Method Article

Procédure d’opération et précautions de la thérapie d’acupuncture par enrobage de fil dans la maladie d’Alzheimer

DOI:

10.3791/65895

May 10th, 2024

* These authors contributed equally

In This Article

Summary

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Cette étude présente un protocole de thérapie d’acupuncture par encastrement de fils chez des rats semblables à la maladie d’Alzheimer.

Abstract

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La thérapie par enrobage de fil (TEAT) est un traitement qui prévient et gère les maladies en insérant une suture biodégradable dans un point d’acupuncture, fournissant une stimulation durable. Le TEAT est une approche simple qui évite l’inconfort de l’acupuncture régulière et procure des effets thérapeutiques durables. Cet article traite de l’impact potentiel du TEAT sur les capacités d’apprentissage et de mémoire des rats présentant des symptômes semblables à ceux de la maladie d’Alzheimer. Étant donné que la dégénérescence neuronale et les troubles cognitifs induits chimiquement chez les rats ne reflètent pas entièrement les véritables changements pathologiques observés dans la maladie d’Alzheimer. Par conséquent, notre groupe de recherche a désigné ces manifestations comme des symptômes similaires à ceux de la maladie d’Alzheimer. Un protocole a été établi pour décrire la sélection des points d’acupuncture, le processus d’opération et les précautions nécessaires pour la tête et le bas du dos. L’expérience a été menée sur trois groupes : un groupe témoin, un groupe modèle et un groupe TEF, chacun contenant 6 rats. Pour induire des symptômes semblables à ceux de la maladie d’Alzheimer, des rats ont reçu une injection intrapéritonéale de D-galactose pendant 7 semaines (49 jours). Les rats du groupe TEAT ont reçu un traitement d’enrobage d’acupoint catgut. Après la période d’intervention, un labyrinthe d’eau Morris (MWM) a été réalisé pour évaluer l’apprentissage et la mémoire des rats. Par la suite, les rats ont été sacrifiés et leur tissu cérébral a été examiné. Un examen histologique a été réalisé pour comprendre les effets du TEAT sur la pathologie des rats présentant des symptômes de la maladie d’Alzheimer. Cette étude suggère que le TEAT peut améliorer l’apprentissage et la mémoire chez les rats présentant des symptômes semblables à ceux de la maladie d’Alzheimer, indiquant une nouvelle approche de traitement potentiellement prometteuse pour cette maladie neurodégénérative.

Introduction

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L’acupuncture à enrobage de fil (TEA) consiste à intégrer du catgut ou des sutures résorbables dans des points d’acupuncture à l’aide d’une aiguille spéciale. Cette technique a un effet prolongé jusqu’à ce que les sutures soient absorbées et dégradées. Il fournit une stimulation continue et soutenue des points d’acupuncture pendant une semaine ou plus1, obtenant un résultat comparable sans avoir besoin de procédures répétitives quotidiennes2. Cela réduit le nombre de patients cherchant un traitement médical, économisant ainsi dans une certaine mesure les ressources médicales. Ces dernières années, le TEAT a été de plus en plus utilisé dans divers domaines médicaux en Chine, notamment la médecine interne, la médecine externe, la dermatologie, les traits du visage, la gynécologie et la pédiatrie3. Des études ont montré qu’il est efficace pour produire des effets fiables à long terme pour certaines maladies chroniques et complexes, telles que l’épilepsie4 et la paralysie du nerf facial5. Il présente les avantages d’un traumatisme minimal et d’une utilisation simple6. De plus, les coûts de traitement des TILS sont inférieurs à ceux de l’électroacupuncture (EA)7. Par conséquent, le TEAT est de plus en plus valorisé dans la recherche clinique et scientifique.

La maladie d’Alzheimer (MA) est une maladie neurodégénérative qui progresse avec le temps. Son processus physiopathologique commence à s’accumuler environ 20 ans avant l’apparition des symptômes cliniques, mais son mécanisme n’est pas encore entièrement compris8. Compte tenu de la disponibilité limitée de médicaments efficaces contre la maladie d’Alzheimer, la recherche se concentre de plus en plus sur les stades prodromiques et précliniques de la maladie9. La prévention est une stratégie cruciale pour lutter contre le développement et la progression de la maladie d’Alzheimer 9,10. Ces dernières années, la médecine traditionnelle chinoise (MTC) a fait des progrès significatifs et devrait offrir de nouvelles possibilités pour prévenir et traiter la MA 11,12. En tant que sous-type d’acupuncture, le TEAT est préféré aux autres thérapies en raison de sa large gamme de traitements, de son traumatisme minimal, de son fonctionnement simple, de sa faible fréquence de traitement et de son efficacité durable6. De nouvelles publications suggèrent que les TEAT pourraient être bénéfiques pour les personnes atteintes d’obésité13,14, de diabète15, d’insomnie16, d’ostéoporose postménopausique17 et de dépression18, qui sont tous des facteurs de risque de la MA. Il améliore également la sénescence chez les rats vieillissants en régulant la mitophagie2, améliore l’apprentissage spatial et les troubles de la mémoire, atténue les dommages pathologiques de l’hippocampe et inhibe la réponse inflammatoire chez les rats atteints de démence vasculaire (VD)19. Il m’a semblé intéressant de déterminer si le TEAT pouvait également agir sur les processus pathologiques au cours de la MA.

