Article de méthode

Intégration de la thérapie de remplacement rénal continu dans la perfusion par machine hépatique normothermique ex situ

DOI :

10.3791/69214

30 décembre 2025

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

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Ce protocole décrit une méthode d’intégration de la thérapie de remplacement rénal continu (CRRT) dans la perfusion hépatique normotherme exsitu en la connectant au réservoir de perfusion. Cette configuration soutient la stabilité hémodynamique, aide à prévenir des pressions intravasculaires excessives et peut réduire le risque d’œdème tissulaire, en particulier lors de perfusions prolongées.

Résumé

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La perfusion par machine normothermique ex situ (PNM) du foie s’est imposée comme une stratégie de préservation dynamique, permettant le maintien de l’activité métabolique et l’évaluation des greffons avant la transplantation. Les perfusions prolongées, cependant, sont limitées par l’accumulation de déchets métaboliques, des déséquilibres électrolytiques et des médiateurs inflammatoires pouvant compromettre la fonction des greffons. Les thérapies de remplacement rénal continu (CRRT), en particulier l’hémodiafiltration veineuse continue (CVVHDF), offrent un moyen potentiel de soutenir l’élimination des solutés et la régulation homéostatique lors de périodes prolongées de perfusion.

Dans ce protocole, nous décrivons une méthode reproductible et sûre pour intégrer le CVVHDF dans un système NMP hépatique ex situ en connectant le circuit de filtration indépendamment du circuit principal de perfusion de l’organe. Cette configuration soutient la stabilité hémodynamique, aide à prévenir des pressions intravasculaires excessives et peut réduire le risque d’œdème tissulaire. La connexion physique, l’amorçage et la surveillance du circuit CRRT sont expliqués en détail, accompagnés d’instructions sur la manière d’utiliser une pince Hoffman pour simuler la pression veineuse physiologique. Comparé à l’intégration directe en ligne sur circuit, des résultats représentatifs suggèrent que l’approche hors circuit est associée à une réduction de l’œdème des greffons, tout en maintenant une pression circuit stable et un dégagement des solutés. Cette approche peut être facilement intégrée à d’autres dispositifs de perfusion similaires afin d’améliorer la manipulation des solutés tout en maintenant une dynamique de perfusion stable.

Introduction

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La perfusion normothermique ex situ (NMP) est une stratégie de préservation dynamique visant à maintenir l’activité métabolique de l’organe, fournissant oxygène et substrats métaboliques à des températuresphysiologiques 1,2,3. Dans ces conditions, il est possible d’évaluer la blessure et, dans une certaine mesure, la fonctionnalité des organes avant leur transplantation. De plus, la NMP ex situ offre une plateforme potentielle pour le reconditionnement, le traitement et l’évaluation des organes, tant pour la transplantation que pour lesnon-transplantations 3,4.

La durée de la perfusion d’organe ex situ est conditionnée par différents processus physiopathologiques résultant de la perfusion elle-même. La plupart des perfusions rapportées à ce jour, tant dans les études précliniques que cliniques, ont été réalisées pour des périodes relativement limitées, généralement de 6 à 24 heures dans les protocoles standards, avec des rapports sélectionnés s’étendant à plusieurs jours voire semaines dans des conditionsexpérimentales 5,6,7,8. Les processus et événements indésirables survenant lors de la NMP ex situ incluent l’accumulation de déchets métaboliques, l’altération de la composition des électrolytes perfusés, la production d’intermédiaires et de médiateurs inflammatoires, tels que les motifs moléculaires associés aux dommages (AMP), ainsi que l’œdème ou la prise de poids liée aux déplacements de fluides, ce qui peut modifier la viabilité dugreffon 9. Par conséquent, l’intégration de méthodes de purification extracorporelle du sang (EBP) a été évaluée comme un moyen important de réguler et d’éliminer ces différentsproduits 10. Parmi toutes celles disponibles, les plus utilisées sont les thérapies de remplacement rénal continu (CRRT).

