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Article de méthode

Construction d’un modèle de xénogreffe d’adénocarcinome pulmonaire chez la souris et évaluation de l’efficacité de la décoction XY par la voie MAPK

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DOI :

10.3791/68023

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25 avril 2025

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1College of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 2Respiratory Department, First Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Active Substances and Biological Mechanisms of Ginseng Efficacy, Changchun University of Chinese Medicine, 4Jilin Provincial Key Laboratory of Bio-Macromolecules of Chinese Medicine, Ministry of Education, Changchun University of Chinese Medicine, 5Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

Dans cet article

Résumé

Cette étude démontre que la décoction XY exerce des effets thérapeutiques contre l’adénocarcinome pulmonaire en régulant la voie MAPK.

Résumé

L’adénocarcinome pulmonaire augmente dans le monde entier, ce qui incite à l’exploration et au développement de méthodes de traitement efficaces. Ces dernières années, le potentiel thérapeutique de la médecine traditionnelle chinoise pour l’adénocarcinome pulmonaire, comme la décoction XiaoYi (XY), a été de plus en plus reconnu. Le mécanisme d’action de la médecine traditionnelle chinoise dans le traitement de l’adénocarcinome pulmonaire continue d’être élucidé. Dans cette étude, des modèles animaux ont été utilisés pour étudier les effets thérapeutiques de la décoction XY dans le traitement de l’adénocarcinome pulmonaire. Les composants chimiques d’entrée dans le sang de la décoction XY chez la souris ont été séparés et analysés en modes d’ions positifs et négatifs à l’aide de l’UHPLC-QE-MS. Les résultats ont ensuite été validés par des expériences in vivo , qui ont démontré une réduction de la taille de la tumeur, une amélioration des changements pathologiques et une augmentation de l’apoptose. En conséquence, quinze composants absorbés dans le sang après l’administration de décoction XY ont été identifiés : Stachyose, Quercétine-3-O-bêta-glucopyranosyl-7-O-alpha-rhamnopyranoside ; Imperialine ; Spinosine B ; Peimine ; Flavone base + 3O, 2MeO, O-Hex; Picropodophyllotoxine ; (2S,3R,4S,5S,6R)-2-[(2R,3R,4S,5S,6R)-4,5-dihydroxy-2 [[(3S,5R,8R,10R,12R,13R,14R,17S)-12-hydroxy-17-(2-hydroxy-6-méthylhept-5-en-2-yl) 4,4,8,10,14-pentaméthyl-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodécahydro-1H cyclopenta[a]phénanthrène-3-yl]oxy]-6-(hydroxyméthyl)oxan-3-yl]oxy-6-(hydroxyméthyl)oxane-3,4,5-triol ; Tricine ; Ginsénoside Rg1 ; (20R)-ginsénoside Rh1 ; Jujuboside B ; Aucubin ; Ginsénoside Rg3 ; et l’acide bêta-élemonique. Des expériences sur des animaux ont démontré que la décoction XY inhibait la croissance tumorale, améliorait les changements pathologiques et favorisait l’apoptose des cellules tumorales de manière dose-dépendante. Les mécanismes impliqués peuvent être liés à la régulation à la hausse de l’expression des protéines p-JNK et p-P38 dans la voie MAPK et à la régulation négative de l’expression de la protéine p-ERK dans la voie MAPK. En conclusion, la décoction XY a le potentiel de réguler la voie MAPK et d’exercer des effets thérapeutiques contre l’adénocarcinome pulmonaire.

Introduction

L’incidence du cancer du poumon augmente dans le monde entier. Il représente 18 % de toutes les tumeurs malignes et est responsable d’un nombre important de décès liés aucancer1,2. Le cancer du poumon non à petites cellules (CPNPC) est une forme prévalente de cancer du poumon, l’adénocarcinome étant la principale pathologie de type3. En raison de ses symptômes insidieux, le CPNPC est souvent diagnostiqué à un stade avancé et présente un taux de mortalité élevé 4,5. Les patients atteints d’un CPNPC de stade IV ont un taux de survie à cinq ans de seulement 5 %6, tandis que les patients atteints d’un CPNPC à un stade précoce, même résécable chirurgicalement, ont un taux de survie à cinq ans de seulement 50 %7.