La recherche actuelle manque d’uniformité et de normalisation dans plusieurs éléments critiques du fonctionnement du TEAT, notamment la méthode d’intégration, l’outil d’intégration, le fil et la période d’intervalle d’intégration. Ce manque de standardisation affecte l’évaluation de l’effet de la thérapie et l’exploration des mécanismes connexes et limite la promotion et la communication externes. Des recherches antérieuresont démontré que l’administration intrapéritonéale de D-galactose (D-gal) peut induire des changements pathologiques semblables à ceux de la maladie d’Alzheimer chez les rats, y compris la dégénérescence neuronale et les troubles cognitifs. De plus, il a été démontré que l’électroacupuncture à Baihui (GV20) et Shenshu (BL23) améliore efficacement le déclin cognitif, atténue la neuroinflammation et réduit les dommages neuronaux. Cette étude prend l’exemple de rats modèles semblables à la maladie d’Alzheimer pour présenter la sélection des points d’acupuncture et le processus de fonctionnement et les précautions du TEAT dans ce modèle. Il traite des éléments opérationnels critiques du TEAT dans la recherche expérimentale afin de fournir une référence pour les études futures.

Protocol

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Toutes les expériences ont été menées conformément au Guide des National Institutes of Health pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire et ont été approuvées par le Comité de gestion et d’utilisation des animaux de laboratoire du Centre provincial de contrôle et de prévention des maladies du Hubei. Au total, 18 rats femelles Sprague-Dawley (SD) âgés de 3 mois pesant de 220 à 250 g ont été utilisés pour le test. Tous les rats ont été maintenus sur un cycle lumière/obscurité de 12 heures à 23 ± 1 °C et 40 à 50 % d’humidité, avec un accès libre à la nourriture et à l’eau. Après une période d’acclimatation d’une semaine, au cours de laquelle les rats ont été autorisés à s’habituer aux conditions du laboratoire, les expériences ont été lancées.

1. Développement du modèle

  1. Le plan d’expérience est illustré à la figure 1. Répartissez au hasard 18 rats femelles Sprague-Dawley de 3 mois pesant de 220 à 250 g en groupes témoins, modèles et trayons. Chaque groupe est composé de 6 rats.
  2. Injecter quotidiennement du D-galactose (D-gal ; 120 mg/kg/jour), tandis que le groupe témoin reçoit des injections salines (120 mg/kg/jour), pendant 7 semaines (49 jours) dans la région ventrale inférieure22. L’injection doit être administrée quotidiennement entre 8h00 et 9h00.
  3. Pesez les rats le 7ème jour de chaque semaine entre 9h00 et 10h00. L’expérience a duré 49 jours. Enterrez les fils tous les 14jours les 14, 28et 42e jours. Fixez l’heure de chaque intégration de fil entre 9h00 et 12h00.
  4. Poursuivre l’administration intrapéritonéale de D-galactose pendant 7 semaines pour induire des manifestations pathologiques liées à la maladie d’Alzheimer chez le rat22.

2. Préparation pour le trayon

  1. Stérilisez les instruments chirurgicaux tels que les ciseaux ophtalmiques, les plateaux et les pinces à épiler et désinfectez-les. Nettoyez soigneusement les surfaces de l’environnement de la salle d’opération et désinfectez.
  2. Préparez la plate-forme chirurgicale en posant un petit coussin chauffant pour animaux à plat sur la surface, suivi d’un drapage avec une serviette stérile. Ensuite, placez la planche de commande nettoyée et désinfectée en douceur sur le dessus, avec le côté rugueux vers le haut. Ensuite, allumez le coussin chauffant et réglez la température à 32 °C.
  3. Pour l’intervention, choisissez une aiguille d’enrobage de fil jetable n° 6 d’un diamètre de 0,6 mm et une suture chirurgicale résorbable 5-0 (suture au collagène) d’une longueur de 2 cm. Coupez la suture chirurgicale résorbable 5-0 de 2 cm en morceaux de 0,5 cm et 0,2 cm à l’aide de ciseaux ophtalmiques. Trempez le fil coupé dans une solution saline à 0,9 % et réservez.
  4. Lavez-vous les mains à l’eau et au savon pendant 20 secondes, puis séchez-les. Ensuite, portez des gants stériles.
  5. Anesthésier les rats à l’aide d’une injection IP d’hydrate de chloral (300 mg/kg) dans la région ventrale inférieure, en veillant à ce que l’anesthésie soit confirmée lorsque les animaux ne répondent pas dans un plan chirurgical, en fonction de l’absence de réponse à un test de pincement des orteils, et en maintenant un état physiologique stable. De plus, pour prévenir la sécheresse de la cornée et les dommages potentiels pendant que les rats sont sous anesthésie, appliquez une quantité généreuse de pommade vétérinaire sur les yeux, en veillant à ce qu’ils restent lubrifiés tout au long de la procédure.
    REMARQUE : Il est recommandé d’anesthésier le rat, car il est douloureux pour lui de ressentir le piercing.