La CRRT comprend un ensemble de techniques généralement utilisées chez les patients souffrant d’insuffisance rénale pour filtrer le sang et éliminer différents composants, régulant ainsi l’acidose et les déséquilibres électrolytiques et éliminantles déchets 11,12. Cela inclut l’hémodialyse (HD), l’hémofiltration (HF) et l’hémodiafiltration (HDF)13. La HD s’appuie sur la diffusion pour éliminer de petits solutés (<15 kDa), tels que l’urée ou la β2-microglobuline, et est efficace pour corriger les déséquilibres électrolytiques 14,15,16,17. La MH présente cependant des limitations, telles qu’une faible efficacité dans l’élimination des toxines plus grosses ou liées aux protéines et l’induction d’une activité immunitaire due au contactmembranaire 17,18,19. L’IC repose sur des mécanismes convectifs pour éliminer les molécules plus grosses, y compris les cytokines pro- et anti-inflammatoires, bien qu’il puisse aussi éliminer des composants plasmatiques essentiels, tels que les vitamines, les oligo-éléments et les micronutriments 20,21,22,23. La HDF combine à la fois des mécanismes de diffusion et de convection pour obtenir une élimination plus large des toxines de taille moyenne et des médiateurs inflammatoires, permettant ainsi une modulation plus efficace du milieuinflammatoire 24,25,26,27,28.

La CRRT repose sur des gradients soigneusement contrôlés pour faciliter l’échange de solutés et de fluides à travers les membranes. Dans le cas de la HD, la diffusion est entraînée par des différences de concentration, tandis que la HF et la HDF nécessitent des gradients de pression transmembranaires pour permettre le transportconvectif 29. Lorsque ces systèmes sont intégrés dans des circuits de perfusion ex situ , le contrôle de la dynamique de la pression devient particulièrement pertinent. Les systèmes de perfusion des organes dépendent d’un équilibre précis des pressions pour maintenir un débit adéquat, une oxygénation tissulaire, l’intégrité vasculaire et la fonction métabolique desorganes 30. L’ajout d’un système CRRT introduit des variations de pression qui peuvent modifier l’équilibre délicat au sein du circuit de perfusion des organes.

Nous décrivons ici une stratégie pratique et reproductible pour connecter la CRRT lors de la NMP hépatique ex situ indépendamment du circuit principal de perfusion, en interfaisant à la fois les lignes d’accès et de retour avec le réservoir de perfusion plutôt que la boucle vasculaire. Comparée à l’intégration directe « dans le circuit » (c’est-à-dire la connexion à un circuit de perfusion vasculaire), cette configuration hors circuit découple hydrauliquement la CRRT de la vasculature de l’organe, soutenant une régulation plus stable de la pression et du flux et aidant à atténuer la formation d’œdème induit par la pression causée par la configuration en ligne. Cette approche aide à préserver la stabilité hémodynamique et la manipulation des solutés lors de perfusions d’organes prolongées. De plus, la connexion basée sur le réservoir facilite les étapes opérationnelles, telles que l’amorçage et l’échange de filtres, sans interrompre le circuit principal NMP. Ce protocole est facilement adaptable aux plateformes de perfusion qui offrent un accès au réservoir, et ses principes peuvent être appliqués à toutes les modalités CRRT avec de légers ajustements de configuration.

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Protocole

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Les protocoles de protection animale et expérimentaux ont été approuvés par les comités institutionnels et régionaux d’éthique (Division de l’Agriculture, de l’Élevage et de l’Alimentation de la Communauté de Madrid et l’Organisme de Bien-être Animal [OEBA] de l’Université Autonome de Madrid). Tous les animaux étaient hébergés et les procédures étaient menées au Service de chirurgie expérimentale de l’Hôpital Universitario La Paz, conformément aux réglementations nationales et européennes en vigueur, accréditées par l’Organisation internationale de normalisation (ISO9001:2015) et autorisées par l’autorité régionale (ES280790001941). Dix-sept foies ont été prélevés auprès de donneurs porcins en bonne santé et soumis à un modèle à lésions minimales.

1. Modèle de lésions minimes

  1. Induire une ischémie tiède relative in vivo (13 ± 5 min) afin de récupérer le sang du donneur pour une utilisation sur la machine, suivie d’une ischémie froide (77 ± 16 min).
  2. Pour chaque expérience, initiez la CRRT en utilisant le CVVHDF avec les paramètres opérationnels suivants : débit sanguin (BFR) 100 mL/min, débit de dialyse (DFR) 250 mL/h, et débit de remplacement du fluide délivré après filtre (PBP) 100 mL/h. Réglez l’ultrafiltration nette (U) à 20 mL/h pour prendre en compte les apports de liquides (par exemple, héparine, nutrition parentérale, antibiotiques) et les sorties (par exemple, bile), en visant un équilibre liquide proche du neutre.
  3. Assurez-vous que l’hémofiltre utilise une membrane à flux élevé en polyéthérsulfone avec une surface effective d’environ 0,3m2 et une limite de masse moléculaire d’environ 40 kDa.
  4. Anticoagulez l’ensemble du circuit de perfusion ex situ , y compris le système CRRT, avec de l’héparine non fractionnée (UFH), administré directement dans le réservoir de perfusion sous forme d’un bolus initial de 5 000 UI, suivi d’une perfusion continue à 1 500 UI/h diluée dans une solution saline normale pour prévenir la coagulation et assurer la persévérance du circuit.
  5. Maintenez le circuit NMP à 37,0 ± 0,2 °C à l’aide d’un échangeur de chaleur intégré à l’intérieur du dispositif de perfusion. Assurez-vous que la machine CRRT utilise un chauffe-fluide en ligne afin que le flux de retour entre dans le réservoir à 37 °C, évitant ainsi le refroidissement dû aux solutions de remplacement ou de dialyse. Surveillez la température en continu, aussi bien dans le perfusat que par les capteurs internes du CRRT.

