Un modèle murin pour la pancréatite chronique par perfusion de TNBS dans les voies biliaires

Résumé

La pancréatite chronique (PC) est une maladie caractérisée par une inflammation et une fibrose du pancréas, souvent associée à des douleurs abdominales intraitables. Cet article se concentre sur le raffinement de la technique pour générer un modèle murin de CP par perfusion de voies biliaires avec de l’acide 2,4,6 -trinitrobenzène sulfonique (TNBS).

Résumé

La pancréatite chronique (PC) est une maladie complexe impliquant une inflammation pancréatique et une fibrose, une atrophie glandulaire, des douleurs abdominales et d’autres symptômes. Plusieurs modèles de rongeurs ont été développés pour étudier la PC, dont le modèle de perfusion d’acide sulfonique 2,4,6-trinitrobenzène (TNBS) des voies biliaires reproduit les caractéristiques de la douleur neuropathique observées dans la PC. Cependant, la perfusion de médicaments pour les voies biliaires chez la souris est techniquement difficile. Ce protocole démontre la procédure de perfusion de TNBS des voies biliaires pour la génération d’un modèle murin CP. Le TNBS a été perfusé dans le pancréas par l’ampoule de Vater dans le duodénum. Ce protocole a optimisé le volume de médicaments, les techniques chirurgicales et la manipulation des médicaments pendant la procédure. Les souris traitées par TNBS ont montré des caractéristiques de LA PC reflétées par des réductions de poids corporel et du pancréas, des changements dans les comportements associés à la douleur et une morphologie pancréatique anormale. Avec ces améliorations, la mortalité associée à l’injection de TNBS était minime. Cette procédure est non seulement essentielle pour générer des modèles de maladie pancréatique, mais est également utile dans l’administration locale de médicaments pancréatiques.

Introduction

La pancréatite chronique (PC) est une maladie inflammatoire chronique caractérisée par l’atrophie du pancréas, la fibrose, les douleurs abdominales et la perte éventuelle des fonctions exocrine et endocrinienne¹. Les traitements médicaux et chirurgicaux actuels ne sont pas curatifs mais sont entrepris pour soulager les symptômes qui sont la conséquence de la maladie: douleurs abdominales réfractaires, dysfonctionnement endocrinien et exocrinien. Par conséquent, des traitements plus efficaces sont nécessaires de toute urgence². Les modèles animaux constituent un outil essentiel pour développer une meilleure compréhension ....

Protocole

Toutes les procédures ont été menées avec l’approbation des comités institutionnels de soins et d’utilisation des animaux de l’Université médicale de Caroline du Sud et du Ralph H. Johnson Medical Center. Des souris mâles C57BL/6J âgées de 8 à 10 semaines ont été utilisées dans cette étude. Les souris étaient logées sous un cycle standard de 12 lumières / 12 ténèbres avec un accès ad libitum à la nourriture et à l’eau.

1. Préparation de la solution injectable de TNBS

1. Préparer de l’éthanol à 10 % dans une solution saline à 0,9 %. Dissoudre le TNBS de base (voir tableau des matériaux)dans de l’éthanol à 10 % jusqu’à....

Résultats

Les procédures de perfusion des voies biliaires ont été optimisées pour réduire la mortalité des souris associée à cette procédure¹⁰. Le TNBS a d’abord été administré dans un volume total de 35 μL ou 50 μL. L’injection de TNBS dans un volume de 50 μL pourrait atteindre l’ensemble du pancréas et induire un phénotype de maladie plus homogène (Figure 1B). De plus, l’injection de TNBS à l’aide d’une seringue à insuline avec aiguille 31G pourrait mieux contrôler la vitesse.......

Discussion

L’infusion de TNBS dans les voies biliaires pour induire une pancréatite chronique est techniquement difficile chez la souris, car jusqu’à 22,5% des souris peuvent mourir dans les 3-4 jours suivant la perfusion du médicament¹⁰. Ici, ce rapport a affiné la procédure sur la base d’études antérieures et a réduit la mortalité précoce des souris à <10%. Par exemple, l’augmentation du volume de médicaments (de 35 μL à 50 μL) peut garantir que les médicaments atteignent l’ensemble du pancréas. L’utilisat.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
10 % Formol tamponné neutre v/v	Fisher Scientific	23426796
Coussinets de préparation à l’alcool, stériles	Fisher Scientific	22-363-750
Système d’anesthésie animale	VetEquip, Inc.
Chlorhydrate de buprénorphine, injection	Par Sterile Products, LLC	NDC 42023-179-05
Tubes à centrifuger, 15 mL	Fisher Scientific	0553859A
Éthanol, absolu (200 proof), qualité biologie moléculaire	Fisher Scientific	BP2818500
Ciseaux de dissection micro fins 4" droits pointus	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5882
Pince Graefe 4" pointe extra délicate	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5136
Coussin chauffant	Amazon	B07HMKMBKM
Hegar-Baumgartner Porte-aiguille 5.25"	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-7850
Seringue à insuline avec aiguille de calibre 31	BD	324909
Coussinets de préparation à l’iode	Fisher Scientific	19-027048
Isoflurane	Piramal Critical Care	NDC 66794-017-25
Micro pince d’application de pince 5.5"	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5410
Micro clip, droit, fort, incurvé 1x6mm	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5433
Micro clip, droit, largeur de clip 0,75 mm	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5420
Solution d’acide picrylsulfonique, TNBS, 1M dans H2O	Millipore Sigma	92822-1ML
Suture en polypropylène 4-0	Med-Vet International	MV-8683
Suture en polypropylène 5-0	Med-Vet International	MV-8661
Chlorure de sodium, solution intraveineuse à 0,9 %	VWR	2B1322Q
Champ chirurgical, stérile	Med-Vet International	DR1826
Cassette de tissus	Fisher Scientific	22-272416
Von Frey filaments	Bioseb	EB2-VFF

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