Nous présentons une méthode permettant d’isoler avec succès des organismes méticuleux et anaérobies des voies sinusales cutanées (tunnels) dans les tissus excisés de patients atteints d’hidradénite suppurée .
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Nous présentons une méthode permettant d’isoler avec succès des organismes méticuleux et anaérobies des voies sinusales cutanées (tunnels) dans les tissus excisés de patients atteints d’hidradénite suppurée .
L’hidradénite suppurée (HS) est une affection débilitante caractérisée par des nodules et des abcès douloureux, progressant vers les voies sinusales (tunnels) à l’intérieur des couches dermiques de la peau, provoquant une gêne importante, un écoulement nauséabond, une défiguration, des contractures et des cicatrices, qui diminuent gravement la qualité de vie. L’HS est associée à des altérations du microbiome cutané, ce qui a un impact sur la régulation immunitaire et la défense de la peau contre les bactéries nocives. Malgré sa prévalence, la contribution du microbiome HS à la pathologie de la maladie et la réponse limitée au traitement restent largement inconnues. À ce jour, de multiples études de séquençage de l’ARNr 16S sur des tissus HS n’ont atteint qu’une granularité au niveau du genre, identifiant une augmentation des anaérobies à Gram négatif et une diminution des commensaux cutanés. Une compréhension plus approfondie de la dysbiose microbienne chez les personnes atteintes d’HS est essentielle pour optimiser les stratégies de traitement. Cela nécessite une approche à deux volets pour évaluer le microbiome HS, y compris l’isolement des espèces bactériennes, qui sont souvent sous-utilisées dans les études translationnelles axées sur les troubles cutanés. L’isolement des micro-organismes individuels dans les tissus de l’HS est crucial pour élucider le rôle des bactéries dans la pathogenèse de l’HS. Ici, nous mettons en évidence des méthodes reproductibles pour isoler avec succès les agents pathogènes anaérobies du tissu tunnel de l’HS, fournissant l’étape initiale et la plus critique dans la compréhension du rôle bactérien dans l’HS. Cette méthode ouvre la voie à des recherches ciblées sur les contributions microbiennes à l’HS et à l’élaboration de stratégies de traitement plus efficaces et personnalisées qui s’attaquent au fardeau microbien complexe de cette maladie chronique.
L’hidradénite suppurée (HS) est une affection dermatologique courante caractérisée par des nodules et des abcès qui progressent vers les voies sinusales (tunnels) formées dans les couches dermiques et sous-cutanées de la peau, provoquant une douleur importante, produisant des écoulements purulents, une défiguration et des séquelles psychosociales débilitantes 1,2. L’HS affecte de manière disproportionnée les femmes et les personnes ayant une peau de couleur, émergeant généralement à la fin de l’adolescence ou au début de l’âge adulte2. Les symptômes physiques graves de la maladie sont aggravés par son impact psychosocial profond, notamment la dépression, l’anxiété et l’isolement social, qui peuvent gravement diminuer la qualité de vie3. Les tunnels HS formés au stade avancé de la maladie diminuent considérablement les chances de réponse des patients à la thérapie biologique actuellement approuvée, et l’excision chirurgicale reste la seule approche de traitement 4,5.
De nombreuses études ont caractérisé le microbiome associé aux tunnels HS, montrant une prévalence d’agents pathogènes anaérobies et une abondance réduite de commensaux cutanés 6,7,8, avec des études récentes identifiant Porphyromonas spp. (type I) et Prevotella spp. (IV) dans les tunnels, entre autres genres9. Une autre étude a révélé une variation du microbiome HS en fonction de la profondeur de l’échantillonnage tissulaire, confirmant le caractère unique de la composition microbienne dans le tissu tunnel10. De plus, il a été démontré que la dysbiose affecte la réponse immunitaire dans l’HS, ce qui implique davantage le rôle des microbes dans la pathogenèse de la maladie 11,12,13,14. Bien qu’un traitement antibiotique systémique prolongé à base de clindamycine, de rifampicine et de tétracyclines soit utilisé et ait montré une réduction du nombre de tunnels de drainage chez les patients atteints15,16, les données sur les agents pathogènes anaérobies résistants aux antibiotiques dans l’HS restent inconnues. Jusqu’à présent, l’isolement de souches bactériennes dans les tunnels de HS n’a pas été signalé, ce qui limite les études sur les nouveaux traitements antimicrobiens et l’évaluation approfondie de la contribution des agents pathogènes à la pathogenèse de la maladie HS. La normalisation des méthodes d’isolement des agents pathogènes permettrait non seulement de mieux comprendre le rôle des bactéries dans la pathogenèse de l’HS, mais aussi d’orienter vers des interventions plus ciblées et améliorées.