2. Connexion physique et fonctionnelle du CRRT au système de perfusion de machines ex situ

  1. Identifiez les points de connexion.
    1. Identifier un orifice de sortie approprié sur le réservoir du système de perfusion pour servir de point d’accès (aspiration) au circuit CRRT.
    2. Identifier un orifice d’entrée approprié sur le réservoir du système de perfusion pour servir de point de retour (reinfusion).
    3. Installez un tube stérile en assurant le contact avec le réservoir perfusé, s’il n’est pas déjà présent.
      REMARQUE : Les ports d’accès et de retour devraient idéalement être situés en dehors du circuit régulé par pression du système de perfusion ex situ , afin d’éviter de perturber la résistance vasculaire, d’altuer la stabilité du flux et, en fin de compte, d’endommager la greffe. Le réservoir sanguin est le site préféré pour la connexion.
  2. Purgez et sécurisez les lignes de connexion.
    1. Fixez des connecteurs Luer-lock mâles stériles à la fois aux ports d’accès et de retour du système de perfusion, s’ils ne sont pas déjà présents.
    2. Amorçant la conduite d’évacuation du système de perfusion avec la perfusion à l’aide d’une seringue pour éliminer l’air.
    3. Serrez la ligne de sortie pour éviter le reflux jusqu’à la connexion finale.
  3. Connectez le système CRRT au système de perfusion.
    1. Connectez la ligne d’accès au port de sortie purgé du système de perfusion à l’aide du connecteur Luer-lock.
    2. Placez une pince Hoffman ou équivalent sur la ligne de retour CRRT près de sa connexion au système de perfusion pour simuler la pression veineuse physiologique (Figure 1).
      REMARQUE : La serre Hoffman sert à fournir une résistance suffisante en aval, évitant les alarmes ou les interruptions de contre-pression pendant le CRRT. Assurez-vous que la serre n’est pas complètement fermée et que le retour de circulation est continu et visible une fois le traitement commencé.
    3. Connectez la ligne de retour au port d’entrée du système de perfusion à l’aide du connecteur Luer-lock.
  4. Initiez un traitement de purification par perfusion.
    1. Déserrez à la fois la ligne d’accès et le port de sortie du système de perfusion avant de commencer le traitement CRRT.
    2. Confirmez que le système commence le traitement et que le flux sanguin est visible par les deux lignes.
    3. AVERTISSEMENT : Tous les composants du système, y compris la perfusion et l’organe, doivent être considérés comme du matériel biologique potentiellement infectieux. Utilisez toujours un équipement de protection individuelle (EPI) approprié, y compris des gants, des visières et des blouses de laboratoire, lors de l’installation, de l’exploitation et de l’élimination des déchets.
  5. Surveillez la fonctionnalité du circuit CRRT.
    1. Notez les valeurs de température et de pression du système toutes les heures, y compris la pression d’accès, la pression de retour, la pression de préfiltre, la pression transmembranaire (TMP) et la pression des effluents.
    2. Observez le flux sanguin à travers le tube et assurez-vous qu’aucune bulle d’air n’est présente.
    3. Confirmez que les débits de dialyse et de fluide de remplacement se produisent comme prévu.
      ATTENTION : Des écarts soudains par rapport aux valeurs normales peuvent indiquer une coagulation, un blocage du filtre, un pliage des lignes ou une résistance veineuse insuffisante au site de retour. Les valeurs de référence typiques ainsi que leurs écarts et justifications lors de la CRRT se trouvent respectivement dans les Tables 1 et 2.

