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Article de recherche

Effet et mécanisme de l’acide tauroursodésoxycholique dans la bile de renard bleu sur les lésions hépatiques aiguës associées à l’alcool chez la souris

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DOI :

10.3791/68763

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17 octobre 2025

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1School of Pharmacy, Heilongjiang University of Chinese Medicine

Dans cet article

Résumé

Cette étude a évalué les effets hépatoprotecteurs de la bile de renard bleu sur les lésions hépatiques induites par l’alcool chez la souris. La bile de renard bleu, contenant du TUDCA, de l’UDCA, de la bilirubine et de la TCDCA, a réduit les marqueurs de lésions hépatiques et a agi via la voie AGE-RAGE, AKT1 et PPARG, démontrant des propriétés anti-inflammatoires et antioxydantes.

Résumé

La bile animale, comme la bile d’ours, est utilisée depuis longtemps en médecine traditionnelle pour ses bienfaits thérapeutiques. La bile de renard bleu, semblable à la bile d’ours, est considérée dans certaines pratiques traditionnelles comme possédant des propriétés hépatoprotectrices. Cette étude a examiné les composants et les effets de la bile de renard bleu sur les lésions hépatiques associées à l’alcool chez la souris. La bile a été recueillie sur 30 renards bleus et transformée en poudre séchée. La composition chimique de la bile de renard bleu a été analysée à l’aide de la chromatographie liquide à haute performance et de la chromatographie liquide à ultra-performance couplées à la spectrométrie de masse quadripolaire à temps de vol. La pharmacologie de réseau a été utilisée pour identifier les composés bioactifs potentiels, les cibles et les voies associées aux lésions hépatiques associées à l’alcool. Un modèle murin de lésions hépatiques associées à l’alcool a été établi à l’aide de souris Kunming, à qui on a administré de la poudre de bile de renard bleu à des doses faibles et élevées. Les taux sériques d’alanine aminotransférase, d’aspartate aminotransférase et de cholestérol total ont été mesurés. Les tissus hépatiques ont été évalués par coloration à l’hématoxyline et à l’éosine et par dosage du malondialdéhyde. L’amarrage moléculaire a été effectué pour prédire l’affinité de liaison entre les composés actifs et les cibles principales. La bile de renard bleu contenait de l’acide tauroursodésoxycholique (TUDCA), de l’acide ursodésoxycholique, de la bilirubine et de l’acide taurochenodeoxycholique. L’analyse histopathologique n’a révélé aucune anomalie significative ni aucun effet toxique dans les principaux organes après administration orale de poudre de bile de renard bleu. Les principales cibles de la bile de renard bleu comprenaient les protéines AKT1, PPARG, IGF1, MMP9 et CASP3. Le traitement de la bile de renard bleu a diminué les taux sériques d’ALT, d’AST, de cholestérol et de MDA dans des modèles murins de lésions hépatiques liées à l’alcool. La pharmacologie du réseau et l’amarrage moléculaire suggèrent que les effets hépatoprotecteurs de la bile de renard bleu peuvent être liés au récepteur du produit final de glycation avancée pour la voie de signalisation du produit final de glycation avancée. Dans l’ensemble, la bile de renard bleu, dont la teneur en TUDCA est similaire à celle de la bile d’ours, cible des protéines telles que AKT1 et PPARG, démontrant des effets anti-inflammatoires et antioxydants potentiels dans la gestion des lésions hépatiques associées à l’alcool.