Ici, nous mettons en évidence une méthode permettant d’isoler avec succès les micro-organismes du tissu tunnel HS. L’isolement d’espèces bactériennes individuelles est une première étape cruciale dans la compréhension de leur rôle dans la pathologie de l’HS. Cette méthode ouvre la voie à une recherche ciblée sur les contributions microbiennes à l’HS et à l’élaboration de stratégies de traitement plus efficaces et personnalisées qui s’attaquent aux agents pathogènes bactériens dans cette maladie chronique.
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Ce protocole a été approuvé par l’Institutional Review Board (IRB) de l’Université de Miami (protocole #20200187). Le consentement éclairé est obtenu des patients (n = 18, âge moyen ± écart-type = 30,9 ± 9,4, 12 femmes, 6 hommes) diagnostiqués avec des tunnels HS et/ou leur(s) tuteur(s) légal(s) avant la procédure après une discussion préalable de la recherche afin de permettre de répondre à toute préoccupation ou question.
1. Prélèvement d’échantillons de patients
2. Traitement de la peau HS
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Dans cette étude, nous décrivons un protocole pour l’isolement et la caractérisation des bactéries anaérobies dans les tunnels HS. Ce protocole est nouveau et remarquable en ce qu’il offre le potentiel de tester la fonction et la virulence de ces bactéries à l’aide de modèles d’infection cutanée in vitro, ex vivo et in vivo afin d’accroître notre compréhension de la contribution microbienne à la pathogenèse de l’HS. Tout d’abord, nous avons identifié les tunnels de la peau réséquée en les sonda...
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Dans cette étude, nous présentons une nouvelle méthode pour isoler et maintenir les bactéries colonisant les tunnels HS. Cette méthode reproductible permettra non seulement de caractériser en profondeur les souches présentes dans ces structures pathologiques, mais aussi d’étudier ultérieurement le rôle de microbes spécifiques dans la pathogenèse de l’HS. Les étapes critiques du protocole comprennent la collecte et le transport de tissus dans des milieux anaérobies, ce qui facilite la pré...
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Les auteurs ne signalent aucun conflit d’intérêts.
Ce travail a été soutenu par R01AR083385 (IP, MTC, HLT), P50MD017347 (TG, IP, HLT) et la subvention de recherche Danby de la Fondation HS (TG). Ce travail a également été soutenu par la subvention NIH 1S1OD023579-01 pour la maison du scanner de lames VS120 à la plate-forme d’imagerie analytique de la Miller School of Medicine de l’Université de Miami.
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| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Poinçon 6mm biospy | INTEGRA | 33-36 | D’autres fournisseurs peuvent être utilisés |
| 8mm punch biospy | INTEGRA | 33-37 | D’autres fournisseurs peuvent être utilisés |
| Agarose ; | Sigma Aldrich | A9539 | D’autres fournisseurs peuvent être utilisés |
| Chambres anaérobies ; | BD | 260672 | |
| Milieu de transport anaérobie | Systèmes anaérobies | AS-911 | |
| Cerveau cœur Perfusion Agar | Systèmes anaérobies | AS-6426 | |
| CO2 gaspak | BD | 260678 | |
| Difco Reinforced Clostridial Medium | BD | 218081 | |
| Glycérol | SIGMA | G5516-1L | D’autres fournisseurs peuvent être utilisés |
| Plaques PCR à coque dure | BIO-RAD | HSP9601 | D’autres fournisseurs peuvent être utilisés |
| Incubateur ; | VWR | Symphony | N’importe quel incubateur calibré peut être utilisé |
| Boucles d’inoculation | VWR | 76544-926 | D’autres fournisseurs peuvent être utilisés |
| LKV agar | HARDY Diagnostics | A60 | |
| Eau sans ADN microbien | Qiagen | 338132 | |
| Nunc CryoTube | Thermo scientific ; | 377267 | D’autres fournisseurs peuvent être utilisés |
| PCR (système en temps réel CFX Connect) | Module optique BIO-RAD | CFX Connect ; | Un Themocycler ordinaire peut être utilisé. |
| Gélose PEA ; | HARDY Diagnostics | A93 | |
| Q5 High Fidelity 2X Master Mix | BioLabs | M0492S | |
| QIAquick PCR Purification Kit | QIAGEN | 28104 | |
| Clostridia média renforcé | BD | 218081 | |
| Thin Forceps | Millipore Sigma | F4017 | D’autres fournisseurs peuvent être utilisés |
| Trypticase Soy Agar (TSA II) avec 5 % de sang | de mouton | 221261 |
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