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Figure 1 : Pince Hoffman positionnée sur un tube pour réguler la pression de retour veineux. La serre est installée sur la ligne de retour avant la connexion au réservoir du système de perfusion normotherme. Cette configuration permet une régulation fine de la résistance à l’écoulement et simule la pression veineuse physiologique, ce qui est crucial pour prévenir les pressions négatives de retour et les fausses alertes dans la machine CRRT. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figurine.

ParamètrePlage attendue (mmHg)Interprétation
Pression d’accès–50 à –200Pression négative due à la prise de sang du réservoir.
Pression de retour< 200Reflète une résistance légère dans la ligne de retour.
Pression pré-filtre100–300Indique l’entrée de sang à filtrer sous débit standard.
Pression transmembranaire (TMP)< 300Marqueur de performance du filtre et de risque de caillot.
Pression des effluents< 300Ça varie selon le remplissage du sac et la résistance.

Tableau 1 : Plages de pression de référence pour la thérapie de remplacement rénal continu lors de la perfusion ex situ . Ce tableau résume les plages de pression attendues (en mmHg) pour les points clés de surveillance du circuit extracorporel, notamment la pression d’accès, la pression de retour, la pression avant le filtre, la pression transmembranaire et la pression sur les effluents. Ces valeurs de référence servent d’indicateurs de référence de la stabilité du circuit, de l’efficacité hydraulique et des performances du filtre lorsque le CRRT est intégré à un système de perfusion ex situ . La déviation pour ces plages peut indiquer un écoulement, une résistance, une occlusion ou une coagulation du filtre nécessitant une évaluation du circuit. Abréviations : CRRT = thérapie de remplacement rénal continu ; TMP = pression transmembranaire.

ParamètreDécouverte anormale (mmHg)Possible CauseAction recommandée
Pression d’accès> –50Mauvais contact du réservoir, occlusion des lignes, ligne pliée ou pincée, air dans la ligne ou faible circulation sanguineVérifiez le niveau et la position du liquide dans le réservoir, enlevez les plis, assurez-vous que la ligne est complètement immergée et non clampée, augmentez le flux sanguin
Pression de retour> 200Retour de la ligne trop profondément immergée, occlusion de la ligne, pincement trop serré, courbure ou coagulationAjustez la profondeur de la ligne de retour, desserrez la serrure, repositionnez la ligne ou vérifiez s’il y a des courbes ou des caillots, envisagez un changement de filtre
Pression pré-filtre> 300Obstruction de l’écoulement, viscosité excessive, coagulation du filtre ou pinces laissées en placeVérifiez la persévérance du circuit, réduisez le débit, vérifiez la présence de caillots, retirez les serre-joints.
Pression transmembranaire (TMP)> 300Coagulation du filtre, haute résistance, filtration avec une ligne ou un sac de filtration, filtre à air dans le filtreChanger le filtre, vérifier s’il y a des caillots ou des plis, déserrer les lignes, retirer l’air, réamorcer si besoin.
< -30Faible débit sanguin du réservoir, ou pompe filtrée plus lente que la pompe de traitement.Vérifiez le niveau du réservoir ou augmentez le débit
Pression des effluents> 300Sac d’effluent plein, occlusion de la ligne ou sac qui ne pend pas librementChangez le sac d’effluent, vérifiez les coudes, assurez-vous que le sac est suspendu librement
Chute soudaine de la pressionFuite ou déconnexionInspectez tout le circuit immédiatement.

Tableau 2 : Guide de dépannage pour la thérapie de remplacement rénal continu lors d’une perfusion ex situ . Ce tableau fournit un guide systématique pour identifier et résoudre les lectures de pression anormales ou les écarts de performance dans le circuit CRRT. Pour chaque paramètre de pression, des anomalies courantes sont listées avec leurs causes possibles et les actions correctives recommandées. Cette référence de dépannage permet la détection rapide des dysfonctionnements du circuit, le maintien d’une performance de filtration adéquate et la prévention des complications liées à la pression lors de la perfusion d’organes ex situ .

