Quantification de l’ADN spécifique du porc circulant dans le sang d’un modèle de xénotransplantation

Yangyang Deng; Ming Zhou; Ying Lu; Jiao Chen; Zuhui Pu; Dongjing Yu; Yifan Dai; Yongqiang Zhan; Lisha Mou

doi:10.3791/61579

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Article de méthode

Quantification de l’ADN spécifique du porc circulant dans le sang d’un modèle de xénotransplantation

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DOI :

10.3791/61579

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22 septembre 2020

Yangyang Deng^*¹^,² , Ming Zhou^*¹^,³ , Ying Lu¹ , Jiao Chen¹ , Zuhui Pu⁴ , Dongjing Yu¹^,⁵ , Yifan Dai⁶ , Yongqiang Zhan⁷ , Lisha Mou¹

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Dans ce protocole, des amorces spécifiques de porcin ont été conçues, des fragments spécifiques d’ADN de porcine contenant des plasmides ont été construits, et des courbes standard pour la quantitation ont été établies. À l’aide d’amorces spécifiques aux espèces, cpsDNA a été quantifié par qPCR dans des modèles de transplantation de cellules de porc à souris et des modèles de transplantation de patchs d’artère de porc à singe.

Résumé

La xénotransplantation est une méthode réalisable pour traiter l’insuffisance des organes. Cependant, comment surveiller efficacement le rejet immunitaire de la xénotransplantation est un problème pour les médecins et les chercheurs. Ce manuscrit décrit une méthode simple et efficace pour surveiller le rejet immunitaire dans les modèles de transplantation de cellules de porc à souris et les modèles de transplantation de patch d’artère de porc à singe. L’ADN circulant est un biomarqueur potentiellement non invasif pour les dommages aux organes. Dans cette étude, l’ADN pigo-spécifique circulant (cpsDNA) a été surveillé pendant le rejet de xénogreffe par PCR quantitatif en temps réel (qPCR). Dans ce protocole, des amorces spécifiques de porcin ont été conçues, des fragments spécifiques d’ADN de porcine contenant des plasmides ont été construits, et des courbes standard pour la quantitation ont été établies. Des amorces spécifiques aux espèces ont ensuite été utilisées pour quantifier la cpsDNA par qPCR dans des modèles de transplantation cellulaire de porc à souris et des modèles de transplantation de patchs d’artère de porc à singe. La valeur de cette méthode suggère qu’elle peut être utilisée comme méthode simple, pratique, peu coûteux et moins invasive pour surveiller le rejet immunitaire de la xénotransplantation.

Introduction

La défaillance des organes est l’une des principales causes de^{décès 1}. La transplantation de cellules, de tissus et d’organes est un moyen efficace de traiter l’insuffisance organique². Néanmoins, la pénurie d’organes donneurs limite l’application clinique de cette^{méthode 3}^,⁴. Des études ont montré que les porcs peuvent être utilisés comme source potentielle d’organes humains pour la transplantation^{clinique 5}^,⁶. Cependant, la transplantation d’organes inter-espèces fait face à un rejet immunitaire dangere....