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Article de méthode

Automatisation de l’implantation tumorale chez les larves de poisson-zèbre pour la recherche et la médecine du cancer

1.6K vues

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DOI :

10.3791/68441

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19 septembre 2025

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Dans cet article

Avis d’erratum

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Résumé

Ici, nous présentons un protocole détaillé pour l’implantation automatisée de xénogreffes tumorales dans des larves de poisson-zèbre à l’aide d’un système d’injection robotisé de pointe. De plus, nous présentons des vidéos d’injection et des données de validation démontrant les performances réussies du système.

Résumé

Les injections de larves de poisson-zèbre, y compris la xénogreffe de tumeurs sous-cutanées et orthotopiques cérébrales ainsi que l’administration de médicaments par voie intraveineuse, sont devenues des techniques centrales dans la recherche sur le poisson-zèbre. Cependant, ces procédures restent fastidieuses, techniquement difficiles et fortement dépendantes des compétences de l’opérateur, ce qui limite le débit et la reproductibilité. Pour remédier à ces limitations, nous introduisons un système robotique avancé qui automatise les micro-injections dans les larves de poisson-zèbre, améliorant ainsi considérablement l’efficacité, la précision et la reproductibilité par rapport aux injections manuelles. Ici, nous fournissons un protocole détaillé pour le fonctionnement de l’injecteur automatisé, un système à haut débit capable de délivrer des liquides, des particules ou des cellules cancéreuses sur trois sites anatomiques différents avec une précision et une vitesse supérieures à celles des chercheurs formés au poisson-zèbre. Nous décrivons les étapes essentielles, y compris la configuration, les étalonnages, les procédures d’injection et le dépannage, pour garantir des performances optimales. De plus, nous fournissons des exemples représentatifs de résultats de l’utilisation du robot et discutons de son potentiel à faciliter les injections larvaires à grande échelle, y compris pour le dépistage de médicaments et la médecine de précision. En intégrant un injecteur automatisé dans les flux de travail, les chercheurs peuvent surmonter les limites des injections manuelles et accélérer la découverte préclinique de médicaments et la sélection de traitements personnalisés.

Introduction

À mesure que notre compréhension du comportement du cancer et de la résistance aux médicaments s’améliore, il est devenu de plus en plus évident qu’il est nécessaire d’améliorer le diagnostic, la caractérisation et le ciblage thérapeutique des sous-types de cancer. Au cours des vingt dernières années, les publications dans le domaine de la médecine personnalisée (également connue sous le nom de médecine de précision) ont augmenté 1,2. En effet, la médecine de précision est définie comme la pratique consistant à adapter le traitement médical en fonction des caractéristiques de ....

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Protocole

Les lignes de poisson-zèbre ont été entretenues selon les protocoles standard (https://zfin.org) et manipulées conformément aux réglementations locales en matière de bien-être animal. Ces réglementations mettent en œuvre les Lignes directrices du Conseil de l’Europe pour la protection des animaux d’expérimentation (Directive 86/609/CEE), qui autorisent l’utilisation de larves de poisson-zèbre jusqu’au début de l’alimentation libre (5 jours après la fécondation). Comme toutes les larves utilisées dans cette étude n’avaient pas plus de 5 jours, aucune licence éthique n’était requise en vertu de la directive 86/609/CEE.

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Résultats

Nous présentons ici le processus d’injection automatisé pour les trois sites d’injection les plus utilisés pour les xénogreffes de cellules cancéreuses.

La vidéo 1 montre l’injection automatique du conduit de Cuvier (DoC) à l’aide du système robotisé. Le robot scanne d’abord la plaque de manière systématique, en se déplaçant de haut en bas et de gauche à droite, pour localiser une larve de poisson-zèbre. Une fois qu’une larve est identifiée, l.......

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Discussion

Le développement et la mise en œuvre de l’injecteur automatisé représentent une avancée significative dans le domaine de la xénogreffe de tumeurs de poisson-zèbre pour le dépistage de médicaments anticancéreux et la médecine de précision. Il s’agit, à notre connaissance, du premier robot disponible dans le commerce pour l’injection automatisée de suspensions cellulaires dans des larves de poisson-zèbre, et ce protocole est donc pertinent pour toutes les recherches qui impliquent de telle.......

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Déclarations de divulgation

Y.D., K.J.v.d.K. et J.d.S. travaillent pour Life Science Methods, qui exploite commercialement le système robotique utilisé dans cette publication. Les autres auteurs ne déclarent aucun conflit d’intérêts.

Remerciements

Nous remercions sincèrement le programme Eurostars d’avoir soutenu nos recherches par le biais de la subvention ROBO-FISH (numéro de subvention : E ! 114899) et le programme EIC-PATHFINDER par le biais de la subvention ALADDIN (numéro de subvention : 101130574).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Plaque à 6 puits   ;Greiner bio-one cellstar  ;réf. 657160
AgaroseVWR#N605-100G
Système d’injection automatisée + consommablesMéthodes des sciences de la viehttps://www.lifesciencemethods.com/microinjection_system_for_zebrafish_larvae.html?nocache=1752058717774
Capillaires en verre borosilicateInstruments de précision mondiauxN/A1,0 mm de diamètre extérieur, 0,78 mm de diamètre intérieur
Compteur cellulaire & nbsp ;ThermoFisherComtesse 3
Aiguilles commerciales   ;Clunbury Scientific LLC  ;#B100-58-20
DNase type I  ;Roche#11284932001
Filtre pour les cellules cancéreusesSysmex CellTricsTM04-0042-231630 & micro ; m
Huile minérale & nbsp ;Diapharma  ;#330779-1L
Meuleuse à aiguilles ()Narishige  ;  ; EG-401
Polyvinylpyrrolidone 40Sigma#102420477
Dissociateur Octo GentleMACSMiltenyi Biotechttps://www.miltenyibiotec.com/US-en/products/gentlemacs-octo-dissociator-with-heaters.html

Références

  1. Goetz, L. H., Schork, N. J. Personalized medicine: motivation, challenges, and progress. Fertil Steril. 109 (6), 952-963 (2018).
  2. Jorgensen, J. T. Twenty years with personalized medicine: Past, present, and future of individualized pharmacotherapy.....

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Réimpressions et autorisations

Erratum


Formal Correction: Erratum: Automating Tumor Implantation in Zebrafish Larvae for Cancer Research and Medicine
Posted by JoVE Editors on 11/03/2025. Citeable Link.

This corrects the article 10.3791/68441

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