Isolement, transfection et culture des monocytes humains primaires

Karlie Plaisance-Bonstaff; Celeste Faia; Dorota Wyczechowska; Duane Jeansonne; Cecilia Vittori; Francesca Peruzzi

doi:10.3791/59967

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Article de méthode

Isolement, transfection et culture des monocytes humains primaires

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DOI :

10.3791/59967

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16 décembre 2019

Karlie Plaisance-Bonstaff¹^,² , Celeste Faia² , Dorota Wyczechowska¹ , Duane Jeansonne¹ , Cecilia Vittori¹^,³ , Francesca Peruzzi¹^,²

¹Department of Medicine, Louisiana State University Health Sciences Center, ²Department of Microbiology, Immunology, and Parasitology, Louisiana State University Health Sciences Center, ³Department of Biomedical and Clinical Sciences L. Sacco, University of Milan

Dans cet article

Résumé

Présenté ici est un protocole optimisé pour isoler, cultiver, transfecter, et différencier les monocytes primaires humains des individus infectés par le VIH et des contrôles sains.

Résumé

Le virus de l'immunodéficience humaine (VIH) demeure un problème de santé majeur malgré l'introduction d'un traitement antirétroviral combiné (coART) au milieu des années 1990. Bien que la thérapie antirétrovirale abaisse efficacement la charge virale systémique et rétablisse le nombre normal de cD4^et de lymphocytes T, elle ne reconstitue pas un système immunitaire complètement fonctionnel. Un système immunitaire dysfonctionnel chez les personnes infectées par le VIH subissant une multithérapie peut être caractérisé par une activation immunitaire, un vieillissement précoce des cellules immunitaires ou une inflammation persistante. Ces conditions, ainsi que les facteurs comorbides associés à l'infection par le VIH, ajoutent de la complexité à la maladie, qui ne peut pas être facilement reproduite dans les modèles cellulaires et animaux. Pour étudier les événements moléculaires sous-jacents au dysfonctionnement immunitaire dans ces patients, un système à la culture et manipuler les monocytes primaires humains in vitro est présenté ici. Plus précisément, le protocole permet la culture et la transfection des monocytes CD14 primaires obtenus auprès de personnes infectées par le VIH qui subissent une multithérapie ainsi que de contrôles séronégatifs. La méthode implique l'isolement, la culture et la transfection des monocytes et des macrophages dérivés de monocytes. Tandis que des kits et des réactifs disponibles dans le commerce sont employés, le protocole fournit des bouts importants et des conditions optimisées pour l'adhérence réussie et la transfection des monocytes avec des imitations et des inhibiteurs de miRNA aussi bien qu'avec des siRNAs.

Introduction

L'infection par le virus de l'immunodéficience humaine 1 (VIH-1) provoque un dysfonctionnement immunitaire grave, qui peut entraîner des infections opportunistes et le syndrome d'immunodéficience acquise (sida). Bien que les patients infectés par le VIH qui subissent une multithérapie soient caractérisés par de faibles charges virales et des numérations normales de CD4^et de lymphocytes T, le fonctionnement du système immunitaire peut être compromis chez ces personnes, ce qui entraîne une réponse immunitaire dysfonctionnelle qui a été associée à un risque accru de développer un cancer¹. Les mécanismes de dysfonctionnement immunitaire ....