Techniques efficaces pour l’échantillonnage complet des tissus accessibles chez le xénope adulte

Summary

Il s’agit de la première partie d’un protocole complet d’échantillonnage de Xenopus . Les tissus échantillonnés sont le ventricule cardiaque, le tronc artériel, le lobe hépatique gauche, la vésicule biliaire, le poumon, le pancréas, la rate, le larynx, l’œsophage, l’estomac, les intestins, les testicules, les corps adipeux, l’oviducte, les reins appariés, le plexus sciatique, la peau, le thymus et l’œil entier.

Abstract

Le xénope est depuis longtemps un organisme modèle essentiel pour l’étude du développement et des maladies des vertébrés, offrant des informations approfondies sur les processus cellulaires et la fonction des gènes. Malgré la richesse des informations sur le xénope embryonnaire, il reste une lacune importante dans les méthodes standardisées d’échantillonnage des tissus adultes, en particulier pour les approches modernes comme la protéomique quantitative. Cette étude présente un protocole complet pour un échantillonnage rapide, précis et efficace de plusieurs tissus chez le xénope adulte. Le protocole relève les défis associés aux différences anatomiques subtiles par rapport aux autres anoures, garantissant la reproductibilité même pour ceux qui ont une expérience limitée de la dissection de grenouilles. Ce protocole est optimisé pour des analyses biochimiques de haute qualité en privilégiant la fraîcheur des échantillons. Nous facilitons le prélèvement rapide de jusqu’à 18 tissus en une heure. De plus, les méthodes s’appliquent aux conditions perfusées et non perfusées, offrant une flexibilité pour une gamme de besoins expérimentaux. Ce travail comble non seulement une lacune méthodologique critique pour Xenopus laevis et tropicalis , mais constitue également une ressource précieuse pour les chercheurs qui adaptent les techniques à des modèles d’amphibiens similaires, améliorant ainsi la portée et la fiabilité des études biologiques et évolutives comparatives.

Introduction

Le xénope offre des avantages uniques par rapport aux souris, aux poissons-zèbres et à d’autres organismes modèles pour l’étude des maladies humaines, en particulier dans des contextes de développement et d’évolution. Son développement embryonnaire externe et ses grands embryons facilement manipulables permettent l’observation en temps réel et les interventions expérimentales (par exemple, greffe de tissus, édition de gènes) qui sont difficiles chez la souris, qui se développent en interne et nécessitent des procédures invasives. De plus, le cœur à trois chambres et les membres tétrapodes du xénope fournissent un pon....

Protocol

Toutes les expériences ont été approuvées et réalisées conformément aux règles et règlements de l’IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee IS 00001365_3) de la Harvard Medical School. Si le protocole de perfusion¹³ est suivi avant l’échantillonnage, passez à l’étape 2.3.

1. Préparation (sans perfusion)

1. S’assurer que l’établissement de recherche a approuvé la technique d’euthanasie décrite dans le présent protocole.
2. Préparez une solution de 5 g/L de MS-222 (méthanesulfonate de tricaïne) et de 5 g/L de bicarbonate de sodium (voir le tableau des m....

Results

En suivant toutes les étapes de ce protocole, le ventricule cardiaque, le tronc artériel, le lobe hépatique gauche, la vésicule biliaire, le poumon, le pancréas, la rate, le larynx, l’œsophage, l’estomac, les intestins, les testicules, les corps adipeux, l’oviducte, les reins appariés, le plexus sciatique, la peau, le thymus et l’œil entier ont été proprement excisés dans l’heure qui a suivi l’euthanasie (voir figure 1, figure 2, fig.......

Discussion

Le protocole présenté ici est conçu pour offrir de la flexibilité aux utilisateurs de différents niveaux d’expérience tout en assurant la collecte des tissus essentiels en temps opportun et de manière efficace. Il est conseillé aux nouveaux utilisateurs de suivre chaque étape du protocole comme décrit pour assurer le prélèvement systématique de tissus. Cependant, les utilisateurs plus expérimentés peuvent choisir de sauter certaines étapes et de n’échantillonner que les tissus dont ils o.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS  ;	Corning	21-040-CV
Loupe 5x avec lumière LED et support	amazon.com	la lumière B08QJ6J8P1	ne doit pas produire de chaleur
Pipettes de transfert jetables	VWR	414004-036
Pince à pointes fines de dissection	Fisher Scientific	08-875
Ciseaux de dissection piont pointus, droits 6.5"	VWR	76457-374
Plateau de dissection	Fisher Scientific	14-370-284	sont une alternative acceptable
Conteneur d’euthanasie	US Plastic  ;	Objet  ; 2860	contenants opaques alternatifs acceptables
Couvercle de récipient d’euthanasie	US Plastic  ;	Objet  ; 3047
Ciseaux d’iridectomie 6	"VWR	470018-938	ciseaux à iris sont une alternative acceptable
MS-222 : Syncaine (anciennement tricaïne)	Pentair AES	TRS1
5,5 po, acier inoxydable	Fisher Scientific	S08100
Bicarbonate de sodium, poudre, USP	Fisher Scientific	18-606-333
Pince à échantillons, dentelée	VWR	82027-442
Goupilles en T pour la dissection Fisher	Scinetific	S99385