Implantation et évaluation du mélanome dans la choroïde murine par tomographie par cohérence optique

Résumé

Le présent protocole décrit l’implantation et l’évaluation du mélanome dans la choroïde murine à l’aide de la tomographie par cohérence optique.

Résumé

L’établissement de modèles expérimentaux de mélanome choroïdien est difficile en termes de capacité à induire des tumeurs à la localisation correcte. De plus, les difficultés à observer le mélanome choroïdien postérieur in vivo limitent l’emplacement de la tumeur et l’évaluation de la croissance en temps réel. L’approche décrite ici optimise les techniques d’établissement du mélanome choroïdien chez la souris via une procédure d’injection de cellules sous-choroïdiennes B16LS9 en plusieurs étapes. Pour permettre une injection précise dans les petites dimensions de l’uvée de la souris, la procédure complète est réalisée au microscope. Tout d’abord, une péritomie conjonctivale se forme dans la région dorso-temporale de l’œil. Ensuite, un tractus dans l’espace sous-choroïdien est créé en insérant une aiguille à travers la sclérotique exposée. Ceci est suivi par l’insertion d’une aiguille émoussée dans le tractus et l’injection de cellules de mélanome dans la choroïde. Immédiatement après l’injection, l’imagerie non invasive par tomographie par cohérence optique (OCT) est utilisée pour déterminer l’emplacement et la progression de la tumeur. Le décollement de la rétine est évalué comme un prédicteur du site et de la taille de la tumeur. La méthode présentée permet l’induction reproductible du mélanome localisé choroïde chez la souris et l’imagerie en direct de l’évaluation de la croissance tumorale. En tant que tel, il fournit un outil précieux pour l’étude des tumeurs intraoculaires.

Introduction

Le mélanome uvéal (UM) est la tumeur maligne primitive intraoculaire la plus fréquente chez l’adulte. Environ 90 % des mélanomes oculaires proviennent de mélanocytes de la région choroïde du tractus uvéal¹. L’UM est une cause majeure de morbidité et de mortalité, car on estime que près de 50% des patients développent une maladie métastatique, le foie étant le principal site de métastases². Un traitement précoce des lésions primaires peut réduire le risque de métastases, mais aucun traitement efficace n’empêche la formation de métastases³.

Le traitement standard du mélan....

Protocole

Les expériences du protocole ont été approuvées par le Conseil national israélien de l’expérimentation animale et sont conformes à la déclaration de l’ARVO pour l’utilisation des animaux dans la recherche ophtalmique et visuelle. Des souris C57BL/6 femelles, âgées de 8 à 10 semaines, ont été utilisées pour la présente étude et ont été exposées à des cycles lumière-obscurité de 12/12 h. Les animaux ont été obtenus d’une source commerciale (voir le tableau des matériaux).

1. Culture cellulaire

1. Culture de cellules B16LS9 en milieu RPMI 1640, supplémentée avec 10 % de sérum bovin fœtal, 2 mM de L-glut....

Résultats

Les yeux ont été examinés par OCT immédiatement après l’injection des cellules B16LS9. Un décollement local de la rétine a été observé après l’injection. Les souris présentaient trois modèles de DR : focale (Figure 2, panneau supérieur), fuite vers le vitré (Figure 2, panneau du milieu) et DR étendue (Figure 2, panneau inférieur). La DR prolongée est probablement causée par des dommages causés par l’injection. Il y avait un.......

Discussion

Le mélanome uvéal est une maladie dévastatrice pour laquelle de nouvelles approches thérapeutiques sont grandement nécessaires. Cependant, la recherche sur le mélanome uvéal et les traitements potentiels est limitée par les défis techniques des modèles animaux de mélanome uvéal ^1,25. Les tumeurs oculaires, qui sont induites par injection intraoculaire de cellules cancéreuses, sont très variables à la fois dans la localisation et la taille, probablement en raison .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
10 &mu ; L seringue en verre (Hamilton Co., Bonaduz, Suisse)	Aiguilles Hamilton	721711
30 G	BD Microbalance	2025-01
Chlorhydrate d’atipamézole	Orion Phrma
B16LS9	cellules de Hans Grossniklaus USA
Buprénorphine  ;	richter pharma	102047
C57BL/6 souris femelles	Envigo
Mélange de vitamines essentielles	satorius	01-025-1A
Sérum fœtal bovin	rhénium	10270106
HEPES	satorius	03-025-1B
Hydroxyéthylcellulose 1,4 % gouttes ophtalmiques	Fisher Pharmaceutical	390862
Logiciel de segmentation OCT InSight  ;	Phoenix Micron, Inc.
Kétamine	bremer pharma GMBH (medimarket)	17889
L-glutamine	satorius	03-020-1B
Medetomidine  ;	zoetis (vetmarket)	102532
Ofloxacine 0,3 % gouttes ophtalmiques	allergan	E92170
Tomographie par cohérence optique  ;	Phoenix Micron, Inc.
Oxybuprocaïne 0,4 %	Fisher Pharmaceutical	393050
Pénicilline-streptomycine-amphotéracine	satorius	03-033-1B
Solution saline tamponnée au phosphate (PBS)  ;	satorius	02-023-1a
RPMI cell media	satorius	01-104-1A
Pyruvate de sodium	satorius	03-042-1B
Microscope chirurgical	Zeiss	OPMI-6 CFC
Tropicamide 0,5 %	Fisher Pharmaceutical	390723