Introduction

Les maladies hépatiques associées à l’alcool (ALD) englobent un éventail de lésions hépatiques allant d’anomalies de laboratoire asymptomatiques à une maladie hépatique avancée avec cirrhose et, dans sa forme la plus grave, une maladie hépatique terminale potentiellement mortelle accompagnée d’une défaillance multiviscérale1. La prévalence de l’ALD, y compris la stéatose hépatique associée à l’alcool, représente une forme relativement bénigne et potentiellement réversible de l’ALD1. L’hépatite associée à l’alcool est caractérisée par une inflammation, avec des présentations cliniques allant de la stéatohépatite asymptomatique à l’hépatite alcoolique aiguë, qui se manifeste par un ictère aigu et peut évoluer vers une insuffisance hépatique avec une mortalité élevée à court terme1. L’alcool et ses métabolites modifient le métabolisme des lipides et favorisent l’accumulation de lipides (stéatose) par plusieurs mécanismes, notamment l’inhibition de la β-oxydation des acides gras mitochondriaux et la stimulation de la lipogenèse2. L’éthanol régule à la hausse l’expression du récepteur de la transferrine 1, augmentant ainsi l’absorption hépatique du fer2. L’alcool et l’acétaldéhyde peuvent tous deux endommager directement les hépatocytes, entraînant une augmentation du stress oxydatif, l’inhibition de la régénération de la s-adénosylméthionine, la libération de motifs moléculaires associés aux dommages (DAMPS), l’exposition à des endotoxines bactériennes dans la circulation porte et la formation d’adduits protéiques2. La prise en charge de l’ALD reste difficile en raison des nombreuses voies pathogènesimpliquées3. Les stratégies futures à l’étude comprennent des probiotiques empiriques, des facteurs de croissance, des antioxydants, des anticorps monoclonaux ciblant les facteurs liés à l’inflammation et des interventions comportementales améliorées par la technologie. Cependant, d’autres stratégies thérapeutiques globales restent à explorer.

De nouvelles preuves suggèrent que la bile animale pourrait avoir un potentiel thérapeutique dans la gestion des maladies hépatiques associées à l’alcool (ALD) en raison de ses propriétés anti-inflammatoires et antioxydantes 4,5. La bile animale est un composant important de la médecine traditionnelle chinoise (MTC)6. Dans la MTC, la bile animale est utilisée pour renforcer la fonction du foie et de la vésicule biliaire et soulager la douleur, la fièvre, la toux et l’inflammation. Il a été utilisé dans la gestion des maladies du foie, y compris la cirrhose6. La bile animale possède des propriétés anti-inflammatoires et antioxydantes6, et l’inflammation et le stress oxydatif jouent un rôle central dans la pathogenèse de l’ALD7. Il a également été rapporté que la supplémentation en acides biliaires améliore la stéatose hépatique8. Actuellement, la bile d’ours est le médicament dérivé de la bile le plus largement utilisé, avec l’acide ursodésoxycholique (UDCA) et l’acide taurocholique (TUDCA) comme principaux composants actifs 6,9. Notamment, TUDCA est absent de la bile d’autres animaux, tels que les moutons, les vaches, les poulets et les serpents6. TUDCA a démontré un potentiel thérapeutique dans le traitement des lésions hépatiques aiguës10. À l’heure actuelle, le TUDCA est obtenu par drainage de la bile d’ours (ce qui soulève des préoccupations pour le bien-être animal), synthèse chimique (ce qui est coûteux) ou biotransformation de la poudre de galle de poulet en un équivalent de bile d’ours (qui reste non équivalent à la bile d’ours authentique)11,12. Le renard bleu (Alopex lagopus), également connu sous le nom de renard arctique, est élevé en captivité principalement pour sa fourrure. La Chine est l’un des trois plus grands exportateurs de vêtements en fourrure au monde, et les organes internes des renards bleus récoltés sont généralementjetés. Cela présente une opportunité de valoriser la vésicule biliaire en tant que ressource médicale potentielle. Les renards bleus et les ours sont tous deux carnivores, partageant des similitudes dans la physiologie digestive, le métabolisme et l’alimentation, ce qui suggère que leur composition et leurs effets biliaires pourraient également être similaires. Cependant, cette possibilité n’a pas encore été explorée.

Par conséquent, cette étude visait à examiner les actions pharmacologiques et les mécanismes sous-jacents de la bile de renard bleu dans des modèles d’ALD. Les résultats pourraient fournir de nouvelles pistes de recherche pour développer des substituts de bile d’ours, établir une base scientifique pour l’utilisation de la vésicule biliaire du renard bleu comme ressource médicale, transformer les déchets industriels en produits de valeur et informer le développement thérapeutique futur.

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Protocole

Le protocole de l’étude a été examiné et approuvé par le Comité d’éthique des expériences animales de l’Université de médecine chinoise du Heilongjiang (approbation #2023021101). Toutes les expériences sur les animaux ont été menées conformément aux directives ARRIVE (Animal Research : Reporting of In Vivo Experiments) et aux directives nationales et institutionnelles pertinentes pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire. Comme cette étude impliquait des expériences sur des animaux, le consentement éclairé n’était pas applicable. Toutes les procédures d’élevage et de récolte des animaux à fourrure ont strictement respecté le Règlement technique chinois pour la gestion de l’élevage d’animaux sauvages. L’étude a été approuvée par le Comité d’éthique des expériences animales de l’Université de médecine chinoise du Heilongjiang, Chine (approbation #2023021101).

