Technique d’élevage in vitro pour l’étude de la dynamique cellulaire dans les écailles de poisson-zèbre

Résumé

Ce protocole propose une méthode pour étudier la dynamique cellulaire à l’aide d’une technique de culture in vitro simple. Il offre aux chercheurs et aux éducateurs du poisson-zèbre l’occasion d’étudier les processus cellulaires, tels que ceux liés à l’homéostasie osseuse et à la biologie cellulaire de base, en visualisant les noyaux fluorescents et les cellules apoptotiques à l’intérieur des échelles.

Résumé

Les écailles de poisson-zèbre offrent une variété d’avantages pour une utilisation dans les laboratoires standard à des fins d’enseignement et de recherche. Les écailles sont facilement collectées sans qu’il soit nécessaire de les euthanasier, se régénèrent en quelques semaines et sont translucides et petites, ce qui permet de les observer à l’aide d’un microscope standard. Les écailles de poisson-zèbre sont particulièrement utiles dans les environnements éducatifs, car elles offrent aux étudiants une occasion unique de s’engager dans des expériences d’apprentissage pratiques, en particulier dans la compréhension de la dynamique cellulaire et des méthodes de culture in vitro . L’objectif principal de ce protocole est de décrire une méthode de collecte et de conservation des écailles de poisson-zèbre en élevage pour une utilisation dans une variété d’études biologiques à l’aide d’équipements de laboratoire de base. De plus, le protocole détaille leur utilisation dans la compréhension de l’homéostasie osseuse en examinant l’activité des cellules osseuses impliquées dans la résorption et le dépôt osseux. Il comprend également des protocoles supplémentaires pour des techniques générales, telles que la visualisation des noyaux et des cellules apoptotiques. Le protocole de culture in vitro produit des résultats fiables avec un minimum de réactifs et d’équipements. Cet article traite des avantages de l’utilisation de cultures in vitro d’écailles de poisson-zèbre pour favoriser la recherche scientifique et décrit les ressources nécessaires pour soutenir leur intégration dans les milieux éducatifs.

Introduction

Ces dernières années, le poisson-zèbre (Danio rerio) est devenu un organisme modèle précieux dans divers domaines scientifiques, notamment la génétique, la biologie du développement et la toxicologie ^1,2,3. Le poisson-zèbre est un petit poisson tropical d’eau douce originaire des rivières d’Asie du Sud-Est⁴. Ils sont devenus un organisme modèle populaire en biologie en raison de leur entretien facile, de leur petite taille, de leur cycle de reproduction rapide et de leurs embryons translucides

Protocole

Tous les protocoles décrits ici suivent les lignes directrices du Conseil canadien de protection des animaux et ont été approuvés chaque année par le comité de protection des animaux de l’Université Saint Mary’s et de l’Université Mount Saint Vincent sous les numéros de protocole 20-14 et 21-12. Avant d’appliquer ce protocole, les utilisateurs doivent s’assurer que les lignes directrices fédérales et provinciales sur l’utilisation des animaux en recherche ou en enseignement sont respectées²³. Les détails des réactifs et de l’équipement utilisés dans cette étude sont énumérés dans la table des matériaux<....

Résultats

Récemment, ce protocole de culture à l’échelle a été utilisé pour étudier l’homéostasie osseuse¹¹. Les cochenilles peuvent survivre dans le milieu de culture pendant au moins 2 jours. Le nombre de cellules apoptotiques a été analysé chaque jour de culture, jusqu’à un maximum de trois jours, en comptant les cellules marquées. Ces résultats ont montré que les cellules apoptotiques augmentaient significativement le troisième jour de culture, indiquant que le temps de culture devrait être limité à deu.......

Discussion

Les écailles de poisson-zèbre sont un modèle in vitro facilement accessible pour étudier une variété de processus biologiques différents qui peuvent être maintenus jusqu’à 2 jours à l’aide d’une méthode d’élevage et d’un incubateur pour simuler leur environnement naturel¹¹. Les balances ont une distribution régulière et proportionnelle des cellules présentes, ce qui permet aux chercheurs de visualiser, de compter et d’étiqueter les cellules et de mener de.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Tubes de 0,2 mL	n/a	n/a
37 % HCl  ;	EMD	HX0603-4	Pour la stabilisation du pH et la préparation de la lame
concave	n/a	n/a
DAPI	Vectashield	H-1200	Pour la visualisation des noyaux cellulaires
Sel de diazonium (Fast Blue B)	Sigma	D9805	Pour la solution de substrat AP
Poudre Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM)  ;	Sigma  ;	D5523	Pour milieux de culture à l’échelle
Méthanesulfonate de 3-aminobenzoate d’éthyle (MS222)  ;	Sigma  ;	E10521	Pour la préparation de 0,1 % MS222
Sérum fœtal bovin  ;	Sigma  ;	F4135	Pour milieux de culture à l’échelle
Microscope à fluorescence	n/a	n/a
Acide acétique glacial  ;	Fisher  ;	A38 212	Pour tampon d’acétate
Glycérol	VWR	BDH1172-4LP	Pour 80 % de glycérol - balances de stockage
HEPES  ;	ThermoFisher  ;	15630106	Pour les milieux de culture à grande échelle  ;
Plaque chauffante	n/a	n/a
KCl  ;	Sigma	P217-10	Pour la préparation du PBS
Lysotracker	ThermoFisher	L7528	Pour la visualisation des lysosomes
Acide maléique	Sigma	M0375	Pour le tampon Tris-Maleate  ;
Micropipette	n/a	n/a
N,N-diméthylformamide	Sigma	319937	Pour solution de substrat AP
N,N-diméthylformamide  ;	Sigma	319937	pour solution de substrat enzymatique
Na2HPO4  ;	EMD	SX0720-1	Pour la préparation du
PBS NaCl  ;	Sigma  ;	S9888	Pour la préparation du PBS
NaNO2	Sigma	S-2252	Pour 4 % de NaNO2
NaOH  ;	Sigma	S5881	Pour la préparation de 4 % de PFA
NaOH  ;	Sigma  ;	S5881	Pour la fixation du tartre et la stabilisation du pH
Napthol-AS-TR-phosphate	Sigma	N6125	Pour la solution de substrat AP
Napthol-AS-TR-phosphate  ;	Sigma	N6125	Pour Solution de substrat enzymatique
Chlorhydrate de pararosaniline  ;	Sigma	P3750	Pour PRS
Pénicilline-streptomycine 5000 unités de pénicilline et 5mg de streptomyocine/ml	ThermoFisher  ;	15140122	Pour les milieux de culture à grande échelle  ;
Équipement de protection individuelle (EPI) : gants en nitrile jetables, lunettes de sécurité/lunettes anti-éclaboussures et blouse de laboratoire.	n/a	n/a
PFA  ;	Sigma  ;	P6148	Pour la fixation du tartre
Acétate de sodium	Sigma  ;	S2889	Pour tampon d’acétate
Microscope composé standard	n/a	n/a
Plaque d’agitation	n/a	n/a
	Sigma	T6521	Pour tampon tartrate
Base Tris	Roche	03 118 142 001	Pour tampon Tris-Maleate  ;

PRS