3. Opération d’encastrement de fils pour Baihui (GV 20)

  1. Localisez le point d’acupuncture Baihui (GV 20) chez le rat au milieu droit de l’os pariétal (Figure 2A). Positionnez les rats de manière à exposer complètement la tête, avec les oreilles tirées vers l’avant pour se rapprocher de la méthode utilisée chez les humains pour connecter les lignes de l’apex de l’oreille. Identifiez le point Baihui (GV 20) en palpant la crête longitudinale centrale du crâne et en localisant l’emplacement à peu près à son milieu. Confirmez davantage ce point d’acupuncture au niveau où les oreilles entreraient en contact avec la tête si elles étaient posées à plat, en s’alignant avec l’intersection de la suture sagittale et de l’os pariétal. Utilisez un marqueur pour marquer Baihui (GV 20).
  2. Rasez la zone de la tête autour du point d’acupuncture du rat à l’aide d’une tondeuse (généralement une tondeuse à barbe électrique pour hommes).
  3. Avant la chirurgie, désinfectez les points d’acupuncture et la peau environnante en appliquant une solution d’iode à 0,5 % en mouvements circulaires, en commençant par le centre et en se déplaçant vers l’extérieur. Par la suite, effectuez un triple processus de désinfection : utilisez l’iodophor 3x, chacun suivi d’une application d’alcool pour assurer une bonne décontamination et préparer le site pour la technique aseptique.
  4. À l’aide d’une pince, clampez la suture chirurgicale résorbable de 0,2 cm imbibée de solution saline et placez-la à l’extrémité avant du tube de l’aiguille. Ensuite, connectez-le à l’âme de l’aiguille.
  5. Pincez la zone autour de Baihui (GV 20) avec le pouce et l’index d’une main, tout en tenant l’aiguille de l’autre.
  6. Insérez l’aiguille horizontalement et rapidement à un angle de 15° par rapport à la surface de la peau, à 0,1 cm sous le point Baihui (GV 20), tout en pinçant la peau (Figure 3A).
  7. Une fois que la pointe de l’aiguille atteint 0,1 cm au-dessus du point Baihui (GV 20), poussez le noyau de l’aiguille tout en rétractant le tube de l’aiguille pour implanter complètement la suture chirurgicale résorbable de 0,2 cm dans le tissu sous-cutané du point d’acupuncture (Figure 3B).
  8. Retirez lentement l’aiguille, en vous assurant qu’aucune suture n’est exposée. Appuyez sur le trou de l’aiguille avec du coton sec stérile pendant 10 secondes pour éviter les saignements. Si le fil est à l’extérieur du corps après avoir intégré la ligne aux points d’acupuncture, extrayez-le et réopérez-le.

4. Opération d’encastrement de fils pour Shenshu (BL 23)

  1. Le point d’acupuncture Shenshu (BL 23) chez le rat est situé à 5 mm latéralement de la 2e vertèbre lombaire (Figure 2B). Tout d’abord, localisez la 6e vertèbrelombaire en fonction du tubercule de la hanche du rat. Localisez ensuite la 2e vertèbrelombaire en comptant vers le haut quatre corps vertébraux. Shenshu (BL 23) sera de 5 mm latéral à23.
    REMARQUE : La combinaison des points d’acupuncture Baihui (GV 20) et Shenshu (BL 23) est un ensemble fréquemment utilisé dans la théorie de la médecine traditionnelle chinoise (MTC) pour la prévention et le traitement des troubles cérébraux. Comme l’ont confirmé des recherches antérieures20,21, cette association de points d’acupuncture a été établie pour son efficacité.
  2. Utilisez un marqueur pour marquer Shenshu (BL 23). Rasez le dos et la taille autour du point d’acupuncture du rat à l’aide d’une tondeuse (généralement une tondeuse à barbe électrique).
  3. Avant la chirurgie, désinfectez les points d’acupuncture et la peau environnante en appliquant une solution d’iode à 0,5 % dans un mouvement circulaire, en commençant par le centre et en se déplaçant vers l’extérieur. Par la suite, effectuez un triple processus de désinfection : utilisez l’iodophore trois fois, chacune suivie d’une application d’alcool pour assurer une bonne décontamination et une préparation du site pour la technique aseptique.
  4. À l’aide d’une pince, clampez la suture chirurgicale résorbable de 0,5 cm imbibée de solution saline et placez-la à l’extrémité avant du tube de l’aiguille. Ensuite, connectez-le à l’âme de l’aiguille.
  5. Étirez la peau avec l’index et le majeur de la main pressante ou le pouce et l’index. Tenez l’aiguille avec la main perforatrice.
  6. Insérez rapidement l’aiguille perpendiculairement dans le point situé à 0,25 cm sous le Shenshu (BL 23). Voir la figure 4A.
  7. Une fois que la pointe de l’aiguille atteint 0,5 cm sous la peau, ajustez la pointe de l’aiguille en rendant la direction d’insertion centripète, formant un angle de 45° avec la surface de la peau et insérez obliquement 0,5 cm (Figure 4B).
    REMARQUE : Il est important de faire preuve de prudence lors de l’aiguille du Shenshu (BL 23), qui est situé près du rein. Une insertion profonde ou un soulèvement et une poussée répétés de l’aiguille peuvent causer des dommages. Par conséquent, nous recommandons une profondeur d’insertion d’environ 0,3 à 0,6 cm.
  8. Poussez l’âme de l’aiguille tout en rétractant le tube et implantez complètement la suture chirurgicale résorbable de 0,5 cm dans le tissu musculaire du point d’acupuncture (Figure 4C).
  9. Retirez lentement l’aiguille en vous assurant qu’aucune suture n’est exposée. Ensuite, appuyez sur le trou de l’aiguille avec du coton sec stérile pendant 10 secondes pour éviter les saignements. Si le fil est à l’extérieur du corps après avoir intégré la ligne aux points d’acupuncture, extrayez-le et réopérez-le.

5. Soins postopératoires

  1. En postopératoire, placez le rat sur un petit coussin chauffant pour animaux réglé à une température de 32°C pour faciliter la récupération de l’anesthésie. Assurez-vous que l’animal est pleinement conscient et que son état est satisfaisant avant de le remettre dans son enclos.
  2. Après la chirurgie, observez des signes de réponses inflammatoires stériles dans la zone touchée dans la semaine. Ces signes peuvent inclure une rougeur, un gonflement ou un écoulement semblable à du pus. En règle générale, ces symptômes ne nécessitent aucun traitement. Cependant, s’il y a une quantité excessive d’exsudat, drainez et désinfectez la zone touchée. Dans de tels cas, appliquez une pommade à l’érythromycine jusqu’à ce que la plaie se rétablisse complètement.