Actuellement, le traitement de l’adénocarcinome pulmonaire comprend la chirurgie, la radiothérapie, la chimiothérapie, l’immunothérapie et la thérapie ciblée. De plus, la médecine traditionnelle chinoise (MTC) pour l’adénocarcinome pulmonaire est de plus en plus reconnue et valorisée8. La MTC a une longue histoire et a été utilisée dans le traitement de diverses maladies oncologiques avec des résultats thérapeutiques efficaces 9,10. Il considère le corps humain comme une entité entière, le principe thérapeutique étant axé sur la restauration du mouvement du Qi (le Qi fait référence à l’énergie vitale qui favorise la circulation du sang et des fluides corporels, contribuant à renforcer l’immunité et à réduire l’inflammation chez les patients atteints de CPNPC) dans les organes internes pour rétablir l’équilibre général et inhiber la progression du cancer.

La MTC traite non seulement les maladies oncologiques à faible toxicité, à cibles multiples et à haute efficacité11, mais elle facilite également la réparation des dommages causés par la radiothérapie et la chimiothérapie, prolongeant ainsi la survie12.

La technologie de chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS) intègre la chromatographie liquide à la spectrométrie de masse pour réaliser la séparation et la détection de composants dans des mélanges de composés complexes13. La LC-MS offre une haute résolution, une sensibilité élevée et une spécificité élevée, permettant la séparation et l’identification de divers composants chimiques dans les décoctions de médecine traditionnelle chinoise (MTC). Lorsqu’elle est associée à la chimie médicinale sérique, qui sépare et détecte les composants actifs de l’entrée dans le sang après l’administration orale14,15, la LC-MS permet de prédire et d’analyser les mécanismes d’action potentiels des médicaments. Cette approche aide à comprendre la composition chimique et les composants pharmacologiques des décoctions de MTC, fournissant des données essentielles pour des recherches approfondies sur leurs effets pharmacologiques et leurs applications cliniques, ce qui la rend très applicable dans la recherche en MTC16,17.

La voie de signalisation MAPK joue un rôle crucial dans la genèse, la progression, les métastases et l’invasion du cancer du poumon, avec Erk, p38 et JNK comme sous-familles importantes. Il a été démontré que les décoctions de la MTC influencent l’expression des protéines dans la voie MAPK18. La décoction XiaoYi (XY) est dérivée de la décoction de YiGuan et est utilisée pour traiter l’adénocarcinome pulmonaire au premier hôpital affilié de l’Université de médecine chinoise de Changchun (Figure 1), démontrant une efficacité clinique précise. Cependant, son mécanisme thérapeutique reste incertain.

Dans cette étude, la chromatographie liquide à ultra-haute performance couplée à la spectrométrie de masse Q-Exactive Orbitrap (UHPLC-QE-MS) a été utilisée pour élucider le mécanisme thérapeutique possible de la décoction XY contre l’adénocarcinome pulmonaire, et ses effets ont été validés par des études in vivo .

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Protocole

Toutes les procédures sur les animaux ont été approuvées par le Comité d’éthique animale de l’Université de médecine traditionnelle chinoise de Changchun (éthique n° 2024008). Des souris mâles C57BL/6 âgées de six semaines (20 ± 2 g), élevées dans des conditions spécifiques exemptes d’agents pathogènes (FPS), présentaient des schémas d’activité physique typiques dans un environnement contrôlé avec une température et une humidité constantes. Ils avaient un accès ad libitum à la nourriture et à l’eau et étaient maintenus sous un cycle lumière/obscurité de 12 heures. Des détails sur les réactifs et l’équipement utilisés dans cette étude sont fournis dans la table des matériaux.