3. Élimination des déchets

  1. Collectez l’effluent généré par le circuit CRRT dans des sacs de collecte des déchets scellés directement connectés aux conduites d’effluent de la machine. Une fois remplis, scellez et jetez soigneusement ces sacs comme déchets biohazard liquides, conformément aux réglementations institutionnelles et locales de biosécurité.
  2. Jetez le perfusat utilisé, ainsi que tout agent pharmacologique résiduel ou additif, dans des contenants cliniques désignés destinés aux matériaux bio-dangereux liquides et tranchants.
  3. À la fin de la perfusion, videz les filtres et les tubes dans des sacs de déchets liquides pour éliminer tout résidu de perfusé avant l’élimination. Placez tous les composants ayant été en contact avec du matériel biologique dans des contenants de déchets cliniques homologués pour les déchets médicaux réglementés et traitez-les selon les procédures institutionnelles.
  4. Placez l’organe perfondu dans des sacs de déchets biologiques scellés et jetez-le via des canaux certifiés d’élimination des déchets biologiques, en suivant les protocoles institutionnels et régionaux de biosécurité applicables.
    AVERTISSEMENT : Tous les composants du système, y compris la perfusion et l’organe, doivent être considérés comme du matériel biologique potentiellement infectieux. Utilisez toujours un équipement de protection individuelle (EPI) approprié, y compris des gants, des visières et des blouses de laboratoire, lors de l’installation, de l’exploitation et de l’élimination des déchets.

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Résultats

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L’objectif de ce protocole est de permettre l’intégration de la CRRT lors de la NMP hépatique ex situ d’une manière qui préserverait la stabilité de la perfusion. La CRRT fonctionne sous des conditions négatives de pression et de débit qui, lorsqu’elles sont directement connectées à un circuit de perfusion au sein du système, peuvent perturber l’hémodynamique du circuit (Figure 2A). Pour surmonter cela, le protocole introduit une configuration dans ...

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Discussion

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Ce protocole présente une méthode détaillée et reproductible pour intégrer un dispositif CRRT lors d’une NMP hépatique ex situ en connectant le circuit de filtration au réservoir de perfusion. L’avantage clé de cette approche est la préservation de l’hémodynamique des circuits de perfusion et la prévention des variations de pression délétères généralement observées lors de l’intégration directe en circuit de la CRRT. Les étapes critiques incluent le placement correct des conduit...

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Déclarations de divulgation

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Les auteurs n’ont pas d’autres conflits d’intérêts à déclarer. Les organismes de financement n’avaient aucun rôle dans la conception des études, la collecte et l’analyse des données, l’interprétation des résultats ou la préparation des manuscrits.

Remerciements

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Les auteurs remercient l’Institut de conception innovante Guangdong Shunde pour avoir prêté le système de perfusion et leur soutien financier à la recherche, ainsi que NorrDia Spain Medical Device S.L., pour avoir fourni un système CRRT pour les expériences de perfusion hépatique. Jordi Vengohechea, Joaquim Albiol, Amelia Judith Hessheimer et Constantino Fondevila ont reçu des financements de recherche de l’Institut de Design Innovant Guangdong Shunde. Cette étude a également été soutenue par des fonds de l’Instituto de Salud Carlos III (ISCIII), PI18/00894 et PI23/00364, et cofinancée par l’Union européenne. Jordi Vengohechea a été soutenu par une bourse prédoctorale de l’Université de Barcelone (PREDOCS-UB 2020).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Seringue Luer de 20 mLNipro Medical Espagne SLSY3-10ESC-GEC
Accusol 35 K+ 2
(potassium 2 mmol/L)
NIKKISO Europe GmbHPPE02Fluide de remplacement pour CRRT
Lignée AqualineSNIKKISO Europe GmbHAQUASET03LVSéquence de lignée pédiatrique pour la CRRT
Filtre Aquamax HF03NIKKISO Europe GmbHAQUASET03LVHémofiltre pédiatrique (donneurs jusqu’à 30 kg)
Système AquariusTMNIKKISO Europe GmbHMachine de remplacement rénal continu
Système de perfusion hépatique ex situGuangdong Devocean Medical Instrument Co., Ltd. & nbsp ;Devocean-Liver& Kidney 3000Plateforme principale de perfusion d’organe composée de deux pompes centrifuges avec perfusion pulsatile/pression continue, un panneau de contrôle (capteurs pour pression, débit et température) et une unité de chauffage
Solution saline isotonique de Fresenius 500 mLFresenius Kabi138900
Pince HoffmanGuangdong Devocean Medical Instrument Co., Ltd. & nbsp ;Sur mesureRégulation de la pression sur la ligne de retour
Connecteurs Luer-lock mâlesFourni par l’hôpitalN/APour la connexion entre le tube du système de perfusion et la lignée sanguine de la machine CRRT
Héparine Sodium 25.000 UILaboratorios Farmacé ; Uticos Rovi S.A641639.6
Ensemble de tubes stérilesGuangdong Devocean Medical Instrument Co., Ltd. & nbsp ;Sur mesurePour l’accès au réservoir et les connexions de retour
Collier de serrage universelAchim SchuLz-Lauterbach Vertrieb medizinischer Producte GmbHKL 20

Références

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