6. Tests comportementaux et examen histologique

  1. Après l’intervention, à la semaine 8, effectuez l’expérience Morris Water Maze (MWM) 2,24 pour évaluer leurs capacités d’apprentissage et de mémoire. Effectuez les épreuves d’apprentissage sur 5 jours, à raison de quatre épreuves par jour. Administrez ensuite un essai de sonde après 24 heures à compter du dernier jour d’acquisition.
  2. Effectuer des comparaisons statistiques à l’aide d’un logiciel d’analyse statistique. Analyser les données comportementales de la capacité d’apprentissage par analyse de variance à sens unique (ANOVA) et test de Tukey post-hoc. Évaluez la signification des données de latence d’échappement par analyse de variance à mesures répétées (ANOVA) bidirectionnelle suivie du test de Bonferroni post-hoc. Une valeur de p <0,05 est considérée comme significative dans tous les tests.
  3. Après l’évaluation comportementale, anesthésier les rats comme ci-dessus et euthanasier par injections intrapéritonéales de 150 mg/kg de poids corporel de pentobarbital sodique.
  4. Fixer le cerveau du rat par perfusion à l’aide de 4% de paraformaldéhyde perfusé par le système vasculaire25.
    1. Insertion et fixation de l’aiguille de gavage
      1. Préparez une aiguille 12G et assurez-vous qu’elle est droite et adaptée au passage dans le ventricule du rat. Localisez le ventricule du rat, qui est généralement le ventricule gauche, et insérez l’aiguille à travers celui-ci dans l’aorte ascendante. Cette étape nécessite de la précision et une bonne compréhension de l’anatomie du rat.
      2. Une fois l’aiguille en place, utilisez un hémostat pour serrer l’aiguille de gavage près du point où elle pénètre dans l’aorte. Cela aidera à sécuriser l’aiguille et à l’empêcher de bouger.
      3. Assurez-vous que la pince est suffisamment serrée pour maintenir l’aiguille en toute sécurité, mais pas au point d’endommager l’aorte ou d’entraver la circulation sanguine. L’aiguille du gavage doit rester dans l’aorte ascendante tout au long de la procédure pour maintenir une bonne perfusion.
    2. Perfusion avec une solution saline normale
      1. Préparez une seringue de 50cc sans aiguille pour la perfusion. Fixez l’autre extrémité de l’aiguille du gavage, qui se trouve à l’extérieur du corps du rat, à la seringue remplie de solution saline normale.
      2. Faites une petite incision pour couper l’appendice auriculaire droit afin de permettre au sang de s’écouler du cœur. Cette étape permet de s’assurer que le sang est déplacé par la solution saline pendant la perfusion.
      3. Commencez à injecter la solution saline normale dans l’aorte ascendante à un rythme régulier et constant. Cela permettra d’évacuer le sang et de préparer les tissus à la fixation.
      4. Surveillez le liquide qui sort de l’appendice auriculaire droit et soyez prêt à changer la seringue au besoin pour maintenir une perfusion continue de solution saline fraîche.
        placé, préparez-vous à perfuser avec le fixateur.
      5. Remplacez la seringue contenant du sérum physiologique par une seringue contenant 4 % de paraformaldéhyde, un fixateur couramment utilisé en histologie. Procéder à la perfusion à l’aide du paraformaldéhyde pour fixer les tissus en place pour le traitement et l’analyse ultérieurs.
        REMARQUE : Tout au long de cette procédure, il est crucial de maintenir des techniques d’asepsie pour prévenir l’infection et de manipuler le rat en douceur pour minimiser les blessures. De plus, tout le personnel impliqué doit être formé à la technique pour assurer l’uniformité et l’efficacité.
  5. Retirez la cervelle de rat et placez-la dans un flacon contenant 4% de paraformaldéhyde pendant 24-48 h à 4 °C25,26. Effectuer la déshydratation à l’éthanol et le traitement au xylène étape par étape, suivis de coupes coronales continues conventionnelles (4-5 μm) pour la mesure. Évaluer la morphologie et la perte de neurones de l’hippocampe dans chaque groupe à l’aide de la coloration à l’hématoxyline et à l’éosine (H&E) (200x).
    REMARQUE : Aucune nécropsie n’a été effectuée chez les rongeurs pour déterminer la présence de lésions gastro-intestinales (GI), en raison de l’absence de signes cliniques indiquant des troubles gastro-intestinaux tout au long de la période expérimentale. Les animaux n’ont présenté aucun effet indésirable manifeste qui suggérerait la présence de telles pathologies.

Results

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Cet article présente la méthode de fonctionnement spécifique du TEAT chez les rats de type Alzheimer. Il traite des éléments opérationnels critiques du TEAT dans la recherche expérimentale afin de fournir une référence pour les études futures.

La TEAT améliore l’apprentissage chez les rats semblables à la maladie d’Alzheimer
Comme l’illustre l’organigramme (figure 5), pendant la période d’entraînement adaptatif, on a observé que les rats de chaque groupe observaient l’environnement environnant tout en nageant. L’analyse de la vitesse de nage (figure 6) n’a montré aucune différence significative entre les groupes, indiquant des niveaux de référence cohérents de vitesse de mouvement et de perception visuelle. Les différences observées dans les résultats expérimentaux n’étaient pas dues à des variations dans la capacité de mouvement ou la perception visuelle.

Les rats ont suivi 5 jours de formation à la recherche de plateformes. Dans la figure 7A, on peut observer que les trajectoires de mouvement de chaque groupe de rats différaient dans les premiers et les derniers stades de l’entraînement. Le deuxième jour, la plupart des groupes de rats chassés par l’évasion ont nagé au hasard. Cependant, le jour 5, les rats du groupe témoin ont nagé dans la même direction, tandis que les rats du groupe modèle ont nagé au hasard le long de la paroi de la piscine. Le mouvement des rats du groupe TEAT est devenu plus dense dans le quadrant cible. L’expérience a mesuré la latence d’évasion, une latence plus courte indiquant des capacités plus fortes. La figure 7B montre que le groupe modèle présentait des capacités d’apprentissage et de mémoire réduites par rapport au groupe témoin. Cependant, le groupe TEAT a montré une amélioration significative de la déficience de la mémoire de référence spatiale chez les rats atteints d’une pathologie de type MA.

