Gonadectomie et procédures de prélèvement sanguin dans le modèle de téléostéen de petite taille Medaka japonais (Oryzias latipes)

Résumé

L’article décrit un protocole rapide pour gondécatomiser et prélassez le sang du petit poisson téléostéen, en utilisant le medaka japonais(Oryzias latipes)comme modèle, pour étudier le rôle des stéroïdes sexuels dans la physiologie animale.

Résumé

Les stéroïdes sexuels, produits par les gonfles, jouent un rôle essentiel dans la plasticité du cerveau et des tissus hypophysaires et dans le contrôle neuroendocrinien de la reproduction chez tous les vertébrés en fournissant une rétroaction au cerveau et à l’hypophyse. Les poissons téléostéens possèdent un degré plus élevé de plasticité tissulaire et de variation dans les stratégies de reproduction que les mammifères et semblent être des modèles utiles pour étudier le rôle des stéroïdes sexuels et les mécanismes par lesquels ils agissent. L’élimination de la principale source de production de stéroïdes sexuels à l’aide de la gonadectomie avec un prélèvement sanguin pour mesurer les niveaux de stéroïdes a été bien établie et assez réalisable chez les gros poissons et est une technique puissante pour étudier le rôle et les effets des stéroïdes sexuels. Cependant, ces techniques soulèvent des défis lorsqu’elles sont mises en œuvre dans des modèles de téléostéen de petite taille. Ici, nous décrivons les procédures étape par étape de la gonadectomie chez les hommes et les femmes medaka japonais suivies d’un prélèvement sanguin. Ces protocoles se sont révélés hautement réalisables dans le medaka, ce qui indique un taux de survie élevé, la sécurité pour la durée de vie et le phénotype du poisson, et la reproductibilité en termes de clairance des stéroïdes sexuels. L’utilisation de ces procédures combinée aux autres avantages de l’utilisation de ce petit modèle de téléostéen améliorera considérablement la compréhension des mécanismes de rétroaction dans le contrôle neuroendocrinien de la reproduction et de la plasticité tissulaire fournis par les stéroïdes sexuels chez les vertébrés.

Introduction

Chez les vertébrés, les stéroïdes sexuels, qui sont principalement produits par les gonds, jouent un rôle important dans la régulation de l’axe cerveau-hypophyse-gonadique (BPG) à travers divers mécanismes de rétroaction^1,2,3,4,5. En outre, les stéroïdes sexuels affectent la prolifération et l’activité des neurones dans le cerveau^6,7,8 et les cellules endocriniennes, y compris les gonadotrophes, dans l’hypophyse

Protocole

Toutes les expérimentations et manipulations d’animaux ont été menées conformément aux recommandations sur le bien-être des animaux d’expérimentation à l’Université norvégienne des sciences de la vie. Les expériences utilisant la gonadectomie ont été approuvées par l’Autorité norvégienne de sécurité des aliments (FOTS ID 24305).

NOTE: Les expériences ont été réalisées en utilisant des hommes et des femmes adultes (âgés de 6 à 7 mois, poids d’environ 0,35 g, longueur d’environ 2,7 cm) medaka japonais. Le sexe a été déterminé en distinguant les caractéristiques sexuelles secondaires, telles que la taille et la forme de la nageoire dorsale et ....

Résultats

Ce protocole décrit chaque étape pour effectuer une gonadectomie et un prélèvement sanguin dans un téléostéen modèle de petite taille, le medaka japonais. Le taux de survie du poisson après ovariectomie (OVX) chez les femelles est de 100% (10 poissons sur 10) tandis que 94% (17 sur 18 poissons) des mâles ont survécu après une orchidectomie. Pendant ce temps, après la procédure de prélèvement sanguin, tous les poissons (38 poissons) ont survécu.

Discussion

Comme indiqué dans la littérature précédente, la gonadectomie et le prélèvement sanguin ont longtemps été utilisés chez d’autres espèces modèles pour étudier les questions liées au rôle des stéroïdes sexuels dans la régulation de l’axe BPG. Cependant, ces techniques ne semblent se prêter qu’aux animaux plus gros. Compte tenu de la petite taille du modèle de téléostéoscé couramment utilisé, le medaka japonais, nous fournissons un protocole détaillé pour la gonadectomie et le prélèvement sanguin qui est réalisable pour cet.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Capillaire en		GD1	Capillaire en verre avec filament GD-1 ; Narishige
Héparine sel		H4784-1G	Sigma-aldrich
Extracteur		P97	Extracteur de micropipette flamboyant/brun Modèle P-97 ; Sutter Instrument
Fil		N45VL	Suture polyamide, 0,2 mètre ; Tube
en plastique		Crownjun T9661	Eppendorf Safe-lock Tube microcentifuge 1,5 ml, Lame de rasoir Sigma-aldrich-Astra
			Superior Platinum Double Edge Lames de rasoir vert, salonwholesale.com
Capillaire		a16090800ux0403	Tube en silicone Uxcell 1 mm ID x 2 mm OD, amazon.com  ;
Tricaïne		WXBC9102V	chimie d’Aldrich