Mesurer les effets des bactéries et des produits chimiques sur la perméabilité intestinale de Caenorhabditis elegans

Tram  Anh Ngoc Le; Baskar Selvaraj; Jae  Wook Lee; Kyungsu Kang

doi:10.3791/60419

Article de méthode

Mesurer les effets des bactéries et des produits chimiques sur la perméabilité intestinale de Caenorhabditis elegans

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DOI :

10.3791/60419

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3 décembre 2019

Tram Anh Ngoc Le¹ , Baskar Selvaraj¹^,² , Jae Wook Lee¹^,² , Kyungsu Kang¹^,²

¹Gangneung Institute of Natural Products, Korea Institute of Science and Technology, ²Division of Bio-Medical Science & Technology, Korea University of Science and Technology (UST)

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit comment mesurer la perméabilité intestinale de Caenorhabditis elegans. Cette méthode est utile pour la recherche biologique fondamentale sur la santé intestinale liée à l'interaction entre les bactéries intestinales et leur hôte et pour le dépistage pour identifier les agents probiotiques et chimiques pour guérir le syndrome de l'intestin qui fuit et les maladies inflammatoires de l'intestin.

Résumé

Chez les organismes vivants, l'hyperperméabilité intestinale est un symptôme grave qui conduit à de nombreuses maladies inflammatoires de l'intestin (MII). Caenorhabditis elegans est un modèle animal non-mammalien qui est largement utilisé comme un système d'analyse en raison de sa courte durée de vie, la transparence, la rentabilité, et le manque de questions d'éthique animale. Dans cette étude, une méthode a été développée pour étudier les effets de différentes bactéries et 3,3'-diindolylmethane (DIM) sur la perméabilité intestinale de C. elegans avec un système d'analyse d'image à haut débit. Les vers ont été infectés par différentes bactéries intestinales ou cotraités avec DIM pendant 48 h et nourris avec de la fluorescéine isothiocyanate (FITC)-dextran pendant la nuit. Ensuite, la perméabilité intestinale a été examinée en comparant les images de fluorescence et l'intensité de fluorescence à l'intérieur des corps de ver. Cette méthode peut également avoir le potentiel d'identifier les bactéries intestinales probiotiques et pathogènes qui affectent la perméabilité intestinale dans le modèle animal et est efficace pour examiner les effets des produits chimiques nocifs ou favorisant la santé sur la perméabilité intestinale et la santé intestinale. Cependant, ce protocole a également quelques limitations considérables au niveau génétique, particulièrement pour déterminer quels gènes sont modifiés pour commander la maladie, parce que cette méthode est principalement employée pour la détermination phénotypique. En outre, cette méthode se limite à déterminer exactement quels substrats pathogènes causent l'inflammation ou augmentent la perméabilité des intestins des vers pendant l'infection. Par conséquent, d'autres études approfondies, y compris l'étude du mécanisme génétique moléculaire à l'aide de bactéries mutantes et de nématodes ainsi que l'analyse des composants chimiques des bactéries, sont nécessaires pour évaluer pleinement la fonction des bactéries et des produits chimiques dans la détermination de la perméabilité intestinale.

Introduction

La perméabilité intestinale est considérée comme l'un des principaux obstacles liés au microbiote intestinal et à l'immunité muqueuse et est susceptible d'être affectée par plusieurs facteurs, tels que les modifications du microbiote intestinal, l'affaiblissement épithélial ou les altérations de la couche de muqueuse¹. Des articles récents ont rapporté des protocoles efficaces pour mesurer la perméabilité intestinale des cellules intestinales humaines cultivées en analysant les taux de flux de fluorescence à travers la couche de cellules intestinales², mais moins d'articles de recherche présentent une procédure approprié....