La TEAT améliore la mémoire spatiale chez les rats semblables à la maladie d’Alzheimer
Dans l’essai de sonde, l’endroit où l’animal passe du temps indique un biais spatial27. Les rats utilisent quatre méthodes principales pour rechercher des plates-formes : basée sur les bords, basée sur le hasard, basée sur les tendances et basée sur le linéaire28. Les résultats indiquent que chaque groupe de rats a utilisé des stratégies de recherche différentes (figure 8A). Le groupe témoin a principalement utilisé des stratégies de recherche linéaire et directionnelle, ce qui suggère une forte mémoire et une capacité à se souvenir de l’emplacement de la plateforme. En revanche, les rats du groupe modèle ont présenté une stratégie de recherche principale en forme de bord, indiquant un déclin significatif de leur capacité de mémoire. Ils n’ont pas appris à trouver la plate-forme ou à se souvenir de son emplacement. Les rats du groupe TEAT ont montré une stratégie de recherche basée sur les tendances. La densité de trajectoire était la plus élevée dans le quadrant où se trouvait la plate-forme d’origine, ainsi que dans les quadrants adjacents. Cela indique une amélioration de la mémoire par rapport au groupe de modèles.

Les figures 8B et 8C montrent les résultats de la durée du séjour dans le quadrant de la plate-forme d’origine et le nombre de fois où les rats ont traversé la plate-forme. Les rats du groupe modèle ont montré une réduction significative de leur temps de séjour dans le quadrant de la plate-forme d’origine et du nombre de fois qu’ils ont traversé la plate-forme par rapport au groupe témoin (p <0,01). Par rapport au groupe modèle, les rats du groupe TEAT ont montré une augmentation significative de leur temps de séjour dans le quadrant de la plate-forme d’origine et du nombre de fois qu’ils ont traversé la plate-forme (p <0,01). Ces résultats suggèrent que le TEAT peut améliorer l’apprentissage spatial et les troubles de la mémoire chez les rats atteints d’une pathologie de type MA.

Le TEAT améliore le vieillissement de l’hippocampe chez le rat (Figure 9). Par rapport au groupe témoin, les rats du groupe modèle ont présenté de graves changements pathologiques, notamment une réduction significative du nombre de cellules pyramidales et de leur disposition irrégulière. De plus, une condensation nucléaire, une dégénérescence neuronale et d’autres anomalies ont été observées. Cependant, après le traitement par TEAT, le nombre de cellules pyramidales de l’hippocampe chez le rat a augmenté et était plus organisé. Bien que certains noyaux aient montré de la condensation, la morphologie globale des cellules semblait plus normale. Les cellules étaient plus densément distribuées et ordonnées, la coloration cytoplasmique était plus cohérente et l’œdème entourant les cellules était considérablement réduit. Notamment, des cellules pyramidales normales ont été observées.

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Figure 1 : Schéma de l’expérience. Après 1 semaine d’adaptation (semaine 0), l’étude a réparti 18 rats en trois groupes : Contrôle, Modèle et TEAT. Au cours des semaines 1 à 7, le groupe témoin a reçu des injections de solution saline, tandis que les groupes modèle et TEAT ont reçu du D-galactose. Le groupe TEAT a également subi une thérapie d’acupuncture par enrobage de fils aux semaines 2, 4 et 6. Tous les rats ont été soumis au test du labyrinthe aquatique de Morris au cours de la semaine 8, suivi d’une euthanasie. Abréviations : Adapt = adaptation, Con = groupe témoin, Mod = groupe modèle, TEAT = groupe de thérapie d’acupuncture à encastrement de fils, D-gal = D-galactose, MWM = le test du labyrinthe d’eau Morris. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

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Figure 2 : L’emplacement du point d’acupuncture. (A) Le point d’acupuncture Baihui (GV 20) chez le rat. Il est situé au milieu droit de l’os pariétal. (B) Le point d’acupuncture Shenshu (BL 23) chez le rat. Il est situé à 5 mm latéralement de la deuxième vertèbre lombaire. Abréviations : GV = Governor Vessel, un concept de la médecine traditionnelle chinoise (MTC) qui fait référence au méridien principal qui longe la ligne médiane de la face postérieure du corps, BL = vessie, représente le méridien de la vessie, qui en MTC correspond au méridien du pied-Taiyang, l’un des six méridiens yang, qui longe l’arrière du corps et des jambes. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

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Figure 3 : Opération détaillée d’encastrement de fils de Baihui (GV 20). (A) L’aiguille est insérée horizontalement à un angle de 15° par rapport à la surface de la peau, à 0,1 cm sous le point d’acupuncture Baihui (GV 20), avec la peau pincée pour faciliter la procédure. (B) Une fois que la pointe de l’aiguille atteint une position de 0,1 cm au-dessus du point d’acupuncture Baihui (GV 20), le noyau de l’aiguille est poussé tout en rétractant le tube de l’aiguille pour implanter complètement la suture chirurgicale résorbable de 0,2 cm dans le tissu sous-cutané au niveau de l’acupoint. Abréviations : GV = Governor Vessel, un concept de la médecine traditionnelle chinoise (MTC) qui fait référence au méridien principal qui longe la ligne médiane de la face postérieure du corps. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

