Isolement et culture de cellules souches humaines dérivées du tissu adipeux à l’aide d’une méthode innovante sans xénogène pour la thérapie humaine

Martino Guiotto; Silvia Palombella; Stefania Brambilla; Lee Ann Applegate; Mathis Riehle; Andrew Hart; Wassim Raffoul; Pietro Giovanni di Summa

doi:10.3791/65104

Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.

Article de méthode

Isolement et culture de cellules souches humaines dérivées du tissu adipeux à l’aide d’une méthode innovante sans xénogène pour la thérapie humaine

4.4K vues

⸱

DOI :

10.3791/65104

⸱

3 février 2023

Martino Guiotto^*¹^,⁴ , Silvia Palombella^*² , Stefania Brambilla² , Lee Ann Applegate³ , Mathis Riehle⁴ , Andrew Hart⁴ , Wassim Raffoul¹ , Pietro Giovanni di Summa¹

¹Department of Plastic, Reconstructive and Hand Surgery, Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (CHUV, ²Cell and Tissue Engineering Lab, IRCCS Ospedale Galeazzi Sant'Ambrogio, ³Unit of Regenerative Therapy, Plastic, Reconstructive and Hand Surgery, Department of Musculoskeletal Medicine, Lausanne University Hospital, ⁴Centre for the Cellular Microenvironment, University of Glasgow

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Les produits xénogéniques (chimiques ou d’origine animale) introduits dans les étapes de préparation/manipulation de la thérapie cellulaire sont associés à un risque accru de réactivité immunitaire et de transmission pathogène chez les patients hôtes. Ici, une méthode complète sans xénogénétique pour l’isolement et l’expansion in vitro de cellules souches humaines dérivées du tissu adipeux est décrite.

Résumé

Compte tenu de l’impact croissant de la thérapie par cellules souches, des préoccupations en matière de biosécurité ont été soulevées concernant la contamination potentielle ou la transmission d’infections due à l’introduction de produits d’origine animale lors de manipulations in vitro . Les composants xénogéniques, tels que la collagénase ou le sérum bovin fœtal, couramment utilisés pendant les étapes d’isolement et d’expansion cellulaires pourraient être associés aux risques potentiels de réactivité immunitaire ou d’infection virale, bactérienne et à prion chez les patients receveurs. Conformément aux directives de bonnes pratiques de fabrication, la dissociation chimique des tissus doit être évitée, tandis que le sérum bovin fœtal (FBS) peut être remplacé par des suppléments sans xénophobie. De plus, pour assurer la sécurité des produits cellulaires, la définition de méthodes plus fiables et reproductibles est importante. Nous avons développé une méthode innovante, totalement exempte de xénophobie, pour l’isolement et l’expansion in vitro de cellules souches humaines dérivées du tissu adipeux sans altérer leurs propriétés par rapport aux protocoles standard de culture FBS de collagénase. Ici, des cellules souches dérivées du tissu adipeux humain (hASC) ont été isolées du tissu adipeux abdominal. L’échantillon a été haché mécaniquement avec des ciseaux / un scalpel, micro-disséqué et dispersé mécaniquement dans une boîte de Petri de 10 cm, et préparé avec des incisions au scalpel pour faciliter la fixation des fragments de tissu et la migration des hASC. Après les étapes de lavage, les hASC ont été sélectionnés en raison de leur adhérence plastique sans digestion enzymatique. Les hASCs isolés ont été cultivés avec un milieu supplémenté en lysat plaquettaire humain sans héparine à 5% et détachés avec un substitut de trypsine sans animaux. Conformément aux directives des bonnes pratiques de fabrication (BPF) sur la production de produits cellulaires destinés à la thérapie humaine, aucun antibiotique n’a été utilisé dans les milieux de culture.

Introduction

Au cours des dernières décennies, la demande croissante de traitements thérapeutiques innovants a donné lieu à des efforts et à des investissements de ressources importants dans le domaine de la médecine translationnelle¹. Les produits à base de cellules sont associés à des risques déterminés par la source cellulaire, le processus de fabrication (isolement, expansion ou modification génétique) et les suppléments non cellulaires (enzymes, facteurs de croissance, suppléments de culture et antibiotiques), et ces facteurs de risque dépendent de l’indication thérapeutique spécifique. La qualité, la sécurité et l’efficacité du produit final pourraien....