Détermination des classes totales de lipides et de lipides dans les échantillons marins

Résumé

Ce protocole est destiné à la détermination des lipides dans l’eau de mer et les spécimens biologiques. Les lipides dans les filtrats sont extraits avec du chloroforme ou des mélanges de chloroforme et de méthanol dans le cas des solides. Les classes de lipides sont mesurées par chromatographie sur couche mince de bâtonnets avec détection par ionisation de flamme et leur somme donne la teneur totale en lipides.

Résumé

Les lipides sont en grande partie composés de carbone et d’hydrogène et, par conséquent, fournissent une énergie spécifique plus grande que les autres macromolécules organiques dans la mer. Étant riches en carbone et en hydrogène, ils sont également hydrophobes et peuvent agir comme un solvant et un vecteur d’absorption pour les contaminants organiques et peuvent donc être des moteurs de la bioaccumulation des polluants dans les écosystèmes marins. Leur nature hydrophobe facilite leur isolement de l’eau de mer ou des spécimens biologiques : l’analyse des lipides marins commence par l’échantillonnage puis l’extraction dans des solvants organiques non polaires, fournissant une méthode pratique pour leur séparation des autres substances dans une matrice aquatique.

Si de l’eau de mer a été échantillonnée, la première étape consiste généralement à la séparation en factions « dissoutes » et « particulaires » définies opérationnellement par filtration. Les échantillons sont prélevés et les lipides isolés de la matrice de l’échantillon généralement avec du chloroforme pour la matière vraiment dissoute et les colloïdes, et avec des mélanges de chloroforme et de méthanol pour les solides et les échantillons biologiques. Ces extraits peuvent contenir plusieurs classes provenant de sources biogéniques et anthropiques. À ce stade, les lipides totaux et les classes de lipides peuvent être déterminés. Les lipides totaux peuvent être mesurés en additionnant les classes de lipides déterminées individuellement qui ont généralement été séparées chromatographiquement. La chromatographie sur couche mince (TLC) avec détection par ionisation de flamme (FID) est régulièrement utilisée pour l’analyse quantitative des lipides provenant d’échantillons marins. TLC-FID fournit des informations synoptiques sur les classes lipidiques et, en additionnant les classes, une mesure totale des lipides.

Les informations sur la classe des lipides sont particulièrement utiles lorsqu’elles sont combinées avec des mesures de composants individuels, par exemple des acides gras et / ou des stérols, après leur libération à partir d’extraits lipidiques. La grande variété de structures et de fonctions lipidiques signifie qu’elles sont largement utilisées dans la recherche écologique et biogéochimique évaluant la santé des écosystèmes et le degré d’influence des impacts anthropiques. Ils ont été utilisés pour mesurer les substances ayant une valeur alimentaire pour la faune marine (p. ex., les aliments aquatiques et/ou les proies) et comme indicateur de la qualité de l’eau (p. ex., hydrocarbures).

Introduction

Les méthodes décrites ici concernent des substances qui sont définies opérationnellement comme des lipides marins. Cette définition est basée sur leur aptitude à l’extraction liquide-liquide dans des solvants organiques non polaires, et elle fournit une méthode pratique pour leur séparation des autres substances dans une matrice aquatique. Leur nature hydrophobe facilite leur isolement de l’eau de mer ou des spécimens biologiques, ainsi que leur enrichissement et l’élimination des sels et des protéines.

La mesure de la teneur en lipides et de sa composition dans les organismes marins présente un grand intérêt pour l’écologie du réseau troph....

Protocole

REMARQUE: Pour nettoyer la verrerie, les instruments et les filtres pour les analyses lipidiques, lavez-les 3 fois avec du méthanol suivi de 3 lavages au chloroforme, ou chauffez-les à 450 ° C pendant au moins 8 heures.