Préparation d’un échantillon de bile de renard bleu
La ressource de bile de renard bleu est fournie dans la table des matériaux. Au total, 30 renards bleus (Vulpes lagopus) ont été euthanasiés par choc électrique, suivis d’une récolte de fourrure et d’une collecte de la vésicule biliaire. La vésicule biliaire du renard bleu est de forme ovale, avec une section supérieure étroite et une section inférieure gonflée. Sa surface externe est brun foncé avec des plis visibles, et la membrane de la capsule est mince. La bile a été immédiatement aspirée à l’aide d’une seringue stérile jetable de 1 ml et est apparue de couleur noir foncé ou vert foncé. Les vésicules biliaires ont ensuite été séchées à 37 °C pendant 48 h pour obtenir de la poudre de bile de renard bleu séchée (Figure 1). La poudre biliaire résultante présentait une teinte jaune-brun avec une texture brillante et friable. Le rendement moyen en poudre de bile séchée par vésicule biliaire était d’environ 0,82 ± 0,30 g. Pour la préparation de l’échantillon, 250 mg de poudre de bile séchée de renard bleu (tel que décrit ci-dessus) ou d’ours (voir le tableau des matières) ont été dissous dans 1 mL de méthanol à 70 % de qualité chromatographie. La solution a été sonisée par ultrasons (40 kHz, 300 W), filtrée à travers une membrane de 0,22 μm, diluée jusqu’à un volume final de 50 mL (c.-à-d. à 5 mg/mL), puis diluée à une concentration de travail de 0,5 mg/mL pour une analyse ultérieure. L’ensemble du flux de travail expérimental est résumé dans la figure supplémentaire 1.

Dans cette étude, la gamme posologique de poudre de bile de renard bleu utilisée pour les expériences sur les animaux était de 5 à 10 g/kg sur la base d’évaluations de toxicité et d’études pharmacologiques antérieures, sans qu’aucun effet indésirable significatif n’ait été observé à ces concentrations14,15. Lors de la préparation de la poudre biliaire, les vésicules biliaires ont été séchées à 37 °C pendant 48 h ; Cependant, le temps de séchage peut varier en fonction de l’humidité locale et du volume de l’échantillon, de sorte que la teneur en humidité doit être vérifiée pour assurer une déshydratation complète. Pour la dissolution, une concentration de 5 mg/mL dans du méthanol de qualité chromatographie était optimale pour les analyses HPLC et UPLC-Q-TOF-MS ; Une dissolution incomplète ou des résidus particulaires peuvent affecter la précision de l’analyse, nécessitant une sonication ou une filtration supplémentaire. Une limitation connue est la variabilité de la composition de la bile due aux différences saisonnières, alimentaires et physiologiques individuelles chez les renards bleus, ce qui pourrait affecter l’abondance relative de composés actifs tels que TUDCA et UDCA16. Par conséquent, la validation des lots par profilage chromatographique est recommandée avant l’utilisation pharmacologique afin de garantir des profils de composants cohérents.

Analyse pharmacologique en réseau
La composition chimique de la bile de renard bleu a été analysée à l’aide de la chromatographie liquide à haute performance (voir Tableau des matériaux) et de la chromatographie liquide à ultra-haute performance couplée à la spectrométrie de masse quadripolaire à temps de vol (UPLC-Q-TOF-MS). La HPLC a été réalisée à l’aide d’une colonne SB-C18 (4,6 mm x 150 mm, 5 μm) avec une phase mobile composée de 0,03 M de dihydrogénophosphate de sodium (pH ajusté à 4,4 à l’aide d’acide phosphorique) en phase A et de méthanol (voir tableau des matériaux) en phase B (tableau 1). La longueur d’onde de détection a été réglée à 210 nm, avec un débit de phase mobile de 1,0 mL/min, et la température de la colonne était de 40 °C. Le volume d’injection était de 10 μL. L’ANALYSE UPLC-Q-TOF/MS a été réalisée à l’aide d’une colonne UPLCTM HSS T3 (voir le tableau des matériaux). La phase mobile était constituée d’une solution aqueuse d’acide formique (B) à 0,1 % d’acétonitrile (A) ; voir le tableau des matériaux). Le programme d’élution en gradient était le suivant : 0-25,0 min, 98 %-2 % A, et 25,0-28,0 min, 2 %-2 % A à un débit de 4 mL/min. La température de la colonne a été maintenue à 35 °C. La spectrométrie de masse a été réalisée à l’aide d’une source d’ionisation par électronébulisation (ESI) avec les paramètres suivants : débit de solvant gazeux de 650 L/h, température de solvant gazeux de 350 °C, débit de gaz conique de 50 L/h, température de la source d’ions de 120 °C, tension capillaire de 2,8 kV (mode ions positifs) et 2,0 kV (mode ions négatifs), tension conique de 25 V et énergie de collision de 6 eV. Les spectres ont été collectés toutes les 0,2 s avec un intervalle de 0,02 s. Leucine-enképhaline (voir Tableau des matériaux ; [M+H]+=556.2771) a été utilisé comme solution d’étalonnage de référence à une concentration de 40 fmol/μL et un débit de 15 μL/min17.

