Observation de la fonction des îlots et des interactions entre les îlots et les cellules immunitaires dans les tranches de tissu pancréatique vivant

Mollie K. Huber; Denise M. Drotar; Helmut Hiller; Maria L. Beery; Paul Joseph; Irina Kusmartseva; Stephan Speier; Mark A. Atkinson; Clayton E. Mathews; Edward A. Phelps

doi:10.3791/62207

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Article de méthode

Observation de la fonction des îlots et des interactions entre les îlots et les cellules immunitaires dans les tranches de tissu pancréatique vivant

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DOI :

10.3791/62207

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12 avril 2021

Mollie K. Huber¹ , Denise M. Drotar²^,³^,⁴ , Helmut Hiller¹ , Maria L. Beery¹ , Paul Joseph¹ , Irina Kusmartseva¹ , Stephan Speier²^,³^,⁴ , Mark A. Atkinson¹ , Clayton E. Mathews¹ , Edward A. Phelps⁵

¹Department of Pathology, Immunology, and Laboratory Medicine, University of Florida, ²Paul Langerhans Institute Dresden (PLID) of the Helmholtz Zentrum München at the University Clinic Carl Gustav Carus of Technische Universität Dresden, ³Institute of Physiology, Faculty of Medicine, Technische Universität Dresden, ⁴German Center for Diabetes Research (DZD), ⁵J. Crayton Pruitt Family Department of Biomedical Engineering, University of Florida

Dans cet article

Résumé

Cette étude présente l’application de tranches de tissu pancréatique vivant à l’étude de la physiologie des îlots et des interactions entre les îlots et les cellules immunitaires.

Résumé

Les tranches de tissu pancréatique vivant permettent d’étudier la physiologie et la fonction des îlots dans le contexte d’un microenvironnement intact des îlots. Les tranches sont préparées à partir de tissu pancréatique humain et souris vivant incorporé dans l’agarose et coupées à l’aide d’un vibratome. Cette méthode permet au tissu de maintenir sa viabilité et sa fonction en plus de préserver les pathologies sous-jacentes telles que le diabète de type 1 (DT1) et le diabète de type 2 (DT2). La méthode des tranches permet de nouvelles directions dans l’étude du pancréas grâce au maintien des structures complexes et des diverses interactions intercellulaires qui composent les tissus endocriniens et exocrines du pancréas. Ce protocole montre comment effectuer la coloration et la microscopie en accéléré de cellules immunitaires endogènes vivantes dans des tranches pancréatiques ainsi que des évaluations de la physiologie des îlots. De plus, cette approche peut être affinée pour discerner les populations de cellules immunitaires spécifiques aux antigènes des cellules des îlots à l’aide de réactifs complexes-multimères d’histocompatibilité majeurs.

Introduction

L’implication du pancréas est pathognomonique à des maladies telles que la pancréatite, le DT1 et le DT21,2,3. L’étude de la fonction dans les îlots isolés implique généralement l’élimination des îlots de leur ^{environnement4}. La méthode de la tranche de tissu pancréatique vivant a été développée pour permettre l’étude du tissu pancréatique tout en maintenant des microenvironnements intacts des îlots et en évitant l’utilisation de procédures stressantes d’isolement des îlots5,6,7.