Des injections intravitréniennes ont été effectuées dans l’œil de mouton dans le but d’administrer une thérapie génique à médiation virale à la rétine.
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Article de méthode
Injections intravitréennes dans l’œil d’ovins
Dans cet article
Résumé
Résumé
Il existe plusieurs méthodes pour l’administration d’agents thérapeutiques à la rétine, y compris l’administration intravitréenne (IVT), sous-rétinienne, suprachoroïdienne, périoculaire ou topique. L’administration de médicaments IVT implique une injection dans l’humeur vitrée de l’œil, une substance gélatineuse qui remplit la chambre postérieure de l’œil et maintient la forme du globe oculaire. Bien que la voie IVT soit moins ciblée que l’administration sous-rétinienne, elle est beaucoup moins invasive et est largement utilisée en milieu clinique pour une gamme de maladies oculaires.
Nous avons précédemment démontré l’efficacité de l’administration intravitréenne d’un produit de thérapie génique médiée par un virus adéno-associé (AAV) (AAV9. CLN5) chez les ovins atteints d’une forme naturelle CLN5 de céroïde lipofuscinose neuronale (LCN). Les moutons affectés ont reçu une thérapie génique IVT dans un œil, l’autre œil non traité servant de contrôle interne. La structure et la fonction rétiniennes ont été maintenues dans l’œil traité jusqu’à 15 mois après le traitement, tandis que l’œil non traité a présenté une fonction progressivement déclinante et une atrophie sévère lors de l’examen post-mortem. Sur la base des études sur les moutons, le produit de thérapie génique CLN5 a été approuvé en tant que nouveau médicament expérimental (IND) candidat par la Food and Drug Administration des États-Unis en septembre 2021. Cet article détaille le protocole chirurgical pour l’administration IVT d’un vecteur viral thérapeutique à l’œil ovin.
Introduction
Plusieurs méthodes peuvent être utilisées pour administrer des agents thérapeutiques à la rétine, y compris l’administration intravitréenne (IVT), sous-rétinienne, suprachoroïdienne, périoculaire ou topique. Chaque voie d’administration implique de surmonter des barrières telles que la barrière hémato-rétinienne ou les membranes limitantes internes et externes et a des taux d’efficacité variables selon le médicament administré et la cible rétinienne spécifique 1,2.
L’administration de médicaments IVT implique une injection dans l’humeur vitrée de l’œil, une substance gélatineuse qui....
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Protocole
Tous les protocoles expérimentaux ont été approuvés par le comité d’éthique animale de l’Université Lincoln et sont conformes aux directives des National Institutes of Health des États-Unis pour le soin et l’utilisation des animaux dans la recherche et à la loi néo-zélandaise sur le bien-être des animaux (1999). Les moutons Borderdale ont été diagnostiqués à la naissance14 et maintenus dans les fermes de recherche de l’Université Lincoln. Trois brebis homozygotes (CLN5-/-) âgées de 3 mois ont reçu une seule injection de TIV à l’œil gauche, l’œil droit non traité agissant comme un contrôle interne. Les données d’électrorétinographie e....
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Résultats
L’efficacité de l’administration IVT d’un vecteur de thérapie génique CLN5 dans l’atténuation du dysfonctionnement et de la dégénérescence rétiniens chez les moutons atteints de LCN CLN5 a déjà été démontrée par ce groupe de recherche15. Les moutons atteints ont reçu une injection unique de 100 μL de CLN5 de CLN5 emballée dans un vecteur AAV sérotype 9 (AAV9) (AAV9. CLN5) dans un œil, l’œil controlatéral servant de contrôle interne non traité. La vision a été évaluée mensuellement à partir de l’âg.......
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Discussion
Les injections intravitréennes sont l’une des interventions chirurgicales les plus courantes en ophtalmologie humaine et se sont révélées efficaces pour administrer des thérapies géniques médiées par AAV à la rétine des moutons. Nous avions précédemment démontré l’efficacité de l’AAV9. La thérapie génique CLN5 administrée par voie intravitréenne dans l’atténuation du dysfonctionnement rétinien et de la dégénérescence chez les moutons avec CLN5 NCL15. On espère que l’application de cette voie d’adm.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.