Analyse de la composition chimique et prédiction de cibles
Les composants actifs de la bile de renard bleu ont été identifiés à l’aide de la CLHP et de l’UPLC-Q-TOF/MS, avec de l’acide aurocholique et du tauroursodésoxycholate de sodium (voir le tableau des matériaux) comme étalons internes18. Les formules structurales des composés identifiés ont été extraites de la base de données PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/). Afin d’explorer des cibles bioactives potentielles, les composants actifs de la bile de renard bleu ont été interrogés dans la base de données PharmMapper (http://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/) afin d’identifier les cibles génétiques associées.

En utilisant les lésions hépatiques alcooliques et les lésions hépatiques induites par l’alcool comme mots-clés, les gènes liés à la maladie ont été obtenus à partir des bases de données GeneCards (https://www.genecards.org/) et OMIM (https://omim.org/). Dans la base de données GeneCards, les cibles ont été sélectionnées en fonction du score de pertinence, avec un seuil fixé à ≥ 20. Ce seuil empirique couramment utilisé assure un équilibre entre sensibilité et spécificité, en conservant les gènes les plus potentiellement pertinents (rappel élevé) tout en filtrant les gènes faiblement apparentés ou bruyants (haute précision). En revanche, aucun filtrage supplémentaire n’a été appliqué dans la base de données OMIM, car elle capture des cibles présentant de solides preuves génétiques, complétant ainsi les scores de pertinence computationnelle des GeneCards. Les données cibles obtenues ont été fusionnées et dupliquées pour identifier les cibles liées à l’ALD. Les cibles des ingrédients actifs et des cibles de la maladie ont été comparées à l’aide de Venny 2.1.0 (https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html) à des fins de visualisation. Les intersections ont été identifiées comme des cibles potentielles de la bile de renard bleu contre l’ALD et ont été importées dans la base de données STRING (http://version10.string-db.org/). Dans la base de données STRING, le réseau d’interaction a été construit avec les paramètres par défaut (score de confiance moyen ≥ 0,4), et les nœuds libres ont été masqués pour améliorer la clarté de la visualisation. Des nœuds libres ont été cachés pour générer le diagramme de réseau d’interaction protéine-protéine (IPP), qui a été visualisé à l’aide du logiciel Cytoscape (version 3.9.1). L’analyse topologique a été effectuée pour calculer les valeurs de degré, et les six cibles ayant les valeurs de degré les plus élevées ont été identifiées à l’aide de la base de données DAVID, https://david.ncifcrf.gov/ avec un seuil de signification de p < 0,05. La base de données de l’Encyclopédie des gènes et des génomes de Kyoto (KEGG) a été utilisée pour l’analyse de l’enrichissement des voies.