1. Préparation de l’extrait aqueux de décoction XY

  1. Dans un pot de décoction, placez le Panax ginseng C.A. Mey (Renshen, 15 g), le Chinemys reevesii (Gray) (Guiban, 30 g) et le Trionyx sinensis Wiegmann (Biejia, 30 g). Ajouter 1000 mL d’eau déminéralisée et laisser tremper 30 min à température ambiante.
  2. Faites bouillir les trois herbes de l’étape 1.1 pendant 1 h. Simultanément, tremper Rehmannia glutinosa Libosch (Dihuang, 30 g), Trichosanthes kirilowii Maxim. (Tianhuafen, 30 g), Coix lacryma-jobi L. var. mayuen (Romain.) Stapf (Yiyiren, 20 g), Paeonia lactiflora Pall. (Baishao, 30 g), Boswellia carterii Birdw. (Ruxiang, 7 g), Commiphora myrrha Engl. (Moyao, 7 g), Agrimonia pilosa Ledeb. (Xianhecao, 20 g), Alpinia oxyphylla Miq. (Yizhiren, 20 g), Moulin à Ziziphus jujuba . var. spinosa (Bunge) (Suanzaoren, 30 g), Melia toosendan Sieb. et Zucc. (Chuanlianzi, 5 g), Fritillaria thunbergii Miq. (Zhebeimu, 15 g), Anemarrhena asphodeloides Bge. (Zhimu, 10 g), Platycodon grandiflorum (Jacq.) (Jiegeng, 10 g), Polygala tenuifolia Willd. (Yuanzhi, 15 g), et Phragmites communis Trin. (Lugen, 30 g) dans un autre récipient pendant 30 min. Après le trempage, transférez-les dans le pot de décoction à partir de l’étape 1.1.
  3. Faites bouillir les 18 herbes des étapes 1.1 et 1.2 pendant 30 min. Versez le liquide à base de plantes, ajoutez 1000 ml d’eau déminéralisée et faites bouillir pendant encore 30 minutes. Répétez ce processus d’ébullition trois fois pour obtenir trois portions de liquide à base de plantes, puis mélangez-les et mélangez-les soigneusement.
  4. Filtrez le liquide à base de plantes mélangé à travers un chiffon à mailles 400. Concentrez le filtrat sous pression réduite, puis transférez le liquide concentré à base de plantes dans un équipement de refroidissement pour un traitement ultérieur.
  5. Versez le liquide concentré à base de plantes dans un plateau de lyophilisation et placez-le dans la chambre de pré-congélation d’un lyophilisateur sous vide. Une fois la précongélation terminée, transférez le plateau dans la chambre de séchage par sublimation pour éliminer l’eau.
  6. Éliminez toute humidité résiduelle à haute température. Pulvérisez l’extrait de plantes lyophilisé à l’aide d’un pulvérisateur pour obtenir une fine poudre de décoction XY lyophilisée (Figure 2).

2. Préparation de sérum contenant du médicament

  1. Répartissez au hasard des souris mâles C57BL/6 âgées de six semaines (20 ± 2 g) dans le groupe XiaoYi (XY) ou dans le groupe témoin.
    REMARQUE : La dose chez la souris a été calculée à l’aide du facteur de conversion humain-souris :
    Dose expérimentale équivalente pour les souris (g/kg) = {Dose humaine (g/kg) / Poids corporel (70 kg)} x 9,1
    Sur la base de ce calcul, la posologie pour les souris a été déterminée à 2,6 g/kg.
  2. Peser 0,9152 g de poudre de décoction XY lyophilisée et la dissoudre dans 3,2 mL d’eau distillée pour préparer la solution médicamenteuse.
    REMARQUE : Les souris ont été à jeun pendant 12 h avant l’administration orale.
  3. Administrer la décoction XY aux souris du groupe XY par gavage, tout en administrant au groupe témoin un volume équivalent d’eau déminéralisée.
  4. 2 h après l’administration orale, anesthésier les souris avec du pentobarbital sodique (selon les protocoles approuvés par l’établissement). Énucléez les globes oculaires à l’aide d’une pince à épiler pour prélever des échantillons de sang, puis euthanasiez les souris par asphyxie au CO2 suivie d’une luxation cervicale conformément aux directives éthiques19.
  5. Laisser les échantillons de sang se stabiliser à température ambiante pendant 90 min. Centrifuger à 3450 x g (4 °C) pendant 15 min pour recueillir le surnageant.

