Ex Vivo Expansion et manipulation génétique de cellules souches hématopoïétiques de souris dans des cultures à base d’alcool polyvinylique

Hwei Minn Khoo; Grace A. Meaker; Adam C. Wilkinson

doi:10.3791/64791

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Article de méthode

Ex Vivo Expansion et manipulation génétique de cellules souches hématopoïétiques de souris dans des cultures à base d’alcool polyvinylique

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DOI :

10.3791/64791

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10 février 2023

Hwei Minn Khoo^*¹ , Grace A. Meaker^*¹ , Adam C. Wilkinson¹

¹MRC Weatherall Institute of Molecular Medicine, University of Oxford

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

On présente ici un protocole pour initier, maintenir et analyser des cultures de cellules souches hématopoïétiques de souris en utilisant une expansion ex vivo à base d’alcool polyvinylique, ainsi que des méthodes pour les manipuler génétiquement par transduction lentivirale et électroporation.

Résumé

Les cellules souches hématopoïétiques multipotentes (CSH) autorenouvelables sont un type cellulaire important en raison de leur capacité à soutenir l’hématopoïèse tout au long de la vie et à reconstituer l’ensemble du système sanguin après la transplantation. Les CSH sont utilisées cliniquement dans les thérapies de transplantation de cellules souches, qui représentent un traitement curatif pour une gamme de maladies du sang. Il existe un intérêt considérable à la fois pour la compréhension des mécanismes qui régulent l’activité des CSH et de l’hématopoïèse, et pour le développement de nouvelles thérapies basées sur les CSH. Cependant, la culture stable et l’expansion des CSH ex vivo ont été un obstacle majeur à l’étude de ces cellules souches dans un système ex vivo traitable. Nous avons récemment développé un système de culture à base d’alcool polyvinylique qui peut soutenir l’expansion à long terme et à grande échelle des CSH de souris transplantables et des méthodes pour les modifier génétiquement. Ce protocole décrit les méthodes de culture et de manipulation génétique des CSH de souris par électroporation et transduction lentivirale. Ce protocole devrait être utile à un large éventail d’hématologues expérimentaux intéressés par la biologie des CSH et l’hématopoïèse.

Introduction

Le système hématopoïétique soutient une gamme de processus essentiels chez les mammifères, de l’apport d’oxygène à la lutte contre les agents pathogènes, en passant par des types de cellules sanguines et immunitaires spécialisées. La production sanguine continue (hématopoïèse) est nécessaire pour soutenir l’homéostasie du système sanguin, qui est soutenue par les cellules souches et progénitrices hématopoïétiques (HSPC)¹. La cellule hématopoïétique la plus primitive est la cellule souche hématopoïétique (CSH), qui possède des capacités uniques d’auto-renouvellement et de différenciation multilignée ^2,3