Une méthode précise et quantifiable pour recueillir l’hémolymphe de petits arthropodes

Résumé

Nous décrivons une méthode pour recueillir efficacement l’hémolymphe quantifiable de petits arthropodes pour une analyse ultérieure.

Résumé

Les arthropodes sont connus pour transmettre une variété de virus d’importance médicale et agricole par leur hémolymphe, qui est essentielle à la transmission du virus. La collecte d’hémolymphe est la technologie de base pour étudier les interactions virus-vecteur. Ici, nous décrivons une méthode nouvelle et simple pour la collecte quantitative de l’hémolymphe de petits arthropodes en utilisant Laodelphax striatellus (la petite cicadelle brune, SBPH) comme modèle de recherche, car cet arthropode est le principal vecteur du virus de la bande du riz (VRS). Dans ce protocole, le processus commence par pincer doucement une jambe de l’arthropode congelé avec une pince à épiler à pointe fine et presser l’hémolymphe hors de la plaie. Ensuite, une micropipette simple composée d’un capillaire et d’un bulbe de pipette est utilisée pour recueillir l’hémolymphe transsudative de la plaie selon le principe des forces capillaires. Enfin, l’hémolymphe recueillie peut être dissoute dans un tampon spécifique pour une étude plus approfondie. Cette nouvelle méthode de collecte de l’hémolymphe de petits arthropodes est un outil utile et efficace pour la poursuite des recherches sur les arbovirus et les interactions vecteur-virus.

Introduction

Les virus animaux et végétaux peuvent être transmis par les arthropodes, et ces virus constituent une grave menace pour la santé humaine et causent d’énormes pertes économiques dans l’agriculture ^1,2,3. Il est important de noter que l’hémolymphe des arthropodes, qui sert de système circulatoire et d’élément vital du système immunitaire chez les arthropodes, joue un rôle important dans la régulation de la transmission des arboviraux. Les virus acquis par les intestins des arthropodes ne sont transportés vers d’autres tissus qu’après avoir réussi à s’échapper de l’environnement....

Protocole

1. Élevage d’insectes

1. Augmenter les SBPH utilisés dans cette expérience dans les plants de riz (Oryza sativa cv. Nipponbare). Planter 20 plants de riz dans un incubateur (65 mm x 200 mm) et pousser à 25 °C sous une photopériode de 16 h de lumière / 8 h d’obscurité.

2. Dissection des SBPH pour le prélèvement de l’hémolymphe

1. Mettez les SBPH dans un tube à centrifuger et placez-les dans un bain de glace pendant 10-30 min.
   REMARQUE: Ne placez pas les SBPH dans le bain de glace pendant moins de 10 minutes, sinon les insectes pourraient revivre.
2. Placer une SBPH cong....

Résultats

Modèle de micropipette et collecte d’hémolymphe
Nous avons développé une micropipette simple dont l’action est basée sur les forces capillaires du tube capillaire. La micropipette est composée d’un tube capillaire et d’une ampoule de pipette (Figure 1A). Les tubes capillaires sont disponibles en différentes tailles de volume allant de 1 μL à 20 μL, et les volumes de tubes capillaires sont sélectionnés en fonction des exigences. Les tubes capillaires avec des volumes plus .......

Discussion

L’hémolymphe est le milieu du système circulatoire chez les arthropodes, et les arbovirus ne peuvent envahir d’autres tissus d’arthropodes que s’ils sont capables de survivre à l’environnement hostile de l’hémolymphe. La collecte d’un échantillon d’hémolymphe de haute qualité est la première étape de l’étude des interactions vecteur-virus qui se produisent dans l’hémolymphe. Il a été rapporté que l’hémolymphe d’insecte peut être obtenue à partir de plusieurs sites sur le corps de l’insecte, y compris une plaie sur la pat.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
10 % SDS-PAGE Gel protéique	Bio-rad	4561035	Séparation et détection
des protéines 4 % paraformaldéhyde	Solarbio	P1110	Pour la fixation des cellules ou des tissus  ;
Réactif de colorant Bradford	Bio-rad	5000205	Détection de concentration en protéines
Capillaire	Hirschmann	9000101	Pour la collecte de l’hémolymphe
Chambre de comptage	ACMEC	AYA0810	Comptage des hémocytes
Lame	de verre Gitoglas	10127105A	Pour la rétention des insectes
Lame de verre recouverte de silane	Sigma	S4651-72EA	Pour la conservation d’échantillons de microscope
Réactif anti-décoloration en or avec DAPI	Invitrogen	P36935	Coloration du noyau
Verre de couverture du microscope	Gitoglas	10212424C	Pour l’observation microscopique
Poire de pipette	Hirschmann	9000101	Pour la collecte de l’hémolymphe
Logiciel Prism 8.0 Logiciel	GraphPad	/	Analyses statistiques
Stéréomicroscope	Motic	SMZ-168	Pour la dissection d’insectes
Pince à épiler	Tianld	P5622	Pour la dissection
d’insectes Microscope inversé Zeiss	Zeiss	Observer Z1	Observation des hémocytes

cellulaire