Tirer parti de la turbidité et de la thromboélastographie pour la caractérisation complémentaire des caillots

Résumé

La fibrine est responsable de la formation de caillots pendant l’hémostase et la thrombose. Les tests de turbidité et thromboelastograhy (TEG) peuvent être utilisés comme outils synergiques qui fournissent une évaluation complémentaire d’un caillot. Ces deux techniques ensemble peuvent donner plus de perspicacité dans la façon dont les conditions de coagulation affectent la formation de caillots de fibrine.

Résumé

La thrombose est l’une des principales causes de décès dans le monde. La fibrine(ogen) est la protéine principalement responsable de la formation de caillots ou de la thrombose. Par conséquent, caractériser la formation de caillots de fibrine est bénéfique à l’étude de la thrombose. La turbidité et la thromboélastographie (TEG) sont toutes deux largement utilisées dans les tests in vitro pour surveiller la formation de caillots. La turbidité mesure dynamiquement la transmission de la lumière à travers une structure de caillot de fibrine via un spectromètre et est souvent utilisée dans les laboratoires de recherche. Teg est une technique viscoélastique spécialisée qui mesure directement la force des caillots sanguins et est principalement utilisée en milieu clinique pour évaluer l’hémostase des patients. À l’aide de ces deux outils, cette étude décrit une méthode de caractérisation d’un caillot de fibrine in vitro à l’aide d’un modèle simplifié de caillot de fibrinogène/thrombine. Les tendances des données dans les deux techniques ont été comparées dans diverses conditions de coagulation. Des caillots de fibrine humain et bovin ont été formés côte à côte dans cette étude, car les facteurs de coagulation bovine sont souvent utilisés comme substituts aux facteurs de coagulation humaine dans les milieux cliniques et de recherche. Les résultats démontrent que le TEG et la formation de caillots de trajectoire de turbidité par l’intermédiaire de deux méthodes distinctes et lorsqu’ils sont utilisés ensemble fournissent la force complémentaire de caillot et l’information structurelle de fibre dans diverses conditions de coagulation.

Introduction

La thrombose est la formation pathologique d’un caillot sanguin dans le corps qui bloque la circulation sanguine conduisant à une morbidité et une mortalité élevées dans le monde entier. Il y a 1 à 2 cas de thromboembolie veineuse et 2 à 3 cas de maladies vasculaires induites par la thrombose pour 1000 personnes par an^1,2. Présenté ici est une méthode de mise à profit de la thromboélastographie (TEG) et la turbidité pour surveiller la formation de caillots dans diverses conditions de coagulation. Fibrin(ogen) est la protéine primaire qui est responsable de la formation de caillots dans le corps. Dans les derni....

Protocole

1. Préparation de la solution saline tampon de phosphate (PBS)

REMARQUE : Le PBS a été utilisé tout au long de cette étude car les essais décrits n’ont pas exigé l’ajout de calcium. Il est important de noter que lors de l’ajout de calcium, souvent utilisé pour recalcifier les produits sanguins citrated, PBS doit être évitée que le calcium est connu pour précipiter dans les tampons de phosphate.

1. Faire un tampon de 0,01 M, pH 7.4 PBS en mélangeant 137 mM de chlorure de sodium, 1,8 mM de phosphate de potassium monobasique, 10 mM de phosphate de sodium dibasique et 2,7 mM de chlorure de potassium dans l’eau di.
2. Vérifiez le p....

Résultats

Les expériences présentées à la figure 1 sont des courbes représentatives de traçage de la turbidité des caillots de fibrine humain et bovin à différents niveaux de fibrinogène. Les courbes représentatives de traçage teg pour la formation de caillots de fibrine à différents niveaux de fibrinogène sont indiquées à la figure 2. Les deux courbes de traçage démontrent qu’après une période de décalage suivant l’initiation de caillot, la turbidité de caillot ou l’ampl.......

Discussion

Ce protocole démontre l’utilisation de deux outils distincts de caractérisation des caillots qui testent un modèle simplifié de caillots de fibrinogène/thrombine à l’aide de composants disponibles dans le commerce. Les tests de TEG et de turbidité sont faciles à réaliser. Ils fournissent non seulement des examens de caillot de point final tels que la formation maximale de caillot (Turb^Max et TEG^Max)et les temps de formation de caillots (Turb^Time et TEG^Time)mais évaluent égaleme.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Microplaque transparente aux UV à fond plat à 96 puits	Corning	3635	Copolymère acrylique non traité, albumine non stérile
à partir de sérum humain	Millipore Sigma	A1653	&ge ; 96 %, poudre lyophilisée
Arium Mini Plus Système d’eau ultra-pure	Sartorius	NA	DI source d’eau
Sérum bovin albumine	Millipore Sigma	A2153	&ge ; 96 %, poudre lyophilisée
Gobelets et broches jetables pour TEG 5000 (Clear)	Haemonetics	REF 6211
Fibrinogène, Plasma Bovin	Millipore Sigma	341573	contient plus de 95 % de protéines coagulables
Fibrinogène, Plasmingogène-Appauvri, Plasma Humain	Millipore Sigma	341578	Contient &ge ; 95 % de protéines coagulables.
Solution saline tamponnée au phosphate	Millipore Sigma	P3813	Poudre, pH 7,4, pour la préparation de solutions de 1 L
de chlorure	de potassium Millipore Sigma	60130	&ge ; Phosphate de potassium monobasique de pureté de 99,5
	Millipore Sigma	P9791	&ge ; 98 % de pureté
SevenEasy pH Mètre	Mettler Toledo	S20
Chlorure de sodium	Millipore Sigma	71378	&ge ; Phosphate de sodium dibasique de pureté 99,5
	Millipore Sigma	71636	&ge ; Pureté de 99,5 %
Système de lecteur de microplaques à détection multiple SpectraMax M5	Dispositifs moléculaires	M5
TEG 5000 Système d’analyse d’hémostase	Hémonétique	07-022
Thrombine,	Millipore Sigma	605157
Thrombine bovine, Plasma humain,	Millipore Sigma	605195

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