1. Procédure de filtration de l’eau de mer dissoute et des lipides particulaires

REMARQUE: La fraction particulière d’intérêt est définie sur le plan opérationnel par la procédure de filtration. Dans ce cas, la taille des pores est de 1,2 μm.

1. Installez le collecteur de filtration sans filtre et rincez l’installation avec de l’eau de mer filtrée.
2. À l’aide de pin....

Résultats

En tant que secteur de la production alimentaire à la croissance la plus rapide, l’aquaculture évolue en termes d’innovations technologiques et d’adaptations pour répondre aux exigences changeantes. L’un d’eux consiste à réduire la dépendance à la farine et à l’huile de poisson d’origine sauvage, qui fournissent des ingrédients alimentaires à de nombreuses espèces aquacoles. Les huiles végétales terrestres sont à l’étude en tant que substituts durables et économiques de l’huile de poisson dans les aliments aquatiques, et.......

Discussion

La rapidité avec laquelle le système TLC-FID fournit des informations synoptiques sur la classe des lipides à partir de petits échantillons fait du TLC-FID un outil capable de filtrer les échantillons marins avant d’entreprendre des procédures analytiques plus complexes. De telles analyses nécessitent généralement la libération de composés constitutifs à partir d’extraits lipidiques et la dérivatisation pour augmenter la volatilité dans le cas de la chromatographie en phase gazeuse. TLC-FID combiné avec GC-FID s’est avér.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Flacons de 15 ml	VWR	66009-560
1-hexadécanol	Sigma	258741-1G
1-Monopalmitoyl-rac-glycérol	Sigma	M1640-1g
Flacons de 2 ml	VWR	46610-722
Filtres en fibre de verre de 25 mm	Fisher	09 874 32A
Ampoules à pipette de 2 ml	VWR	82024-554
Filtres en fibre de verre de 47 mm	Fisher	09 874 32
Pipettes 5 3/4 »	Fisher	1367820A
Pipettes 9 »	Fisher	1367820C
Acétone	VWR	CAAX0116-1
Agilent GC-FID 6890	Agilent
Chlorure de calcium ANHS 500gm	VWR	CACX0160-1
Bouchons pour flacons de 2 ml	VWR	46610-712
chloroforme	VWR	CACX1054-1
Palmitate de cholestéyle	Sigma	C6072-1G
Chromarod S5	Shell USA	3252
Dichlorométhane	VWR	CADX0831-1
DL-a-phosphatidylcholine, dipalmotoyl	Sigma	P5911-1g
Éther éthylique, grade ACS anhydre 4L	VWR	CAEX0190-4
Glyceryl tripalmitate	Sigma	T5888-100MG
Hamilton Seringue 702SNR 25µ ; l	Sigma	58381
Helium	Air Liquide	A0492781
Hexane	VWR	CAHX0296-1
Régulateur d’hydrogène	VWR	55850-484
Iatroscan MK6	Shell USA
Kimwipes	Fisher	066662
Medical Air	Liquide	A0464563
Gants en nitrile moyens	Fisher	191301597C
Gants en nitrile L	VWR	CA82013-782
Nitrogen	Air Liquide	A0464775
Nitrogen Regulator	VWR	55850-474
Nonadecane	Sigma	74158-1G
Acide palmitique	Sigma	P0500-10G
Distributeur répétitif	Sigma	20943
Bicarbonate de sodium 1kg	VWR	CA97062-460
Sulfate de sodium Anhy ACS 500gr	VWR	CA71008-804
Acide sulfurique	VWR	CASX1244-5
Ruban téflon	Fisher	14610120
tissue master 125 115V avec homogénéisateur 7mm	OMNI International	TM125-115
Cuve de développement TLC	Shell USA	3201
UHP hydrogène	Air Liquide	A0492788
VWR repippetter à solvant	VWR VWR	82017-766
Minuterie VWR Clignotante LED 2 canaux	VWR	89140-196
Zebron ZB-Wax GC colonne	Phenomenex	7HM-G013-11