Amarrage moléculaire
Un amarrage moléculaire a été effectué pour évaluer les interactions entre les protéines cibles principales et les composants bioactifs de la bile de renard bleu. Les structures tridimensionnelles des protéines cibles de base ont été extraites de la banque de données sur les protéines (https://www.rcsb.org/) du Research Collaboratory for Structural Bioinformatics (RCSB), et les structures des composants biliaires ont été obtenues de la base de données PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/). Les simulations d’amarrage ont été réalisées à l’aide du logiciel MOE (Molecular Operating Environment) (version 2022.02). Pour AKT1, la structure cristalline (ID PDB : 4EKL) a été téléchargée, et le prétraitement dans MOE comprenait l’élimination des molécules d’eau et des ligands originaux, l’ajout d’hydrogène avec protonation à pH physiologique (7,0) et la minimisation de l’énergie. Les structures des ligands (TUDCA, UDCA, TCDCA, TCA et bilirubine) ont été récupérées de PubChem et l’énergie a été minimisée avant l’amarrage. Au cours du processus d’amarrage, plusieurs conformations de ligands ont été générées, et chaque conformation a été placée dans la poche de liaison du récepteur dans diverses orientations spatiales. L’amarrage a été effectué à l’aide du protocole d’ajustement induit, avec London dG pour le placement initial et Affinity dG comme fonction de notation. Trente conformations ont été générées pour chaque ligand, et les poses finales ont été affinées par l’optimisation du champ de force. Tous les autres paramètres ont été réglés sur les valeurs par défaut de MOE sans autre ajustement. L’affinité entre chaque conformation de ligand et le récepteur a été évaluée à l’aide de la fonction de notation du logiciel. Les résultats d’amarrage ont été évalués par l’énergie libre de liaison, la conformation d’énergie la plus négative dans le plus grand amas ayant été choisie comme mode de liaison représentatif. Le mode de liaison avec la plus forte affinité et la conformation optimale a été sélectionné pour la visualisation. Les valeurs d’affinité inférieures à −4,25 kcal/mol indiquent une liaison ligand-cible, les valeurs inférieures à −5,0 kcal/mol indiquent une liaison modérée et les valeurs inférieures à −7,0 kcal/mol indiquent une forte affinité de liaison 19.

Modèles murins d’ALD
Pour cette étude, 30 souris Kunming exemptes d’agents pathogènes spécifiques (FPS) (18-22 g, âgées de 6-8 semaines, 15 mâles, 15 femelles) ont été achetées. Les animaux ont été logés dans des conditions contrôlées à 25 ± 2 °C avec une humidité relative de 60 % ± 10 %, avec un accès ad libitum à la nourriture et à l’eau. Avant l’expérience, les souris ont été acclimatées pendant 1 semaine.

Le modèle ALD a été établi comme suit. Une solution d’éthanol à 70 % v/v a été préparée en mesurant 70,21 mL d’éthanol anhydre dans une fiole jaugée et en ajoutant de l’eau ultrapure à un volume final de 100 mL. La solution a été agitée avec un agitateur magnétique pendant 1 min et laissée reposer pendant 5 min jusqu’à ce qu’aucune séparation de phase ne soit observée. La dose par gavage était de 2 mL/kg de poids corporel, administrée une fois par jour pendant 7 jours consécutifs. Le matin du jour 7, 4 h après le gavage final, des échantillons de sang et de tissus hépatiques ont été prélevés pour une analyse plus approfondie. L’établissement du modèle a été confirmé par l’évaluation d’indicateurs typiques de lésions hépatiques. Les taux sériques d’alanine aminotransférase (ALT), d’aspartate aminotransférase (AST), de cholestérol total (T-CHO) et de malondialdéhyde (MDA) ont été mesurés. De plus, les tissus hépatiques ont été soumis à un examen histopathologique à l’aide d’une coloration à l’hématoxyline et à l’éosine (H&E) pour évaluer la morphologie des hépatocytes, la vacuolisation cytoplasmique, la nécrose et l’infiltration des cellules inflammatoires. Les souris ont été réparties au hasard en cinq groupes (n = 6 par groupe) : le groupe témoin à blanc a reçu 2 ml/kg d’eau distillée ; le groupe modèle a reçu 2 mL/kg d’éthanol à 70 % sans traitement ; le groupe témoin positif a reçu des comprimés hépatoprotecteurs à raison de 0,4 g/kg (voir le tableau des matières) ; le groupe de poudre de bile de renard bleu à forte dose a reçu 10 g/kg de poudre de bile de renard bleu ; Le groupe de poudre de bile de renard bleu à faible dose a reçu 5 g/kg de poudre de bile de renard bleu. Tous les groupes, à l’exception du témoin à blanc, ont reçu par voie orale de l’éthanol à 70 % (2 mL/kg) une fois par jour pendant 7 jours consécutifs pour induire des lésions hépatiques alcooliques. Le jour 7, 4 h après l’administration d’éthanol, les traitements respectifs (comprimés hépatoprotecteurs ou poudre de bile de renard bleu) ont été administrés, et des expériences ultérieures ont été menées. Le groupe témoin à blanc a reçu de l’eau distillée tout au long de l’expérience.