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Figure 4 : Opération détaillée d’intégration de fils de Shenshu (BL 23). (A) L’aiguille est rapidement insérée perpendiculairement dans le point d’acupuncture à une profondeur de 0,25 cm sous le Shenshu (BL 23). (B) Une fois que la pointe de l’aiguille a atteint une profondeur de 0,5 cm sous la surface de la peau, l’aiguille est redirigée vers le centre du point d’acupuncture, créant un angle de 45° avec la peau, puis insérée obliquement à une profondeur de 0,5 cm. (C) Pendant que la tige de l’aiguille est avancée, le tube est rétracté, assurant l’implantation complète d’un segment de 0,5 cm de suture chirurgicale résorbable dans le tissu musculaire au niveau du Shenshu (BL 23) Point d’acupuncture. Abréviations : BL = Vessie, signifie le méridien de la vessie, qui en MTC correspond au méridien du pied-Taiyang, l’un des six méridiens yang, qui longe l’arrière du corps et des jambes. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

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Figure 5 : L’organigramme de l’essai WMW. L’entraînement d’adaptation avant l’expérience est désigné par le jour 0, au cours duquel les capacités motrices des rats sont observées et la vitesse de nage est analysée statistiquement. S’ensuit une phase de navigation de cinq jours (jours 1 à 5), au cours de laquelle la latence d’échappement (latence d’échappement) est comparée et analysée entre les différents groupes. Le jour 6, un essai de sonde spatiale est effectué pour évaluer le temps passé dans le quadrant cible (temps de séjour dans le quadrant cible) et le nombre de croisements de quai. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

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Figure 6 : Comparaison de la vitesse de nage (m/s) entre groupes. Cette figure délimite les vitesses de nage moyennes (en mètres par seconde) des rats dans divers groupes expérimentaux, chacun comprenant six animaux (n = 6). Les barres d’erreur indiquent l’écart-type. Aucune différence intergroupe n’a été obtenue, comme l’indique ns (p > 0,05). L’analyse statistique a été exécutée à l’aide du logiciel SPSS, toutes les données adhérant à une distribution normale. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

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Figure 7 : Les résultats de la navigation de WMW. (A) Ce panneau présente les diagrammes représentatifs des trajectoires de mouvement, illustrant les trajectoires de navigation des rats au sein de chaque groupe expérimental pendant les essais de navigation par endroit. (B) La latence d’évasion, mesurée en secondes (s), est comparée entre les groupes, chaque groupe étant composé de six rats (n = 6). L’analyse statistique a été effectuée à l’aide d’une ANOVA à mesures répétées à deux facteurs pour évaluer les effets intra-sujets au cours des essais de navigation et les différences entre les sujets entre les groupes. Les données sont conformes aux hypothèses de distribution normale et sont représentées comme la moyenne de groupe ± l’écart-type. Les différences significatives sont indiquées par des astérisques (*p < 0,05, **p < 0,01) par rapport au groupe témoin et par des hashtags (#p < 0,05, ##p < 0,01) par rapport au groupe modèle. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

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Figure 8 : Les résultats de la piste de sonde de WMW. (A) Le panneau affiche des diagrammes de trajectoire de mouvement représentatifs qui capturent les comportements d’exploration spatiale des rats dans l’essai de sonde au sein de chaque groupe expérimental. (B) Ce graphique compare le temps de séjour (en secondes, s) dans le quadrant cible entre les groupes, reflétant la rétention de mémoire des rats de l’emplacement de la plate-forme. (C) Le graphique illustre la fréquence (fréquence) à laquelle les rats traversent la zone de la plate-forme, indiquant leurs performances de mémoire spatiale. Chaque groupe comprenait six rats (n = 6), et les données ont été analysées statistiquement à l’aide d’une ANOVA à un facteur pour évaluer les différences entre les groupes. Les données adhèrent à une distribution normale et sont présentées sous forme de moyenne ± d’écart-type. Les différences significatives sont indiquées par des astérisques (**p < 0,01) par rapport au groupe témoin et par des hashtags (#p < 0,05, ##p < 0,01) par rapport au groupe modèle. **p < 0,01 par rapport au groupe témoin, #P < 0,05 par rapport au groupe de modèles, ##P < 0,01 par rapport au groupe de modèles. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

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Figure 9 : Évaluation de la coloration à l’hématoxyline et à l’éosine de la région CA1 de l’hippocampe dans des groupes de rats à un grossissement de 200x. (A) Le groupe témoin présente une structure neuronale typique avec des cellules pyramidales bien conservées. (B) Le groupe modèle présente des altérations pathologiques prononcées, caractérisées par une diminution marquée de la densité des cellules pyramidales, des neurones dégénérés colorés en noir et un arrangement désordonné. (C) Le groupe TEAT présente une architecture hippocampique améliorée, avec un nombre accru de cellules pyramidales qui sont plus ordonnées et possèdent une morphologie plus normative. Malgré une condensation nucléaire occasionnelle, les cellules sont plus densément emballées, présentent une coloration cytoplasmique uniforme et montrent une réduction significative de l’œdème péricellulaire. La présence de cellules pyramidales normatives est notamment observée. Barre d’échelle = 50 μm. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.

Discussion

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Temps d’intervention
L’étiologie de la MA est complexe et sa pathogenèse reste incertaine. À l’heure actuelle, il n’existe aucun traitement efficace contre la maladie, et son évolution est irréversible. Par conséquent, la communauté universitaire est parvenue à un consensus sur l’importance de se concentrer sur la prévention et le traitement de la MA. Les stratégies de prévention et de traitement de la MA mettent l’accent sur l’intervention précoce, suivant le concept de la MTC de traiter les affections avant qu’elles ne se produisent, en mettant l’accent sur le traitement avant son apparition, sa transmission et sa récidive. Les recherches accumulées chez l’homme29,30 et les rongeurs31,32 ont montré que l’acupuncture précoce et l’intervention de moxibustion peuvent obtenir des résultats significatifs sans effets secondaires apparents, ce qui en fait une méthode potentielle prometteuse pour prévenir et traiter la MA. Par conséquent, cette étude a administré un traitement pendant le processus de modélisation. Le TEAT a été mis en place au début de l’injection intrapéritonéale D-gal.

