Modélisation de l’hémorragie intraventriculaire néonatale par injection intraventriculaire d’hémoglobine

Résumé

Nous présentons un modèle d’hémorragie intraventriculaire néonatale utilisant des ratons qui imite la pathologie observée chez l’homme.

Résumé

L’hémorragie intraventriculaire néonatale (hémorragie intraventriculaire) est une conséquence fréquente de la naissance prématurée et entraîne des lésions cérébrales, une hydrocéphalie posthémorragique (HPH) et des déficits neurologiques à vie. Bien que l’HPH puisse être traitée par des procédures temporaires et permanentes de dérivation du liquide céphalorachidien (LCR) (réservoir ventriculaire et shunt ventriculopéritonéal, respectivement), il n’existe aucune stratégie pharmacologique pour prévenir ou traiter les lésions cérébrales et l’hydrocéphalie induites par l’hémorragie intraveineuse. Des modèles animaux sont nécessaires pour mieux comprendre la physiopathologie de l’hémorragie intraveineuse et tester les traitements pharmacologiques. Bien qu’il existe des modèles d’hémorragie intranatale néonatale, ceux qui entraînent de manière fiable une hydrocéphalie sont souvent limités par la nécessité d’injections de grand volume, ce qui peut compliquer la modélisation de la pathologie ou introduire une variabilité dans le phénotype clinique observé.

Des études cliniques récentes ont impliqué l’hémoglobine et la ferritine dans l’hypertrophie ventriculaire après une hémorragie intraveineuse. Ici, nous développons un modèle animal simple qui imite le phénotype clinique de PHH en utilisant des injections intraventriculaires de petit volume de l’hémoglobine, produit de dégradation du sang. En plus d’induire de manière fiable l’élargissement ventriculaire et l’hydrocéphalie, ce modèle entraîne des lésions de la substance blanche, une inflammation et une infiltration de cellules immunitaires dans les régions périventriculaires et de la substance blanche. Cet article décrit cette méthode simple et cliniquement pertinente pour modéliser l’HPH-IV chez les rats néonatals par injection intraventriculaire et présente des méthodes pour quantifier la taille du ventricule après l’injection.

Introduction

L’hémorragie intranatale néonatale provient de la matrice germinale, un site de division cellulaire rapide adjacent aux ventricules latéraux du cerveau en développement. Cette structure hautement vasculaire est vulnérable à l’instabilité hémodynamique liée à une naissance prématurée. Le sang est libéré dans les ventricules latéraux lors de l’hémorragie de la matrice germinale (GMH)-IVH lorsque des vaisseaux sanguins fragiles dans la matrice germinale se rompent. Dans le cas de l’hémorragie de grade IV, l’infarctus hémorragique périventriculaire peut également contribuer à la libération de produits sanguins dans le cerveau. ¹ L’association GMH-I....

Protocole

REMARQUE : Tous les protocoles sur les animaux ont été approuvés par le Comité de protection et d’utilisation des animaux des établissements. Consultez le tableau des matériaux pour plus de détails sur tous les matériaux, réactifs, équipements et logiciels utilisés dans ce protocole.

1. Préparation de solutions d’hémoglobine et de LCR

1. Préparer une solution artificielle stérile de LCR (aLCR) en ajoutant 500 μL de la solution de LCRa à un microtube de 1,5 mL et conserver sur de la glace.
2. Préparer une solution stérile d’hémoglobine à 150 mg/mL en ajoutant 75 mg d’hémoglobine à 500 μL de LCR....

Résultats

Le succès de l’injection a été confirmé par des moyens radiologiques et immunohistochimiques. Les animaux ayant reçu une injection d’hémoglobine ont développé une ventriculomégalie aiguë modérée lors de l’évaluation par IRM (figure 2A), avec des ventricules latéraux significativement plus grands à 24 h et 72 h après l’injection d’hémoglobine par rapport aux animaux injectés par aLCR (figure 2B,C). Bien qu’il n’y ait pas eu de différence signific.......

Discussion

Ce modèle d’hémoglobine utilisant l’injection d’hémoglobine permet l’étude de la pathologie de l’hémoglobine intraveineuse spécifiquement médiée par l’hémoglobine. Pour les études complémentaires, l’hémoglobine peut également être facilement administrée in vitro et ne confond pas les tests biochimiques pour les protéines fabriquées par les microglies / macrophages présents dans le sang total.

Les principales théories de l’HNV-PHH comprennent l’obstruction mécanique de la circulation d.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Seringue à insuline de 0,3 mL	BD Microfine + Seringue à insuline	230-4533	Les seringues de 0,3 à 0,5 mL fonctionneront
Microtube de 1,5 mL	USA Scientific	1615-5500	N° de lot K194642H -3 511
4.7T IRM Agilent	/Varian	4.7T/33 cm	Système d’IRM Agilent/Varian DirectDrive 4.7-T (200-MHz) Suture
monofilament 6-0	ETHICON	667G
9.4T IRM	Bruker	BioSpec 94/20	Utilisé dans ce protocole sans la cryosonde
Balance analytique	CCURIS Instruments	W3200-320
LCR artificiel (aCSF)	Tocris Bioscience	3525	N° de lot : 72A
Betadine	Purdue Products L.P.	301005-00	NDC 67618-150-09
Carprofène (injectable)	Zoetis Inc.  ;	PI 4019448	Rimadyl
Ethanol	Decon Laboratories	2701
Coussin chauffant	Sunbeam	E12107-819	UL 612A, Z-1228-001
Hémoglobine	MP Biomedicals	100714	N° DE LOT SR02321
Isoflurane	Piramal Critical Care	NDC 66794-017-25
Vaporisateur d’isoflurane	VETEQUIP	911103
Lumière pour l’inturmentation stéréotaxique	Dolan-Jenner industries	Fiber-Lite MI-150
Pompe à seringue de micro-injection	World Precision Instruments	MICRO21	Série 184034 T08K
Logiciel d’IRM	Bruker BioSpin	Paravision 360 3.2
Oxygène	Airgas Soins de santé	UN1072	NUMÉRO DE LOT
S1432080XA02 Rats Sprague-Dawley	Charles River Laboratories	Code de souche : 001
Instrument stéréotaxique	KOPF Instuments	Modèle 900LS Lazy Susan
Applicateur stérile à pointe de coton	Fischerbrand	23-400-118
Lame chirurgicale	covetrus	#10
Antibiotique triple topique	Pommade antibiotique triple	NDC 51672-2120-1
Logiciel de quantification du volume ventricule	ITK-SNAP	ITK-SNAP 4.0.0 bêta