Ce protocole est une méthode efficace, rentable et robuste d’isoler les microglies primaires des tissus cérébraux vivants, adultes et humains. Les microglies humains primaires isolés peuvent servir d’outil pour étudier les processus cellulaires dans l’homéostasie et la maladie.
Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.
Article de méthode
Obtention de microglies humaines à partir de tissus cérébraux humains adultes
Dans cet article
Résumé
Résumé
Les microglies résident les cellules immunitaires innées du système nerveux central (SNC). Les microglies jouent un rôle essentiel pendant le développement, dans le maintien de l’homéostasie, et pendant l’infection ou les blessures. Plusieurs groupes de recherche indépendants ont mis en évidence le rôle central que jouent les microglies dans les maladies auto-immunes, les syndromes autoinflammatoires et les cancers. L’activation de la microglie dans certaines maladies neurologiques peut participer directement aux processus pathogènes. Les microglies primaires sont un outil puissant pour comprendre les réponses immunitaires dans le cerveau, les interactions cellule-cellule et les phénotypes dysrégulés de microglie dans la maladie. Les microglies primaires imitent mieux les propriétés microgliales in vivo que les lignées cellulaires microgliales immortalisées. Les microglies adultes humains présentent des propriétés distinctes par rapport aux microglies foetales et rongeurs humaines. Ce protocole fournit une méthode efficace pour l’isolement des microglies primaires du cerveau humain adulte. L’étude de ces microglies peut fournir des informations critiques sur les interactions cellule-cellule entre les microglies et d’autres populations cellulaires résidentes dans le SNC, y compris les oligodendrocytes, les neurones et les astrocytes. En outre, les microglies de différents cerveaux humains peuvent être cultivées pour la caractérisation des réponses immunitaires uniques pour la médecine personnalisée et une myriade d’applications thérapeutiques.
Introduction
Le système nerveux central (SNC) est construit à partir d’un réseau complexe de neurones et de cellules gliales1. Parmi les cellules gliales, les microglies fonctionnent comme les cellules immunitaires innées du SNC2,3. Les microglies sont responsables du maintien de l’homéostasie dans le SNC4en bonne santé . Les microglies jouent également un rôle important dans le neurodéveloppement, en élaguant les synapses2. Les microglies sont au cœur de la pathophysiologie de plusieurs maladies neurologiques, y compris, mais pas limitée à; Maladie d’....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Protocole
Tous les tissus ont été acquis après l’autorisation éthique des comités d’éthique de l’Institut indien de technologie Jodhpur et de l’Institut indien des sciences médicales (AIIMS) Jodhpur.
1.Acquisition et traitement de tissus (Jour 0)
- Recueillir le tissu dans un tube de 50 ml contenant 10 ml de liquide céphalo-rachidien artificiel (ACSF) (2 mM CaCl2•2H2O, 10 mM glucose, 3 mM KCl, 26 mM NaHCO3, 2,5 mM NaH2PO4, 1 mM MgCl2•6H2O, 202 mM saccharose)20. Assurez-vous que le tube est conservé sur la glace si le tissu doit être transféré ....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Résultats
En utilisant le protocole mentionné ci-dessus (Figure 1), nous avons été en mesure d’isoler les microglies humaines primaires des tissus cérébraux vivants réséqués chirurgicalement. Les cellules cultivées ont été tachées de ricinus communis agglutinine-1 (RCA-1) lectine pour microglie (vert) et avec des protéines acides fibrillaires gliales (GFAP) pour les astrocytes (rouge) (Figure 2) comme décrit précédemment
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Discussion
Microglie assurer l’homéostasie dans le cerveau normal et jouer un rôle central dans la pathophysiologie de diverses maladies neurologiques4. Les microglies sont au cœur du neurodéveloppement et de la formation des synapses2. Les études microgliale se sont avérées essentielles dans la compréhension du développement et de la progression de diverses maladies neurologiques4. Les microglies de rongeurs sont le modèle de choix prédominant pour les études .......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Le laboratoire de SJ a été créé grâce à des subventions institutionnelles de l’IITJ et est financé par des subventions du Département de la biotechnologie (BT/PR12831/MED/30/1489/2015) et du Ministère de l’électronique et des technologies de l’information du Gouvernement de l’Inde (no 4(16)/2019-ITEA). Les sections de tissu cérébral humain ont été obtenues du All India Institute of Medical Sciences (AIIMS) Jodhpur après l’autorisation du comité d’éthique institutionnel. Nous remercions Mayank Rathor, B.Tech Student membre de design and Arts Society IIT Jodhpur, pour son soutien en vidéographie.
....Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Solution antibiotique-antimycosique | Himedia | A002 | |
| Chlorure de calcium | Sigma | 223506 | |
| Centrifugeuse (4 ° ; C) | Sigma | 146532 | |
| Tubes à centrifuger | Abdos | P10203 | |
| CO2 incubateur | New Brunswik | Galaxy 170 S | |
| D-Glucose | Himedia GRM077 | ||
| DMEM milieu avec glutamine | Himedia | AL007S | |
| Sérum fœtal bovin | Himedia | RM9955 | |
| Flacon tube (50 ml) | Thermo Fsiher Scientific ; | 50CD1058 | |
| Fluorescéine Ricinus communis agglutinin-1 | Vecteur | FL-1081 | |
| Microscope fluorescent | Leica | DM2000LED | |
| Fluoroshield avec DAPI | Sigma | F6057 | |
| Anticorps GFAP | GA5 | 3670S | |
| Agitateur d’incubateur | New Brunswik Scientific | Innova 42 | |
| L929 lignée cellulaire | ATCC | NCTC clone 929 [cellule L, L-929, dérivé de la souche L] (ATCC ; CCL-1) | |
| Flux d’air laminaire | Thermo Fsiher Scientific ; | 1386 | |
| Chlorure de magnésium | Himedia | MB040 | |
| Phosphate monosodique | Merck | 567545 | |
| Mélange de nutriments F-12 Jambon Moyen | Himedia | Al106S | |
| Boîte de Pétri | Duran Groupe | 237554805 | |
| Saline tamponnée | au phosphate Himedia | ML023 | |
| Chlorure | de potassiumHimedia | MB043 | |
| Pipette sérologique | Matériel de laboratoire | LW-SP1010 | |
| Bicarbonate de sodium | Himedia | MB045 | |
| Saccharose | Himedia | MB025 | |
| Filtre à seringue (0,2&mu ;, 25 mm de diamètre) | Axiva | SFPV25R | |
| T-25 Fioles de culture tissulaire adaptées à la culture cellulaire adhérente. | Himedia | TCG4-20X10NO | |
| Trypsine-EDTA (0,25 %) | Gibco ; | Référence 25200-056 |
Références
- Allen, N. J., Barres, B. A. Glia - more than just brain glue. Nature. 457 (7230), 675-677 (2009).
- Lenz, K. M., Nelson, L. H. Microglia and Beyond: Innate Immune Cells As Regulators of Brain Development and Behavioral Function. Frontiers in Immunology. 9
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Réimpressions et autorisations
