosine de 2'-Deoxyguanosine chez les souris nues
Dans cet article
Résumé
Résumé
Le thymus est un organe immunitaire central important, qui joue un rôle essentiel dans le développement et la différenciation des lymphocytes T. La transplantation de Thymus est une méthode importante pour étudier la fonction épithéliale thymique et la maturation des lymphocytes T in vivo. Ici nous décraurons les méthodes expérimentales utilisées dans notre laboratoire pour transplanter 2'-deoxyguanosine (pour épuiser les lymphocytes du donneur) ont traité le thymume embryonnaire dans la capsule rénale d'une souris nue athymique. Cette méthode est à la fois simple et efficace et ne nécessite pas de compétences ou d'appareils spéciaux. Les résultats obtenus par cette méthode simple ont prouvé que le thymus transplanté peut effectivement soutenir la production de lymphocytes T du destinataire. En outre, plusieurs points clés en ce qui concerne le protocole seront encore élucidés.
Introduction
Le thymus est l'organe immunitaire central, dans les thymocytes subissent une sélection positive et négative, et deviennent des cellules T matures1,2. Une sélection anormale positive ou négative entraîne une immunodéficience ou des pathologies auto-immunes respectivement3,4. Par conséquent, la transplantation d'organe de thymus est une approche importante pour étudier le processus de sélection des lymphocytes T dans le thymus du donneur. Cette méthode est particulièrement cruciale lors de l'analyse de la fonction épithéliale thymique médiée par des mut....
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Protocole
Le protocole présenté respecte les lignes directrices du comité d'éthique de l'Université Jinan concernant les soins aux animaux.
REMARQUE : Les matériaux utilisés sont répertoriés dans le Tableau des matériaux.
1. Isolement du thymus embryonnaire
- Autoclave tous les instruments chirurgicaux avant l'expérience, et stériliser le banc / hotte avec 70% d'éthanol.
- À l'aide de dioxyde de carbone, anesthésiez et euthanasiez la souris femelle enceinte (18,5 jours après l'accouplement réussi). Ensuite, essuyez la région abdominale avec 70% d'éthanol.
REMARQUE : Ici,....
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Résultats
Ici, nous montrons l'isolement E18.5 thymus contenant deux lobes complets (Figure 1). En outre, nous montrons l'aiguille de veine de cuir chevelu qui a été coupée pour former un bisau sur le tube d'infusion (figure 2). Ensuite, nous montrons également une image représentative de la position du thymus qui a été transplanté dans la capsule rénale (Figure 3A) et le thymus après 8 semaines de croissance chez les souris réceptées (
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Discussion
La transplantation sous-capsulaire rénale du thymus embryonnaire est une méthode importante pour étudier la fonction des cellules épithéliales thymiques et le processus de maturation des lymphocytes T in vivo. Bien qu'il existe plusieurs études expérimentales sur la culture embryonnaire d'organe de thymus et la transplantation6,7, notre protocole fournit une procédure alternative simple sur la culture embryonnaire de thymus murine et sous-capsulaire rénal transpl.......
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Déclarations de divulgation
Aucun conflit d'intérêts n'a été déclaré.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par le programme Start de l'Université De Jinan à S.J. et par le Programme des sciences et de la technologie de Guangzhou en Chine (Grant No. 201704020209 à S.J.). Nous remercions Amy Botta (Département de biologie, Université York, Toronto, ON M3J 1P3, Canada) pour la relecture et l'édition du manuscrit.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 0,5 % Povidone iodée | Shanghai Likang Distinfectant Hi-Tech | Co.Ltd 20171113 | |
| 0,9 % Chlorure de sodium injectable | Shandong Qilu Pharmaceuyical Co.Ltd | 2C17112101 | |
| 1 mL Seringue stérile | Solarbio | YA1090 | |
| 2'-Deoxyguanosine | MEC | HY-17563 | 1M en DMSO, 1:800 en utilisant (final 1,25 mM) |
| 24 Plaque de puits | Corning Incorporated | Costar 3524 | |
| 4-0 Aiguilles de suture chirurgicale avec fil | NingBo Cheng-He Usine d’instruments microchirurgicaux Chine | YY0166-2002 | |
| Plat de culture cellulaire 60mm | Corning Incorporated | 430166 | |
| 70 % ETOH | LIRCON | 20181221 | |
| APC anticorps anti-souris CD8a | Biolegend | 100711 | 1:100 |
| Pince fine à pointe courbée, JZ 10 cm | Shanghai Medical Devices Group Co., Ltd. | JD1060 | Pour stériliser avant utilisation |
| Cefmetazole Sodium pour injection | Sichuan Hexin Pharmaceutical co,Ltd | 17062111 079 | 6mg dans 0,5 ml 0,9 % solution de NaCl, 7,5 ul / g de poids corporel |
| Ciseaux de dissection, JZ 10 cm | Shanghai Medical Devices Group Co., Ltd. | JC2303 | Pour stériliser avant utilisation |
| Sérum fœtal bovin (FBS ? | GIBCO | 10270-106 | |
| Pince fine, JZ 10 cm | Shanghai Medical Devices Group Co.,Ltd. | JD1050 | Pour stériliser avant utilisation |
| Cytométrie en flux | BD | FACSCanto II | |
| Flunixin méglumine | MACLIN | F810147 | 1mg dans 1ml de solution de NaCl à 0,9 %, 2ul/g poids corporel |
| Pinces, Dumont#5 | World Precision Instruments | 14098 | Pour stériliser avant utilisation |
| Lampe infrarouge | OTLAN | MT-810 | |
| Porte-aiguille, JZ 14 cm | Shanghai Medical Devices Group Co., Ltd. | J32010 | À stériliser avant utilisation |
| PE anti-souris CD4 | Biolegend | 100511 | 1:100 |
| Mélange pénicilline-streptomycine | GIBCO | 15140122 | 1:100 |
| Pentobarbital | sodium salt Sigma | P3761 | Solution à 1,5 % dans PBS, 75 ug/g de poids corporel |
| RPMI1640 Medium | GIBCO | C14-11875-093 | |
| Aiguille | pour veine du cuir cheveluShanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd | XC001 | |
| Ciseaux | à ressort VANNAS | S11014-12 | Pour stériliser avant utilisation |
| stéréomicroscope | OLYMPUS | SZ61 | |
| Coton-tige stérile 15cm | Guangzhou Haozheng | 20150014 | |
| Gaze stérile 5 cm x 7 cm-8P | Guangzhou Haozheng | 20172640868 | |
| Stérile PBS (1x) | GENOM | GNM20012 | |
| Pince à tissus, JZ 12,5 cm | Shanghai Medical Devices Group Co.,Ltd. | J41010 | À stériliser avant utilisation |
Références
- Klein, L., Kyewski, B., Allen, P. M., Hogquist, K. A. Positive and negative selection of the T cell repertoire: what thymocytes see (and don't see). Nature Reviews Immunology. 14, 377-391 (2014).
- Hogquist, K. A., Baldwin, T. A., Jameson, S. C.
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Réimpressions et autorisations
