Ce protocole décrit les étapes pour induire un infarctus du myocarde chez la souris tout en préservant le péricarde et son contenu.
Article de méthode
Ce protocole décrit les étapes pour induire un infarctus du myocarde chez la souris tout en préservant le péricarde et son contenu.
Ce protocole a montré que le péricarde et son contenu jouent un rôle anti-fibrotique essentiel dans le modèle de rongeur ischémique (ligature coronaire pour induire une lésion myocardique). La majorité des modèles précliniques d’infarctus du myocarde nécessitent la perturbation de l’intégrité péricardique avec perte du milieu cellulaire homéostatique. Cependant, récemment, une méthodologie a été développée par nous pour induire l’infarctus du myocarde, ce qui minimise les dommages péricardiques et conserve la population de cellules immunitaires résidentes du cœur. Une amélioration de la récupération fonctionnelle cardiaque chez les souris ayant un espace péricardique intact après une ligature coronarienne a été observée. Cette méthode permet d’étudier les réponses inflammatoires dans l’espace péricardique à la suite d’un infarctus du myocarde. Le développement ultérieur des techniques de marquage peut être combiné avec ce modèle pour comprendre le devenir et la fonction des cellules immunitaires péricardiques dans la régulation des mécanismes inflammatoires qui entraînent le remodelage dans le cœur, y compris la fibrose.
À ce jour, les maladies cardiovasculaires (MCV) sont reconnues comme la principale cause de décès dans le monde, entraînant un fardeau financier important et une réduction de la qualité de vie des patients1. La coronaropathie (CAD) est un sous-type de MCV et joue un rôle essentiel dans le développement de l’infarctus du myocarde (IM), qui est l’un des principaux contributeurs à la mortalité. Par définition, l’IM résulte d’une lésion irréversible du tissu myocardique due à des conditions prolongées d’ischémie et d’hypoxie. Le tissu myocardique manque de capacité de régénération, de sorte que les blessures sont permanentes et entraînent le remplacement du muscle cardiaque par une cicatrice fibrotique qui peut être initialement protectrice, mais qui contribue finalement à un remodelage cardiaque indésirable et à une éventuelle insuffisance cardiaque2.
Bien que la prise en charge des patients atteints de coronaropathie se soit considérablement améliorée au cours des dernières décennies, l’insuffisance cardiaque chronique (ICC) secondaire à l’ischémie affecte de nombreux patients dans le monde. Pour prévenir et gérer cette épidémie, il est nécessaire de mieux comprendre les mécanismes sous-jacents et de développer de nouvelles approches thérapeutiques. De plus, les résultats antérieurs soulignent les limites de la thérapie systémique et la nécessité de développer des alternatives précises. Étant donné que l’étude des séquelles moléculaires de l’IM chez l’homme est affectée par la capacité d’accéder aux tissus infarctus, des modèles animaux qui récapitulent les caractéristiques et le développement de l’IM humain et de l’ICC liés aux MCV sont indispensables.
Comme les modèles animaux idéaux ressemblent beaucoup à un trouble humain pour leurs caractéristiques structurelles et fonctionnelles, l’étiologie de la maladie devrait guider leur conception. Dans la coronaropathie, il s’agit de la sténose athéroscléreuse chronique des artères coronaires ou de l’occlusion thrombotique aiguë. Différentes méthodes ont été développées et appliquées chez diverses espèces d’animaux de laboratoire pour induire le rétrécissement ou l’occlusion des artères coronaires. De telles stratégies peuvent être classées en deux groupes: (1) manipulation mécanique d’une artère coronaire pour induire un IM et (2) accélération de l’athérosclérose pour faciliter le rétrécissement coronaire conduisant à un IM. La première stratégie implique généralement soit la ligature d’une artère coronaire, soit la mise en place d’un stent dans l’artère. La deuxième approche tend à s’appuyer sur la modification du régime alimentaire de l’animal pour inclure des aliments riches en graisses / cholestérol. Certaines des limites de cette dernière approche comprennent le manque de contrôle sur le moment et le site des occlusions coronaires.
En revanche, l’induction chirurgicale de l’IM ou de l’ischémie dans un modèle animal présente plusieurs avantages, tels que l’emplacement, le moment précis et l’étendue de l’événement coronarien, conduisant à des résultats plus reproductibles. La méthode la plus largement utilisée est la ligature chirurgicale de l’artère coronaire descendante antérieure gauche (DAL). Ces modèles récapitulent les réponses humaines aux lésions ischémiques aiguës, ainsi que la progression versCHF 3. Initialement développée chez les grands animaux, la chirurgie LAD sur de petits animaux tels que les rongeurs est devenue plus réalisable avec les progrès de la technologie4. Dans l’établissement de tels modèles, les souris ont été favorisées pour diverses raisons, notamment leur disponibilité relative, leur faible coût en logement et leur capacité de manipulation génétique.