Sélection des points d’acupuncture
La MA est une maladie neurodégénérative grave qui affecte principalement les régions du cerveau responsables de la mémoire, du langage, du raisonnement et du comportement social. Le cerveau (Nao) est considéré comme la mer de moelle (Sui) en MTC. La moelle (Sui) est faite d’essence (Jing), une substance unique en MTC qui est considérée comme la force constitutionnelle, la vitalité et la résistance essentielles du corps. L’essence (Jing) est principalement stockée dans les reins (Shen). Si l’essence rénale (Shen Jing) est faible, le cerveau (Nao) peut manquer de nourriture et des troubles cognitifs peuvent survenir. Par conséquent, la MTC suggère de tonifier les reins et de bénéficier de l’essence (Jing) peut aider à améliorer la fonction cérébrale. Le cerveau peut être directement influencé par certains méridiens, tels que le vaisseau gouverneur (GV) et le méridien de la vessie du pied Taiyang (BL), lorsqu’ils pénètrent dans le cerveau. La combinaison du vaisseau gouverneur (GV) et du méridien de la vessie du pied Taiyang (BL) utilisée pour la prévention et le traitement de la MA est très utilisée33,34. Le Baihui (GV 20) est un point d’acupuncture situé au sommet de la tête et fait partie du vaisseau du gouverneur. Selon la littérature, dans les études utilisant l’acupuncture et la moxibustion pour la prévention et le traitement de la MA, Baihui (GV 20) a la fréquence d’occurrence la plus élevée et est considéré comme un point critique dans la formule35. Le Shenshu (BL 23) est un point d’acupuncture sur le méridien de la vessie du pied Taiyang. Il est situé à 1,5 cun latéral du bord inférieur de l’apophyse épineuse de la deuxième vertèbre lombaire. En tant que point de transport du rein, il peut renforcer tous les aspects des reins, y compris le yin et le yang, l’essence (Jing) et le qi. L’acupuncture et la moxibustion à Baihui (GV 20) et Shenshu (BL 23) peuvent améliorer la fonction cognitive et soulager les symptômes de la MA de diverses manières36,37.

Temps d’intervalle
Les normes de fonctionnement du TEAT38 stipulent que l’intervalle de traitement et le déroulement du traitement doivent être déterminés en fonction de l’état de la maladie et du site opératoire choisi, avec un intervalle de 1 semaine à 1 mois. Le traitement peut varier de 1 à 5 fois. Cette suggestion peut également être suivie dans la recherche sur les animaux expérimentaux. D’après la littérature examinée39, le traitement est généralement administré une fois par semaine ou toutes les 2 semaines, la plupart des cas impliquant 4 à 8 traitements consécutifs. L’expérience a duré 49 jours, au cours desquels les fils ont été enterrés les 14, 28et 42e jours.

Outil et méthodes
Divers outils d’enrobage de fil sont utilisés dans la recherche actuelle sur les animaux de laboratoire. Il s’agit notamment des aiguilles jetables n° 740 ou n° 941, des aiguilles auto-réinventées et de l’aiguille de ponction lombaire n° 1242. Les aiguilles auto-réinventées utilisent des seringues n° 5 à 7 comme tube et une aiguille filiforme appropriée pour le noyau de l’aiguille. La pointe de l’aiguille a été pré-lissée à l’avance. Par exemple, dans une étude utilisant des rats SD pesant 250 ± 20 g (mois d’âge non précisé dans le texte), choisissez la seringue n°7 et l’aiguille filiforme de 0,30 x 0,40 mm43,44. Cependant, les aiguilles auto-réinventées doivent être strictement désinfectées, ce qui les rend inutilisables à grande échelle. Si la pointe de l’aiguille est trop grande ou pointue, elle peut endommager les vaisseaux sanguins et les nerfs, augmentant ainsi le risque d’ecchymoses45. Les aiguilles de ponction lombaire, qui ont un grand diamètre et des pointes pointues, sont plus susceptibles d’endommager les vaisseaux sanguins et les nerfs. L’aiguille d’encastrement jetable est la plus utilisée dans la pratique clinique39. Il est plus pratique à utiliser et plus sûr à utiliser par rapport aux aiguilles auto-réinventées et aux aiguilles de ponction lombaire, ce qui le rend idéal pour les TEF. De plus, l’objectif de l’expérience est d’améliorer la santé humaine. Par conséquent, les études sur les animaux doivent refléter la situation clinique. Par conséquent, il est conseillé d’utiliser des aiguilles d’enrobage de fil jetables comme outils d’enrobage de fil.

Le Catgut était le principal matériau de fil utilisé dans le TEAT, mais en raison du rejet des tissus et des ingrédients d’origine animale, il a été remplacé par des sutures chirurgicales résorbables biosynthétiques. Les sutures sont disponibles en différentes tailles et doivent être adaptées à l’aiguille, comme le n° 7 pour les sutures 4-0 ou 3-0. Dans la recherche animale, 3-041, 4-046 et 5-047 sont principalement utilisés. La plupart des sutures mesurent de 1 à 2 cm de long. Cependant, les rongeurs ont un corps beaucoup plus petit que les humains, il n’y a donc pas de taille appropriée pour leur taille. Par conséquent, les chercheurs doivent couper les sutures en segments de 0,2 à 0,5 cm pour les rendre adaptées aux rongeurs. Par conséquent, il est recommandé de rincer les sutures à l’eau distillée propre et stérile ou à une solution saline après la coupe et avant le trempage pour une utilisation ultérieure ou une application immédiate afin de réduire le risque d’infection46.