Mesure des transaminases sériques (ALT et AST) et du kit de cholestérol total (T-CHO)
Des échantillons de sang ont été centrifugés à 1 000 x g pendant 15 min à 4 °C pour obtenir du sérum. Les échantillons ont été conservés à -20 °C jusqu’à l’analyse. Des kits commerciaux ont été utilisés pour mesurer les niveaux d’ALT, d’AST et de T-CHO (voir le tableau des matériaux) selon les instructions du fabricant.

Surveillance du poids corporel
Après 7 jours consécutifs d’administration d’éthanol, des traitements ont été administrés le jour 7 et des expériences ont été menées 4 heures après l’administration du matin. Le poids corporel a été enregistré 2 fois par jour pendant la période d’observation. Le poids corporel non à jeun a été mesuré à l’aide d’une balance analytique électronique les jours 1, 2, 3, 5, 7, 10 et 14 après l’administration.

Traitement d’échantillons de tissus
Le 14e jour après l’administration, le poids corporel et l’apport alimentaire restant ont été enregistrés. Les animaux étaient ensuite à jeun dans l’après-midi avec un accès libre à l’eau. Le lendemain (après une période de jeûne de 12 à 16 h), le poids corporel à jeun a été mesuré avant l’euthanasie par luxation cervicale. Des examens pathologiques macroscopiques ont été effectués pour évaluer les changements morphologiques dans les principaux organes, y compris, mais sans s’y limiter, le cœur, le foie, la rate, les poumons, les reins, les glandes surrénales, le cerveau, l’estomac, les intestins, les testicules, la prostate, les ovaires et l’utérus. Des échantillons de tissus du cœur, du foie, de la rate, des poumons, des reins, de l’estomac et des intestins ont été prélevés au hasard dans le groupe témoin à blanc (CN) et le groupe de bile de renard bleu à faible dose (LH), fixés dans du paraformaldéhyde à 4 %, incorporés dans de la paraffine, sectionnés et colorés à l’hématoxyline et à l’éosine (H&E) pour une évaluation histopathologique. Des coupes de tissus ont été examinées et imagées au microscope.

Coloration H&E
Les échantillons de foie ont été fixés avec du paraformaldéhyde à 4 % dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS), incorporés dans de la paraffine et sectionnés. Les sections ont été déparaffinisées dans du xylène I et II, réhydratées à des concentrations décroissantes d’éthanol (100 %, 95 %, 85 % et 75 %), et lavées à l’eau, différenciées, lavées à nouveau et bleuies à l’aide d’une solution bleuissante. Après le rinçage, les sections ont été déshydratées dans de l’éthanol à 85 % et à 95 % pendant 5 minutes chacune, colorées à l’éosine pendant 5 minutes et déshydratées dans de l’éthanol anhydre I, II et III (5 minutes chacune). Enfin, les sections ont été nettoyées dans du xylène I et II (5 min chacune) et montées avec de la gomme neutre. Les images ont été acquises à l’aide d’un microscope optique (100x).

Dosage du malondialdéhyde (MDA) dans les tissus hépatiques
Les échantillons de foie ont été homogénéisés en 9 volumes de solution saline physiologique à l’aide d’un broyeur de tissus. L’homogénat a été centrifugé à 700 x g pendant 10 min à 4 °C. Le dosage de la MDA a été effectué sur le surnageant à l’aide d’une trousse commerciale (voir le Tableau des matériaux) conformément aux instructions du fabricant.

Analyse statistique
Les données sont présentées sous forme de moyennes ±écarts-types (ET). Des comparaisons de groupes ont été effectuées à l’aide d’une analyse de variance (ANOVA) suivie d’un test post hoc de la différence la moins significative (LSD). Les valeurs p bilatérales <0,05 ont été considérées comme statistiquement significatives.

