Évaluation d’un biomarqueur fiable dans un modèle murin de septicémie induit par ligature et ponction

Résumé

Ce protocole présente les détails opératoires de la ligature et de la ponction des cæcaux (CLP) dans un modèle murin de septicémie. CLP est l’une des techniques les plus largement utilisées pour créer un modèle animal de septicémie. Par conséquent, un protocole CLP normalisé est nécessaire pour obtenir des résultats de recherche fiables.

Résumé

La septicémie est une maladie grave qui met la vie en danger et qui se développe rapidement et qui cause des millions de décès chaque année dans le monde. Les chercheurs ont déployé d’énormes efforts pour élucider la physiopathologie de la septicémie à l’aide de divers modèles animaux; le modèle murin de septicémie induite par ligature et ponction des cæcaux (CLP) est largement utilisé dans les laboratoires. Les trois aspects techniques qui affectent la sévérité et la reproductibilité du modèle CLP sont le pourcentage de caecum ligaturé, la taille de l’aiguille utilisée pour la ponction cæcale et le volume de matières fécales pressées dans la cavité abdominale. Le diagnostic rapide et spécifique de la septicémie est un facteur crucial qui affecte le résultat. L’étalon-or pour le diagnostic de la septicémie est la culture microbienne; Cependant, ce processus prend du temps et est parfois inexact. La détection des biomarqueurs spécifiques de la septicémie est rapide, mais les biomarqueurs existants ne sont pas satisfaisants en raison d’une courte demi-vie, de la non-spécificité et d’une sensibilité insuffisante. Par conséquent, il existe un besoin urgent d’un biomarqueur fiable de la septicémie dans les premiers stades. Des publications antérieures suggèrent que des pièges extracellulaires (TNE) excessifs de neutrophiles se produisent dans la septicémie. L’histone citrullinée H3 (CitH3), en tant que composant NET, est élevée à la fois chez les animaux septiques et les patients, et la présence de CitH3 est un biomarqueur diagnostique fiable de la septicémie. La présente étude visait à décrire un modèle murin standardisé de septicémie induite par CLP et à établir un biomarqueur sanguin fiable de la septicémie. Notre travail pourrait contribuer au diagnostic précoce et précis de la septicémie à l’avenir.

Introduction

La septicémie est définie comme un dysfonctionnement d’organe potentiellement mortel causé par une réponse dérégulée de l’hôte à l’infection¹, et le choc septique est la principale cause de décès dans les cas graves de septicémie². La septicémie et le choc septique causent des millions de décès dans le monde chaque année³. La clé pour améliorer les résultats des patients atteints de septicémie est l’initiation rapide de traitements tels que les antibiotiques⁴. La méthode de référence pour le diagnostic de la septicémie est la culture microbienne; Cependant, la culture micro....

Protocole

Toutes les expériences sur les animaux ont été réalisées conformément aux directives approuvées par le Comité d’examen des animaux de l’hôpital Xiangya et de l’Université centrale du Sud (n ° 202103149).

1. Préparation

1. Sélectionnez les souris C57BL/6J mâles (poids : 20-25 g ; âge : 8-12 semaines) et hébergez-les pendant 3 jours avant d’effectuer toute procédure.
2. Pesez la souris.
3. Anesthésiez la souris avec 1,5% d’isoflurane par inhalation et pincez les orteils pour vérifier la profondeur de l’anesthésie.
4. Fixez la souris sur le coussin chauffant. Appliquez une crème dépilatoire sur l’ab....

Résultats

Comme le montre la figure 2A, aucun CitH3 n’a été détecté dans le groupe simulé par transfert Western. La concentration sérique de CitH3 a augmenté de manière significative après la CLP, et cette augmentation a été bloquée par l’inhibition de la formation de TNE via l’administration de YW3-56, un inhibiteur de la MAP¹⁰. La figure 2B montre les concentrations de sérumCitH3 déterminées par ELISA. À 24 heures après la CLP, la concen.......

Discussion

CLP introduit des agents pathogènes dans l’abdomen pour créer un modèle préclinique de septicémie. Lors de l’exécution du CLP, il est important d’utiliser des conditions stériles pour éliminer l’interférence des bactéries exogènes et d’utiliser des dosages précis d’anesthésiques¹⁶. Les trois aspects techniques du CLP qui affectent la gravité et la reproductibilité du modèle de septicémie sont le pourcentage de caecum ligaturé, la taille de l’aiguille utilisée pour la ponction cæcale et le volume d.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
			21G
3,3',5,5'-tétraméthylbenzidine  ;	R& D Systems Inc	DY999
anticorps monoclonaux anti-CitH3	laboratoire auto-développé
anticorps polyclonal anti-CitH3	Abcam	ab5103
anticorps secondaire anti-lapin	Jackson ImmunoResearch	111-035-003
C57BL/6 souris	Xiangya School of Medicine, Central South University
Cl-amidine	Sigma Aldrich	SML2250
			dépilatoire
Dnase I	Sigma Aldrich	11284932001
isoflurane	Sigma-Aldrich	26675-46-7
kétoprofène	Sigma Aldrich	PHR1375
sutures en soie (4-0 & 6-0)
instruments chirurgicaux& nbsp ;
YW3-56	GLPBIO	GC48263

Aiguille crème