3. Analyse UHPLC-QE-MS

  1. Ajouter 100 mg de poudre lyophilisée par décoction XY à 500 μL de solution d’extraction (méthanol : eau = 4:1). Mélangez soigneusement, sonicez et incubez dans un bain d’eau glacée pendant 1 h.
  2. Maintenir le mélange à -40 °C pendant 1 h, puis centrifuger à 13 800 x g (4 °C) pendant 15 min. Filtrez le surnageant à travers une membrane filtrante de 0,22 μm, puis combinez 100 μL de chaque surnageant pour créer des échantillons de contrôle de la qualité (CQ).
  3. Après la décongélation des échantillons de plasma, prélever 400 μL de l’échantillon de plasma du groupe témoin et 400 μL des échantillons de plasma du groupe XY. Ajouter 40 μL d’acide chlorhydrique (2 mol/L) à chaque échantillon. Agitez pendant 1 min et laissez reposer le mélange à 4 °C pendant 15 min. Répétez cette étape quatre fois.
  4. Ajouter 1,6 mL d’acétonitrile et agiter pendant 5 min. Centrifugeuse à 13 800 x g pendant 5 min à 4 °C. Soumettre 1 800 μL du surnageant à l’assèchement à l’azote.
  5. Reconstituer les échantillons séchés dans 150 μL de méthanol à 80 % contenant 10 μg/mL de l’étalon interne par vortex pendant 5 min. Centrifuger à 13 800 × g pendant 5 min à 4 °C, puis transférer 120 μL du surnageant dans un flacon en verre frais pour l’analyse LC-MS (figure 3).

4. Culture cellulaire et préparation des animaux

  1. Semez 1 mL de cellules de carcinome pulmonaire de Lewis dans une boîte de culture contenant du milieu Eagle modifié (DMEM) de Dulbecco complété par 10 % de sérum fœtal bovin et 1 % de pénicilline/streptomycine. Incuber les cellules dans des conditions contrôlées à 37 °C avec 5 % de CO2.
  2. Lorsque les cellules atteignent 80 % de confluence, faites-les passer en utilisant 0,25 % de trypsine. Continuez à passer jusqu’à ce que l’état cellulaire se stabilise, puis ajustez la concentration cellulaire à 3 x 106 cellules/mL.
  3. Injecter 0,1 mL de la suspension cellulaire préparée par voie sous-cutanée dans l’aisselle droite de souris mâles C57BL/6 pour établir le modèle d’adénocarcinome pulmonaire.
    REMARQUE : Le tissu tumoral peut être palpé à l’aisselle des souris 5 jours après l’inoculation.
  4. Après 5 jours, divisez au hasard les souris en cinq groupes (n = 6 par groupe) : Groupe modèle (M) - Aucun traitement ; décoction XY groupe à faible dose (XY-L) - 1,3 g/kg ; décoction XY groupe à dose moyenne (XY-Z) - 2,6 g/kg ; décoction XY groupe à forte dose (XY-H) - 5,2 g/kg ; Groupe cisplatine (DDP) - Traité avec du cisplatine20.
  5. Dissoudre la poudre de décoction XY dans 200 μL d’eau distillée à la dose correspondante et l’administrer par gavage. Les groupes M et DDP reçoivent un volume égal d’eau distillée par gavage.
  6. Administrer du cisplatine au groupe DDP par injection intrapéritonéale (3 mg/kg) une fois tous les 3 jours. Injectez le même volume de solution saline physiologique dans les autres groupes.

5. Analyse pathologique du tissu tumoral

  1. Après 21 jours, euthanasiez toutes les souris en utilisant l’asphyxie au CO2 suivie d’une luxation cervicale (conformément aux directives éthiques) et excisez le tissu tumoral21. Mesurez le volume et le poids de la tumeur (Figure 4).
  2. Fixer les tissus tumoraux excisés dans du paraformaldéhyde à 4 % pendant 24 h). Déshydratez le tissu à l’aide de solutions d’éthanol graduées.
  3. Éliminez les blocs de tissus déshydratés à l’aide de xylène, puis incorporez-les dans de la cire de paraffine fondue. Laissez la cire se solidifier en un bloc de paraffine. Coupez le bloc de tissu en tranches de 5 m d’épaisseur à l’aide d’un microtome.
  4. Déparaffiné les sections de tissu dans du xylène, suivi d’une réhydratation dans des solutions d’éthanol graduées. Teindre les sections avec de l’hématoxyline pendant 5 min, puis rincer à l’eau déminéralisée.
  5. Contre-colorez les sections avec une solution d’éosine à 0,5 % pendant 1 min. Observez les sections colorées au microscope optique et capturez des images pour analyse.