Remerciements
Les auteurs tiennent à remercier le Dr Steve Heap (BVSc, CertVOphthal) pour son aide dans l’établissement de ce protocole et la réalisation des injections décrites par Murray et coll.15. Les auteurs reconnaissent également le financement de CureKids New Zealand, de la Canterbury Medical Research Foundation, de Neurogene Inc et de la Batten Disease Support and Research Association.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Seringue de sécurité à faible espace mort de 1 mL avec aiguille de 0,5 pouce fixée en permanence | Fisher Scientific, Auckland, Nouvelle-Zélande | 05-561-28 | Seringue de sécurité Covidien Monoject Tuberculin ou tube de |
| microcentrifugation similaire de 1,5 mL | Sigma Aldrich | HS4323 | Tubes d’autoclave à stériliser avant utilisation Machine d’anesthésie |
| avec banc à gaz et moniteur ; | Hyvet Anesthesia, Christchurch, Nouvelle-Zélande Gouttes | ||
| ophtalmiques antibiotiques ; | Teva Pharma Ltd, Auckland, Nouvelle-Zélande | Nom commercial : Chlorafast (0,5 % de chloramphénicol) | |
| BrightMount plus milieu de montage anti-décoloration | Abcam, Cambridge, Royaume-Uni | ab103748 | |
| DAPI (4&prime ; ,6-diamidino-2-phénylindole dihydrochloride) | Sigma Aldrich, St. Louis, Missouri, États-Unis | 10236276001 | |
| Sédatif | au diazépamIlium, Troy Laboratories Pty Ltd, Tauranga, Nouvelle-Zélande | 5 mg/mL | |
| Tubes endotrachéaux | Flexicare Medical Ltd, Mountain Ash, Royaume-Uni | Standard, à ballonnet. Tailles 7, 7,5 ou 8 selon la taille du mouton | |
| Spéculum oculaire | Capes Medical Ltd, Tauranga, Nouvelle-Zélande | KP151/14 | Nopa Barraquer-Colibri (10 mm) |
| Champ chirurgical fenestré | Amtech Medical Ltd, Whanganui, Nouvelle-Zélande | DI583 | Ou similaire ; |
| Filtres Interlab | , Auckland, Nouvelle-Zélande | 10, 200 et 1 000 & micro ; L ; | |
| Solution de formaldéhyde (37 %) | Fisher Scientific, Auckland, Nouvelle-Zélande | AJA809-2.5PL | Préparer jusqu’à 10 % dans de l’eau distillée avec 0,9 % NaCl |
| Chèvre anti-lapin Alexa Fluor 594 | Invitrogen Carlsbad, CA, USA | ; A-11012 | à une dilution de 1:500 |
| Isoflurane anesthésique | Attane, Bayer Animal Health, Auckland, Nouvelle-Zélande | ||
| Kétamine HCl anesthésique/analgésique | PhoenixPharm Distributors Ltd, Auckland, Nouvelle-Zélande | 100 mg/mL | |
| Laryngoscope (vétérinaire) | KaWe Medical, Danemark | Miller C lame, taille 2 | |
| Aiguilles ; | Capes Medical Ltd, Tauranga, Nouvelle-Zélande | 302025 | aiguilles hypodermiques BD, ou similaires |
| Anti-inflammatoires non stéroïdiens | Boehringer Ingelheim (NZ) Ltd, Auckland, Nouvelle-Zélande | 49402/008 | Nom commercial : Metacam 20 (20 mg/mL de méloxicam) |
| Pince non dentée | Capes Medical Ltd, Tauranga, Nouvelle-Zélande | AB864/16 | Ou similaire ; |
| Hémostat non dentée | Capes Medical Ltd, Tauranga, Nouvelle-Zélande | AA150/12 | ou similaire ; |
| Sérum de chèvre normal | Thermo Fisher Scientific, Christchurch, Nouvelle-Zélande | 16210072 | |
| Oxygène (médical) | Gaz BOC, Christchurch, Nouvelle-Zélande Bouteille | D2, code gaz 180 | |
| Saline tamponnée au phosphate ; | Thermo Fisher Scientific, Christchurch, Nouvelle-Zélande | 10010023 | Solution stérile et filtrée |
| povidone à l’iode | Capes Medical Ltd, Tauranga, Nouvelle-Zélande | 005835 | Nom commercial : Bétadine (10 % de povidone iodée) |
| Protéine acide fibrillaire gliale (GFAP) de lapinDako | , Glostrup, Danemark | Z0334 | Utilisation à une dilution de 1:2 500 |
| Virus adéno-associé auto-complémentaire de sérotype 9, contenant le promoteur de l’action bêta du poulet (CBh) et le CLN5 ovin optimisé pour les codons | de Caroline du Nord Vector Core, Caroline du Nord, États-Unis. | scAAV9/CBh-oCLN5opt | |
| Chlorure de sodium 0,9 % IV Solution | Capes Medical Ltd, Tauranga, Nouvelle-Zélande | AHB1322 | Nom commercial : solution saline ; |
| Antibiotiques sous-cutanés | Intervet Schering Plough Animal Health Ltd, Wellington, Nouvelle-Zélande | Nom commercial : Duplocillin LA (150 000 UI/mL de pénicilline procaïne et 115 000 UI/mL de pénicilline benzathine) | |
| Ciseaux chirurgicaux incurvés tranchants et émoussés. | Capes Medical Ltd, Tauranga, Nouvelle-Zélande | SSSHBLC130 | |
| Terumo Seringue Luer Lock | Amtech Medical Ltd, Whanganui, Nouvelle-Zélande | SH159/SH160 | Seringues stériles ; 10 mL pour l’aspiration des médicaments à induction, 20 mL pour l’aspiration de la solution saline |
| Virkon Disinfectant Powder | EBOS Group Ltd, Christchurch, NZ | 28461115 |
Références
- Himawan, E., et al. Drug delivery to retinal photoreceptors. Drug Discovery Today. 24 (8), 1637-1643 (2019).
- Murray, S. J., Mitchell, N. L. Ocular therapies for neuronal ceroid lipofuscinoses: More than meets the eye. Neural Regeneration Research.
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Réimpressions et autorisations