Les modèles chirurgicaux contemporains de cardiopathie ischémique utilisant l’occlusion LAD nécessitent que le chercheur ouvre le péricarde pour ligaturer temporairement ou définitivement l’artère5. De telles stratégies entraînent la perturbation de l’espace péricardique, qui joue une fonction essentiellement mécanique et lubrifiante pour assurer une fonction cardiaque adéquate. Un autre inconvénient de l’ouverture du péricarde est de perdre le liquide péricardique natif de l’animal avec ses divers composants cellulaires et protéiques 6,7. En réponse, une méthode pour induire l’IM tout en gardant le péricarde intact a été développée par nous. En plus de minimiser la perturbation de cet environnement homéostatique, cette approche permet de marquer et de tracer des cellules spécifiques après avoir causé un IM. De plus, cette approche représente mieux les lésions ischémiques myocardiques en milieu humain.
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Des souris C57BL/6J mâles et femelles âgées de 8 à 14 semaines ont été utilisées pour ces expériences. Ce protocole a reçu l’approbation éthique du Comité de protection des animaux de l’Université de Calgary et respecte toutes les lignes directrices sur les soins aux animaux.
1. Préparation et chirurgie de la souris
2. Évaluation fonctionnelle de la fonction cardiaque par échocardiographie (ECG)
3. Collecte de tissu cardiaque pour la coloration de la fibrose
4. Cytométrie en flux du lavage du cœur et de la cavité péricardique
5. Marquage du macrophage péricardique à l’aide de la méthode ICAPS (Intercostal Approach to the Pleural Space)9
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Ce modèle modifié de ligature coronaire a été optimisé pour atteindre la reproductibilité et la survie des animaux. Cependant, en raison de la blessure importante induite dans le cœur, une certaine mortalité peropératoire et postopératoire attendue est associée à la procédure. La mortalité standard est généralement plus élevée chez les hommes (~25-35%) que chez les femmes (~ 10-15%).
L’induction réussie d’un IM avec la ligature coronaire modifiée devrait être évidente par des changements dans ...
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L’induction d’un IM dans un péricarde fermé chez les rongeurs est unique et peut avoir des applications potentiellement importantes. La procédure repose fortement sur la familiarité du chirurgien avec le modèle de rongeur et l’anatomie cardiaque des rongeurs. Le succès dépend également des soins prodigués au cours de trois étapes critiques: l’incision musculaire intercostale et la rétraction des côtes (étapes 1.11-1.13), la création de l’infarctus (étape 1.17) et la récupération de l’animal (étapes 1.22-1.24).
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| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Stérilisateur à billes Steri-350 | Inotech | NC9449759 | |
| 10 % formol | Millipore Sigma | HT501128-4L | |
| 40 µ ; m Crépine à cellules | VWR | CA21008-949 | Falcon, 352340 |
| 70 µ ; m Filtre cellulaire | VWR | CA21008-952 | Falcon, 352350 |
| ACK Tampon de lyse | Thermo Fisher | A1049201 | |
| BD Insyte-W Aiguille de cathéter 24 G X 3/4" | CDMV Inc | 108778 | |
| Bétadine (solution topique de povidone iodée à 10 %) | CDMV Inc | 104826 | |
| Pince émoussée | Outils de haute science | FST 11000-12 | |
| BNP Pommade ophtalmique | CDMV Inc | 17909 | |
| Castroviejo Needle Driver | Outils de sciences fines | FST 12061-01 | |
| Centrifugeuse 5810R | Eppendorf | 22625101 | |
| Collagenase I | Millipore Sigma | SCR103 | |
| Collagenase XI | Millipore Sigma | C7657 | |
| Covidien 5-0 Polysorb Suture - CV-11 Aiguille conique | Medtronic Canada | GL-890 | |
| Covidien 5-0 Suture Polysorb - PC-13 Aiguille coupante | Medtronic Canada | SL-1659 | |
| Pince émoussée incurvée | Outils de sciences fines | FST 11009-13 | |
| Dako Montage Moyen | Agilen | CS70330-2 | |
| DNase I | Millipore Sigma | 11284932001 | |
| Éthanol, 100 % | Millipore Sigma | MFCD00003568 | |
| Ethicon 8-0 Suture Ethilon - BV-130-4 aiguille conique | Johnson & Johnson Inc. | 2815G | |
| Lampe à fibre optique | Nikon | 2208502 | |
| Pince fine | Outils scientifiques fins | FST 11150-10 | |
| Fluoresbrite® ; Microsphères de carboxylate YG 1,00 & micro ; m | Polysciences, Inc. | 15702 | |
| Unité de cauctérisation thermique Geiger | World Precision Instruments | 501293 | Modèle 150-ST |
| Hyaluronidase | Millipore Sigma | H4272 | |
| Vaporisateur isofluorane | Harvard Apparatus | 75-0951 | |
| Isoflurane USP, 250 mL | CDMV Inc | 108737 | |
| Fixateur magnétique Système de rétraction | Outils scientifiques fins | 18200-20 | |
| MX550D- Sonde 40 MHz | Fujifilm- Visual Sonics | ||
| Needle Driver | Fine Science Tools | FST 12002-12 | |
| PE-10 Tubing | Braintree Scienctific, Inc. | PE10 50 FT | |
| Ciseaux | Outils de sciences fines | FST 14184-09 | |
| SMZ-1B Stéréomicroscope | Nikon | SMZ1-PS | |
| VentElite Ventilateur pour petits animaux | Harvard Apparatus | 55-7040 | |
| Vetergesic (10 mL, 0,3 mg/mL buprénorphine)) | CDMV Inc | 124918 | médicament contrôlé |
| Vevo 2100 Logiciel | Fujifilm-Visual Sonics |
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