Cet article présente des procédures expérimentales pour évaluer des affaiblissements de mémoire dans les souris épileptiques pilocarpine-induites. Ce protocole peut être utilisé pour étudier les mécanismes pathophysiologic du déclin cognitif associé à l’épilepsie, qui est l’une des comorbidités les plus courantes dans l’épilepsie.
Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.
Article de méthode
Évaluation de la fonction de mémoire chez les souris épileptiques induites par pilocarpine
Dans cet article
Résumé
Résumé
L’affaiblissement cognitif est l’une des comorbidités les plus communes dans l’épilepsie de lobe temporel. Pour récapituler le déclin cognitif associé à l’épilepsie dans un modèle animal d’épilepsie, nous avons généré des souris épileptiques chroniques traitées par pilocarpine. Nous présentons un protocole pour trois tests comportementaux différents à l’aide de ces souris épileptiques : l’emplacement des objets nouveaux (NL), la reconnaissance d’objets nouveaux (NO), et les tests de séparation des motifs (PS) pour évaluer l’apprentissage et la mémoire des lieux, des objets et des contextes, respectivement. Nous expliquons comment définir l’appareil comportemental et fournir des procédures expérimentales pour les tests NL, NO et PS à la suite d’un essai en terrain ouvert qui mesure les activités locomotrices basales des animaux. Nous décrivons également les avantages techniques des essais de NL, de NO, et de PS en ce qui concerne d’autres essais comportementaux pour évaluer la fonction de mémoire chez les souris épileptiques. Enfin, nous discutons des causes et des solutions possibles pour les souris épileptiques ne parviennent pas à faire 30 s de bon contact avec les objets au cours des séances de familiarisation, qui est une étape critique pour les tests de mémoire réussies. Ainsi, ce protocole fournit des informations détaillées sur la façon d’évaluer les troubles de la mémoire associés à l’épilepsie à l’aide de souris. Les tests NL, NO et PS sont des essais simples et efficaces qui sont appropriés pour l’évaluation de différents types de mémoire chez les souris épileptiques.
Introduction
L’épilepsie est un trouble chronique caractérisé par des crises récurrentes spontanées1,2,3. Parce que les crises répétitives peuvent causer des anomalies structurelles et fonctionnelles dans le cerveau1,2,3, l’activité de crise anormale peut contribuer au dysfonctionnement cognitif, qui est l’une des comorbidités les plus communes associées à l’épilepsie4,5,6. Contrairement aux événements c....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Protocole
Toutes les procédures expérimentales ont été approuvées par le Comité d’éthique de l’Université catholique de Corée et ont été effectuées conformément au Guide national des instituts de santé pour les soins et l’utilisation des animaux de laboratoire (publications des NIH no 80-23).
1. Test de localisation d’objets nouveaux (NL)
- Préparer les souris épileptiques C57BL/6 ou transgéniques 4 à 6 semaines après l’injection de pilocarpine.
REMARQUE : Des saisies aigues ont été induites par l’injection intraperitoneal (IP) de pilocarpine, suivant le protocole détaillé dans notre rapport précédent14. - T....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Résultats
Un calendrier expérimental général et la configuration pour évaluer la fonction cognitive sont indiqués dans la figure 1. Six semaines après l’introduction de crises aigues induites par la pilocarpine, les souris ont été soumises aux tests NL, NO et PS dans cet ordre séparé par des périodes de repos de 3 jours entre les tests(figure 1A). Pour le test de NL, deux objets identiques ont été placés dans le champ ouvert pendant la session de familiarisation (F1), et .......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Discussion
Ce travail décrit des procédures expérimentales pour évaluer la fonction cognitive chez les souris atteintes d’épilepsie chronique. Beaucoup de paradigmes différents de test comportemental sont employés pour évaluer l’apprentissage et les fonctions de mémoire chez les souris18. Le labyrinthe d’eau Morris, le labyrinthe de bras radial, le labyrinthe Y, le conditionnement contextuel de la peur et les essais basés sur des objets sont les tests comportementaux les plus fréquemment utilisés et fourniss.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Nous remercions le Dr Jae-Min Lee pour son soutien technique. Ces travaux ont été soutenus par les subventions de la National Research Foundation of Korea (NRF) financées par le gouvernement coréen (NRF-2019R1A2C1003958, NRF-2019K2A9A2A08000167).
....Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Seringue de 1 ml | Sung-shim | utiliser avec l’aiguille de calibre 26 ou 30 | |
| Éthanol 70 % | Duksan | UN1170 | Spray pour nettoyer la boîte et les objets |
| rideau | Pour éviter les repères visuels inutiles | ||
| Cresyl violet | Sigma | C5042 | Pour le colorage du violet Cresyl |
| cryotome | Leica | E21040041 | Pour les tissus sectionnement |
| ruban adhésif | Pour le placement ferme des objets | ||
| Support de montage DPX | Sigma | 06522 | |
| série éthanol | Duksan | UN1170 | Make 100 %, 95 %, 90 %, 80 %, 70 % ethanol solutions |
| plaque de sol avec des motifs de grille étroits | Leehyo-bio | Équipement d’expérimentation comportementale, taille de la plaque : 42,5 x 42,5 x 0,5 cm, taille de la grille : 2,75 x Plaque de sol de 2,75 cm | |
| avec de larges motifs de grille | Leehyo-bio | Équipement d’expérimentation comportementale, taille de la plaque : 42,5 x 42,5 x 0,5 cm, taille de la grille : 5,5 x 5,5 cm | |
| illuminomètre | TES Electrical Electronic Corp. | 1334A | Pour la mesure de l’éclairage de la pièce (60 Lux) |
| Unité de soins intensifs | Thermocare | #W-1 | |
| chlorhydrate de kétamine | Yuhan | 7003 | Utilisation pour anesthésier la souris pour la perfusion transcardique |
| Lampe LED | Lungo | P13A-0422-WW-04 | Éclairage pour les objets |
| de la salle d’essai comportementalPoupée en caoutchouc, tube en plastique de 50 ml, pot Coplin en verre, flacon en T en plastique, bouteille en verre | |||
| boîte à champ ouvert | Leehyo-bio | Matériel d’expérience comportementale, taille : 44 x 44 x 31 cm | |
| essuie-tout | Yuhan-Kimberly | 47201 | Utiliser pour sécher la boîte en champ ouvert et les objets |
| paraformaldéhyde | Merck Millipore | 104005 | Fabriquer une solution à 4 % |
| chlorhydrate de pilocarpine | Sigma | P6503 | |
| Utiliser pour localiser les objets dans la boîte à champ ouvert | |||
| scopolamine méthyle nitrate | Sigma | S2250 | Make 10X stock |
| Système intelligent 3.0 | Panlab | Système de suivi vidéo | |
| chronomètre | Junso | JS-307 | Pour la mesure des activités exploratoires des souris |
| saccharose | Sigma | S9378 | Pour la cryoprotection de coupes de tissus sel d’hémisulfate de |
| terbutaline | Sigma | T2528 | 10X |
| (caméra CCD) | Vision | VCE56HQ-12 | Placez la caméra directement au-dessus de la boîte à champ ouvert |
| xylazine (Rompun) | Bayer korea | KR10381 | Utiliser pour anesthésier la souris pour la perfusion transcardique |
| xylène | Duksan | UN1307 | Pour Coloration au violet de crésyle |
Références
- Chang, B. S., Lowenstein, D. H. Mechanisms of disease - Epilepsy. New England Journal of Medicine. 349 (13), 1257-1266 (2003).
- Scharfman, H. E. The neurobiology of epilepsy. Current Neurology and Neuroscience Report. 7 (4), 348-354 (2007).
- Rakhade, S. N., Jensen, F. E. ....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Réimpressions et autorisations
Explorer plus d’articles