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Résultats

Identification des composés actifs dans la bile du renard bleu
Les renards bleus et les ours sont tous deux carnivores, partageant une physiologie digestive et un métabolisme similaires20. Par conséquent, leur bile peut avoir des compositions comparables. En utilisant les conditions chromatographiques décrites ci-dessus, chaque composé a été bien séparé (Figure 2). Dans cette expérience, le temps de rétention de la norme TUDCA21

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Discussion

Selon le Rapport de situation mondial sur l’alcool et la santé 2018 de l’Organisation mondiale de la santé (OMS), la consommation d’alcool par habitant en Chine est passée de 4,1 L en 2005 à 7,2 L en 2016, ce qui représente une augmentation de 76 %. L’ALD causée par la consommation chronique d’alcool reste une étiologie majeure de la morbidité et de la mortalité hépatiques22. Bo et al. ont établi un modèle de lésions hépatiques induites par le tétrachlorure de car...

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Déclarations de divulgation

Les auteurs ne déclarent aucun conflit d’intérêts.

Remerciements

Ce travail a été soutenu par la Fondation nationale des sciences naturelles de la Fondation chinoise pour la science de la jeunesse (NO.82204562).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
0,03M Dihydrogénophosphate de sodiumN/AN/AHPLC mobile phase A
0,1 % d’acide formique dans l’eauFisher Scientific, États-UnisN/APhase mobile pour UPLC
0,22 &mu ; Filtre à membrane MN/AN/AFiltration des échantillons
4 % ParaformaldéhydeN/AN/AFixation tissulaire
Acétonitrile, qualité chromatographieFisher Scientific, États-UnisN/APhase mobile pour UPLC
Kits ALT, AST, T-CHOShanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd., ChineN/AAnalyse biochimique sérique
Balance analytiqueN/AN/AMesure du poids de l’animal
Acide aurocholiqueInstitut chinois pour le contrôle des aliments et des médicamentsN/AÉtalon interne pour HPLC/MS
Bile d’ours en poudreInstitut chinois pour le contrôle des aliments et des médicaments, PékinN/AMatériel de référence
BilirubineNon spécifiéN/AComposé actif identifié dans la bile
Renard bleuSuihua Fox Farm, Heilongjiang, ChineN/ASource de bile
Poudre de bile de renard bleuPréparation maisonN/AÉchantillon pour l’analyse des composants
Colonne HPLC C18Agilent Technologies, États-UnisZORBAX SB-C18 (4,6& fois ; 150 mm, 5 &mu ; m)Séparation HPLC
Cytoscapehttps://cytoscape.org/Édition 3.9.1Visualisation du réseau et analyse topologique
DAVIDNIHhttps://david.ncifcrf.gov/Analyse de l’enrichissement GO/KEGG
Cartes GeneCardsInstitut Weizmannhttps://www.genecards.org/Récupération de gènes liés à une maladie
L’hématoxyline et l’éosine (H& E)N/AN/AColoration histologique
Système HPLCAgilent Technologies, États-Unis1200 InfiniAnalyse de la composition de la bile
souris Kunming (FPS, 18&ndash ; 22 grammes)Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd.SCXK (Liao) 2020-0010Modèle de lésion hépatique alcoolique
Leucine-enképhalineSigma, États-UnisN/AÉtalon MS (40 fmol/&mu ; L)
Kit de détection MDAShanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd., ChineN/AMesure du stress oxydatif hépatique
Méthanol, qualité chromatographieFisher Scientific, États-UnisN/ASolvant pour la préparation des échantillons
MOEGroupe Informatique chimiqueME 2022.02Analyse de l’amarrage moléculaire
OMIMNIHhttps://omim.org/Récupération de gènes liés à une maladie
Microscope optiqueN/AN/AObservation histologique
PharmMapperECUSThttp://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/Prédiction de cibles composées actives
Acide phosphoriqueN/AN/AAjustement du pH de la phase mobile
PubChem (en anglais)NCBIhttps://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/Récupération de structures composées
Banque de données sur les protéines du RCSBhttps://www.pdbus.org/N/ASource de structure 3D de protéines
Centrifugeuse réfrigéréeN/AN/ASéparation sérique et tissulaire
Tauroursodésoxycholate de sodium (TUDCA)Institut chinois pour le contrôle des aliments et des médicamentsN/AÉtalon interne pour HPLC/MS
CORDEEMBLhttp://version10.string-db.org/Analyse de l’interaction protéine-protéine
UniProtEMBL-EBIhttps://www.uniprot.org/Standardisation des cibles
Système UPLC-Q-TOF-MSWaters, États-UnisUPLC HSS T3 (100& fois ; 2,1 mm, 1,8 &mu ; m)Identification des composants
VennyLe CSIChttps://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.htmlVisualisation de l’intersection cible

Références

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