Certaines études ont proposé des exigences détaillées pour la méthode d’intégration, telles que l’insertion rapide d’aiguilles dans le point d’acupuncture à partir d’environ 0,5 cm sous le point d’acupuncture vers le point d’acupuncture48. C’est important car les rongeurs sont petits. En plus d’avoir un tissu musculaire abondant dans leurs membres inférieurs, leur tissu sous-cutané et leurs couches musculaires dans la tête, le dos et l’abdomen sont relativement faibles. Par conséquent, la question des points d’insertion et de l’angle d’insertion du trayon dans la recherche animale doit être soulignée ici. Lors de l’exécution d’un TEAT sur les membres inférieurs de rongeurs, un aiguilletage direct aux points d’acupuncture est possible. En ce qui concerne le corps, il est recommandé d’insérer l’aiguille sous les points d’acupuncture (la distance peut être ajustée de manière flexible en fonction de la longueur du corps du fil) à l’aide d’une aiguille oblique (<45°) ou d’une aiguille plate (<15°) pour éviter d’endommager les organes internes.

Potentiel du TEAT pour la prévention et le traitement de la maladie d’Alzheimer
Récemment, des recherches sur le TEAT ont vu le jour, bien que ses effets et ses mécanismes restent insaisissables. Comme mentionné ci-dessus, les TEAT peuvent améliorer les facteurs de risque liés à la MA tels que l’obésité13,14, le diabète15, l’insomnie16, l’ostéoporose postménopausique17 et la dépression18. Il a un effet bénéfique sur l’apprentissage et les troubles de la mémoire chez les rats VD19. La TEAT régule le métabolisme des lipides par la voie PPAR pour améliorer les lésions tissulaires chez les rats fatigués induits par l’exercice49 et exerce des effets anti-inflammatoires et analgésiques chez les souris induites par le stress intermittent induit par le froid par la voie TRPV150. Dans la présente étude, nous avons démontré que le traitement par incorporation de fils sur des rats de type MA pourrait atténuer les troubles de l’apprentissage et de la mémoire en améliorant la perte de mémoire spatiale et en réduisant les cellules dégénérées dans les régions CA1 de l’hippocampe. Cependant, en raison du manque d’uniformité et de normalisation de la recherche actuelle dans plusieurs éléments critiques du fonctionnement du TEAT, y compris la méthode d’intégration, l’outil d’intégration, le fil et la période d’intervalle d’intégration, cet article traite principalement des éléments opérationnels critiques du TEAT dans la recherche expérimentale. Cette recherche n’était qu’une exploration préliminaire de l’effet du TEAT sur la MA, qui nécessitait beaucoup plus de complément et d’amélioration pour clarifier la molécule exacte et l’interaction entre eux. Néanmoins, il a offert un nouvel essai à l’inévitable processus de DA, ce qui pourrait en quelque sorte alléger le lourd fardeau du système de santé public.

Disclosures

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Les auteurs déclarent qu’ils n’ont rien à divulguer.

Acknowledgements

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Ce travail a été soutenu par des fonds de la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (NSFC) n° 82374564 (à YJD) et n° 82074566 (à YJD) et de la base d’héritage Sun Guojie pour l’acupuncture-moxibustion MTC de la Fédération mondiale des sociétés d’acupuncture-moxibustion à Wuhan, en Chine (Fédération mondiale des sociétés d’acupuncture-moxibustion [2019] n° 26) (à YJD) et le projet de construction du studio d’héritage national célèbre de la MTC de l’Administration nationale de la médecine traditionnelle chinoise, Chine (l’Administration nationale de la médecine traditionnelle chinoise [2022] n° 5) (à YJD).

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
0,9 % solution saline, 4 % paraformaldéhyde, hématoxyline, éosine Y (soluble dans l’eau), éthanol absolu, 0,01M poudre PBS, xylène, acide chlorhydrique, paraffine intégrée, gomme neutresinopharm (www.sinopharm.com)
5-0 suture chirurgicale résorbablebodamedical (www.bodamedical.com)
70 % d’alcool, iodophore, bouleUtilisé pour la désinfection.
de chloralsigmaC8383
lamelles, lames de verreGuangzhou Wuqiang Experimental Equipment Co., Ltd
DéshydrateurWuhan Junjie JT-12J Déshydrateur
DELUXE THERMOSTAT HEAT MATZhenhua InstrumentsPour maintenir la température corporelle des rats.
D-galactosesigmaG0750
à barbe électrique pour hommesUtilisé pour raser les rats.
Balance électronique pour petits animaux (ZK-DST)Henan Zhike Information Technology Co., Ltd
érythromycine pommadefrontpharm
platUtilisé pour placer des sutures résorbables coupées.
Pot de stérilisation à vapeur à haute pression (YM100Z)d’équipement médical de Shanghai SanshenPour la stérilisation des instruments chirurgicaux.
Machine à glaçons (CMB40)Shanghai Sheyan Instrument Co., Ltd.
Microscope (BX-53)Poudre
Utilisé pour le test MWM.
Système de suivi vidéo Morris Water Maze & Logiciel d’analyse de données (Version : Watermaze 2.0)Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd
No.6 aiguille d’enrobage de filbodamédical (www.bodamedical.com)
ciseaux ophtalmiques, plateaux, pince à épiler
Pathologie Microtome  ; (RM 2016)LEICA, Allemagne
pentobarbitalAllemagneP11011
marqueurUtilisé pour marquer le point d’acupuncture.
Couteaux à trancher (R35)Plumes,
Utilisé pour se laver les mains.
gants
de coton hydrate de tissus biologiques informatisétondeuse en verre Usine de lait OLYMPUS permanent savon japonais stériles

References

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