6. Analyse immunohistochimique du tissu tumoral

  1. Effectuez le déparaffinage et la réhydratation en suivant les procédures décrites aux étapes 5.2 à 5.4.
  2. Incuber les sections dans un bloqueur endogène de la peroxydase à température ambiante pendant 15 min. Bloquez la liaison non spécifique en incubant les sections avec du sérum de chèvre.
  3. Appliquez les anticorps primaires : Ki-67 (1:600) et Caspase-3 (1:100). Incuber les sections pendant la nuit à 4 °C. Laver avec un tampon PBS), puis appliquer un anticorps secondaire à usage général (1:500) et incuber à 37 °C pendant 30 min.
  4. Développez la réaction de couleur en ajoutant une solution DAB. Contre-colorez les sections avec une solution d’hématoxyline.
  5. Effectuez la déshydratation, le nettoyage et le scellement des sections tachées. Observez l’expression des protéines au microscope optique et capturez des images pour analyse.

7. Analyse par transfert Western

  1. Homogénéiser les tissus tumoraux à l’aide d’un lyseur de tissus. Extrayez la protéine totale et déterminez sa concentration à l’aide d’un kit de dosage de l’acide bicinchoninique (BCA) (voir le tableau des matériaux).
  2. Effectuer une quantification des protéines, suivie d’une électrophorèse SDS-PAGE et d’un transfert de protéines sur une membrane.
  3. Incuber la membrane pendant la nuit à 4 °C avec des anticorps primaires : P38 (1:2000), p-P38 (1:1000), ERK (1:20000), p-ERK (1:500), JNK (1:2000), p-JNK (1:5000), β-actine (1:200) (voir tableau des matériaux).
  4. Le lendemain, incubez la membrane avec l’anticorps secondaire conjugué à la peroxydase de raifort (HRP) à température ambiante pendant 1,5 h. Détectez les bandes de protéines à l’aide d’un système de chimiluminescence améliorée (ECL).
    REMARQUE : Les intensités des bandes protéiques ont été quantifiées à l’aide du logiciel ImageJ.

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Résultats

Des échantillons de solution de poudre XY et de sérum du groupe témoin et du groupe XY ont été analysés à l’aide de l’UHPLC-QE-MS, révélant des pics bien séparés. Les diagrammes d’ionisation totale pour les modes d’ions positifs et négatifs sont illustrés à la figure 3. La composition de la décoction XY a été déterminée sur la base du temps de rétention, du mode d’acquisition et des fragments de spectre de masse. Quinze composants sanguins ont été identifiés ...

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Discussion

L’incidence du cancer augmente chaque année, suscitant un intérêt clinique et de recherche important22,23. Des études récentes ont démontré l’efficacité de la médecine traditionnelle chinoise (MTC) dans le traitement du cancer du poumon 24,25,26. Par exemple, il a été démontré que la décoction de Maimendong augmente le nombre et l’activi...

