Identification des inhibiteurs de-1/-L1 à l’aide de la technologie de résonance plasmonique de surface

Huifang Li; Tess Puopolo; Justin Gutkowski; Navindra P. Seeram; Chang Liu

doi:10.3791/67859

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Article de méthode

Identification des inhibiteurs de-1/-L1 à l’aide de la technologie de résonance plasmonique de surface

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DOI :

10.3791/67859

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2 mai 2025

Huifang Li¹ , Tess Puopolo¹ , Justin Gutkowski¹ , Navindra P. Seeram¹ , Chang Liu¹

¹Department of Biomedical and Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy, University of Rhode Island

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit un test de blocage des inhibiteurs de-1/-L1 à l’aide de la technologie de résonance plasmonique de surface. Il utilise une stratégie d’immobilisation en deux étapes et un système tampon adapté pour mesurer avec précision les unités d’intervention, facilitant ainsi l’évaluation des taux de blocage des composés ou des produits biologiques. De plus, il prend en charge l’identification à haut débit des inhibiteurs de-1/-L1.

Résumé

La perturbation de l’interaction-1/-L1 est une stratégie prometteuse pour l’immunothérapie du cancer. Des plateformes de dépistage fiables sont essentielles pour évaluer l’efficacité des inhibiteurs de-1/-L1. Un test de blocage-1/-L1 humain précédemment établi utilisant la technologie de résonance plasmonique de surface (SPR) (plateforme de criblage SPR d’inhibiteurs de-1/-L1 de première génération) a démontré des résultats comparables à ceux obtenus par des tests de fluorescence homogène résolue dans le temps (HTRF) et des tests cellulaires, avec un potentiel de criblage à grande échelle. Dans cet article, une version optimisée de ce test (plateforme de criblage SPR d’inhibiteurs de-1/-L1 de deuxième génération) est présentée, avec un processus de couplage en deux étapes qui combine le couplage d’amines et de bio-streptavidines pour améliorer le contrôle de l’orientation de-1 sur la puce et réduire la consommation de protéines-1. La plateforme mise à jour a été validée avec succès à l’aide de l’inhibiteur de-1/-L1 BMS-1166, montrant des effets de blocage comparables à la méthode précédente basée sur la SPR et à d’autres techniques établies telles que ELISA. Ces résultats confirment la fiabilité de l’approche. Cette plateforme de dépistage SPR optimisée offre un outil fiable et à haut débit pour identifier de nouveaux inhibiteurs de-1/-L1, faire progresser la recherche sur l’immunothérapie du cancer et mettre en évidence le potentiel de la SPR dans le dépistage des inhibiteurs de point de contrôle immunitaire.

Introduction

Les thérapies par blocage des points de contrôle immunitaires, en particulier celles ciblant la mort cellulaire programmée-1 (-1) et la mort cellulaire programmée-ligand 1 (-L1), sont à l’avant-garde des stratégies d’immunothérapie du cancer. Les thérapies anti--1/-L1 ont reçu l’approbation pour une utilisation dans divers types de cancer, tels^{que les} cancers hématologiques, cutanés, pulmonaires, hépatiques, de la vessie et du rein1. -1 est une glycoprotéine transmembranaire appartenant à la superfamille des immunoglobulines, caractérisée par un seul domaine de type variable immunoglobuline (IgV) au niveau N-te....