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Article de méthode

Mesure de la plasticité de la chirurgie visuelle monoculaire et de la dominance oculaire dans le cortex visuel primaire de la souris

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DOI :

10.3791/60600

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8 février 2020

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* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Ici, nous présentons des protocoles détaillés pour la privation visuelle monoculaire et l’analyse de plasticité de dominance oculaire, qui sont des méthodes importantes pour étudier les mécanismes neuronaux de plasticité visuelle pendant la période critique et les effets des gènes spécifiques sur développement visuel.

Résumé

La privation visuelle monoculaire est un excellent paradigme expérimental pour induire la plasticité corticale visuelle primaire de réponse. En général, la réponse du cortex à l’œil contralatéral à un stimulus est beaucoup plus forte que la réponse de l’oeil ipsilatéral dans le segment binoculaire du cortex visuel primaire de souris (V1). Pendant la période critique des mammifères, la suture de l’œil contralatéral entraînera une perte rapide de réactivité des cellules V1 à la stimulation oculaire contralatérale. Avec le développement continu des technologies transgéniques, de plus en plus d’études utilisent des souris transgéniques comme modèles expérimentaux pour examiner les effets de gènes spécifiques sur la plasticité de la dominance oculaire (OD). Dans cette étude, nous introduisons des protocoles détaillés pour la privation visuelle monoculaire et calculons le changement dans la plasticité d’OD dans la souris V1. Après la privation monoculaire (MD) pendant 4 jours pendant la période critique, les courbes d’orientation de tuning de chaque neurone sont mesurées, et les courbes de tuning de la couche quatre neurones dans V1 sont comparées entre la stimulation des yeux ipsilateral et contralatéral. L’indice de biais contralatéral (CBI) peut être calculé en utilisant le score oculaire d’OD de chaque cellule pour indiquer le degré de plasticité d’OD. Cette technique expérimentale est importante pour l’étude des mécanismes neuronaux de la plasticité oD pendant la période critique et pour l’étude des rôles de gènes spécifiques dans le développement neuronal. La principale limitation est que l’étude aigue ne peut pas étudier le changement de plasticité neuronale de la même souris à un moment différent.

Introduction

La privation visuelle monoculaire est un excellent paradigme expérimental pour examiner la plasticité V1. Pour étudier l’importance de l’expérience visuelle dans le développement neuronal, David Hubel et Torsten Wiesel1,2 chatons privés de vision normale dans un œil à différents moments et pour des périodes variables de temps. Ils ont ensuite observé les changements dans l’intensité de réponse en V1 pour les yeux privés et non privés. Leurs résultats ont montré un nombre anormalement bas de neurones réagissant à l’oeil qui avait été suturefermé dans les trois premiers mois. Cependant, les réponses des neurones....

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Protocole

Dans ce protocole, des souris mâles C57Bl/6 ont été obtenues de l’Institut des animaux de laboratoire de l’Académie des sciences médicales du Sichuan et de l’hôpital populaire provincial du Sichuan. Toutes les procédures de soins et d’expérimentation des animaux ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux de l’Université des sciences électroniques et de la technologie de Chine.

1. Privation monoculaire (MD) au jour postnatal 28 chez les souris

  1. Mettre les outils chirurgicaux, l’aiguille de suture (0,25 mm de diamètre, le diamètre de la corde 0,07 mm) et les cotons-tiges dans une boîte en al....

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Résultats

Les résultats expérimentaux décrits ici permettent des mesures réussies de plasticité de MD et d’OD d’une souris privée et non privée pendant la période critique (P19-P32). La figure 1 montre comment effectuer des enregistrements d’une seule unité dans la couche 4 de V1 la zone binoculaire pour comparer les réponses dans l’œil ipsilatéral et contralatéral 4 jours après MD. La figure 2 montre les mesures de tri des pointes et de tuning d’orientation pour stimuler.......

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Discussion

Nous présentons un protocole détaillé pour MD et mesurant la plasticité d’OD par enregistrement d’unité simple. Ce protocole est largement utilisé en neurosciences visuelles. Bien que le protocole MD n’est pas compliqué, il ya quelques procédures chirurgicales critiques qui doivent être suivies avec soin. Tout d’abord, il ya deux détails importants assurant la qualité de la couture. La suture est suffisamment stable si les points sont concentrés dans la partie médiane de la paupière. De plus, 3 ll de colle sont appliqués.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts financiers concurrents.

Remerciements

Cette étude a été soutenue par la National Natural Science Foundation of China (81571770, 81771925, 81861128001).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Colle 502M& G Chenguang Stationery Co., Ltd.
Carte d’acquisitionNational InstumentPCI-6250
AgaroseBiowestG-10
AmplificateurSystème A-MModèle 1800
AtropineAladdin Bio-Chem Technology Co., LtdA135946-5
Appareil stéréotaxique cérébralRWD Life Science Co., Ltd68001
Ciseaux à ressort Cohan-VannasOutils scientifiques fins15000-02
Solutions pour lentilles de contactPékin Dr. Lun Eye Care Products Co., Ltd.
cotons-tigesHenan Guangderun Medical Instruments Co., Ltd
Porte-aiguille fineSuZhou Stronger Medical Instruments Co., LtdCZQ1370
Forcep66 Vision Tech Co., Ltd.53320A
Forcep66 Vision Tech Co., Ltd.53072
Forcep66 Vision Tech Co., Ltd.#5
Coussin chauffantStrykerTP 700 T
IlluminatorMotic China Group Co., Ltd.MLC-150C
IsofluraneRWD Life Science Co., LtdR510-22
Moniteur LCDPhilips (Chine) Investment Co., Ltd.39PHF3251/T3
MicroscopeSOPTOPSZMT1
Moniteur de signes vitaux non invasifMouseox
Micromanipulateur hydrauliqueà huile NARISHIGE International Ltd.PC-5N06022
Gel pour les yeux à la vaselineDezhou Yile Disinfection Technology Co., Ltd.17C801
Spike2Cambridge Electronic Design, Cambridge, Royaume-UniSpike2 Version 9
66 Vision Tech Co., Ltd.54010
Ciseaux chirurgicaux66 Vision Tech Co., Ltd.54002
Aiguille de sutureNingbo Medical Co., Ltd3/8 arc 2.5 * 8
Électrode de tungstèneFHC, IncL504-01B
XylocaïneHuaqing
AWG97028GM17064 Ciseaux chirurgicaux

Références

  1. Hubel, D. H., Wiesel, T. N. Effects of monocular deprivation in kittens. Naunyn-Schmiedebergs Archiv für experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 248 (6), 492-497 (1964).
  2. Daw, N. W., Fox, K., Sato, H., Czepita, D. Critical....

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Réimpressions et autorisations

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