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Ce travail a été soutenu par le point (YDZJ202301ZYTS459) du plan de développement scientifique et technologique de la province de Jilin.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
AcétonitrileCNW Technologies5/8/1975
2-Chloro-L phénylalanineShanghai Hengbo Biotechnology Co., Ltd.103616-89-3
Solution d’hydroxyde d’ammoniumChine Groupe pharmaceutique national Chemical Reagent Co., Ltd.#2028
Anticorps -&bêta ;-actineAbcamab8228
Anti-Erk1 (pT202/pY204) + Erk2 (pT185/pY187) AnticorpsAbcamab4819
Anti-ERK1/ERK2 AnticorpsAbcamab184699
Anti-JNK1 (pY185) + JNK2 (pY185) + JNK3 (pY223) AnticorpsAbcamab76572
Anti-JNK1/JNK2/JNK3 AnticorpsAbcamab208035
de signalisation cellulaire d’anticorpsanti-Ki67GB121141
Anticorps anti-p38 (phospho T180)Abcamab178867
Anti-p38 alpha/MAPK14 AnticorpsAbcamab170099
Kit de dosage de concentration en protéines BCABoster Biological Technology17E17B46
Albumine sérique bovine (BSA)DAKOBIOFROXX
Inhibiteur de la phosphatase à large spectre (100x)Boster Biological TechnologyAR1183
C57bl/6 sourisLiaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd.SCXK2021-0006
Colonne chromatographiqueWatersACQUITY UPLC BEH C18 1.7 &mu ; m2.1 * 100 mm
CisplatineChine Groupe pharmaceutique national Réactif chimique Co., Ltd.232120
Citrate (pH 6,0) Solution de récupération d’antigèneWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2010
CouvercleJiangsu Shitai Laboratory Equipment Co., Ltd.10212432C
Étage cryogéniqueWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-L5
DAB Kit chromogèneJiangsu Shitai Laboratory Equipment Co., Ltd.
Agitateur de décolorationBeijing Liu Yi Instrument FactoryWD-9405A
DéshydrateurWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JJ-12J
Four de séchageShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
Aigle modifié de Dulbecco Gibco8121587
EDTA (pH 8,0) Solution de récupération d’antigèneWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2001
EDTA (pH 9,0) Solution de récupération de l’antigèneWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2002
Tampon d’électrophorèseNCM Biotech20230801
Machined’enrobage Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-P5
EosinChine Groupe pharmaceutique national Chemical Reagent Co., Ltd.
éthanolChine Groupe pharmaceutique national Chemical Reagent Co., Ltd.
Sérum fœtal bovinGibco2166090RP
Acide formiqueSIGMA64-18-6
GraphPad Prism softwareGraphPad software, LLCVersion 9.0.0
HématoxylineChine National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.H3136
Chromatographie liquide haute performanceAgilent1260 Infinity II Prime
Centrifugeuse réfrigérée à grande vitesseThermo Fisher ScientificLegend Micro 17R
Spectrométrie de masse haute résolutionThermo Fisher ScientificQ Exactive Focus
HRP Conjuguée chèvre Anti-sourisSeraCare5220-0341
Chèvre conjuguée HRP Anti-LapinSeraCare5220-0336
Chèvre conjuguée HRP Anti-Lapin/Souris Anticorps secondaire universelDAKOK5007
Chèvre conjuguée HRP Anti-RatSeraCare5220-0364
Lapin conjugué HRP Anti-GoatSeraCare5220-0362
Acide chlorhydriqueChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.H9892
Peroxyde d’hydrogèneChine Groupe pharmaceutique national Chemical Reagent Co., Ltd.B12555
Kit de chimiluminescence ECL hypersensibleNCM BiotechP10300
Logiciel ImageJInstitutes of Healthv1.8.0
Système d’imagerieNikon (Japon)NIKON DS-U3
Lewis cellules de carcinome pulmonaireChine National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
Tissu en mailleBaijie100110779650
Instrument de contrôle de la température de chauffage en métalBaiwan Electronictechnology Co., Ltd.HG221-X3
MéthanolAladdinM116118
MicropipetteDlab Scientific Co., Ltd.KE0003087/KA0056573
Jiangsu Shitai Laboratory Equipment Co., Ltd.10212432C
MicrotomeShanghai Leica Instruments Co., Ltd.RM2016
Four à micro-ondesGalanz Appareils électriques à micro-ondes Co., Ltd.P70D20TL-P4
Baume neutreChine Groupe pharmaceutique national Chemical Reagent Co., Ltd.
Microscope optiqueNikon (Japon)Nikon Eclipse CI
OvenShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
PAGE kit de préparation rapidede gel BiosharpPL566B-5
ParaformaldéhydeChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.8.18715
Solution saline tamponnée au phosphate (1x)Gibco8120485
Marqueur protéique de couleur pré-coloré (10-180 kDa)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW176-02
Tampon de chargement de protéines (5X)Boster Biological TechnologyAR1112
pulvérisateurShangzhiqiao Co., Ltd.DFT-100A
PVDF (0,45 &mu ; m)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW120-01
Solution de transfert membranaire rapideCywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW171-02
Lysat RIPABoster Biological Technology Co., Ltd.AR0105
Tampon TBSNCM Biotech23HA0102
Poste de travail de flottation tissulaireJinhua Kedi Instrument Equipment Co., Ltd., Province du Zhejiang.KD-P
Tampon transmembranaireNCM Biotech23CA2000
Trypsine (0,25 %, 1x)HyCloneJ210045
Appareil de perturbation cellulaire par ultrasonsNingbo Xinyi équipement à ultrasons Co., Ltd.JY92-IIDN
Microscope optique droitNikon (Japon)Nikon Eclipse CI
Lanjing Co., Ltd.HD-LG20D
Mélangeur vortexKylin-BellXW-80A
XyleneChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.
Technologie 2005289212954493511 National 90020104Lame de microscope 10004160Lyophilisateur sous vide 214736

Références

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