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Article de recherche

Protection cardio-cérébrale par électroacupuncture dans un modèle murien d’hypoxie chronique

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DOI :

10.3791/69329

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31 mars 2026

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1Heilongjiang University of Chinese Medicine, 2Hebei Medical University, 3Chengde Medical University, 4Hebei Province Key Lab. of Research and Development for Chinese Medicine, Chinese Medicine Research Institute, Chengde Medical University, 5Hebei University of Chinese Medicine, 6The Second Affiliated Hospital of Heilongjiang University of Chinese Medicine, 7State Key Laboratory for Innovation and Transformation of Luobing Theory

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Cette étude a établi un modèle murien de l’hypoxie chronique sur 12 semaines pour étudier la protection cardio-cérébrale de l’électroacupuncture. Les résultats ont démontré que la stimulation par électroacupuncture aux points d’acupuncture couramment utilisés pour améliorer la fonction cognitive améliorait non seulement la fonction cognitive, mais soulageait aussi les dysfonctions cardiaques et réduisait les lésions pathologiques du tissu myocardique.

Résumé

Cette étude a établi un modèle murien d’hypoxie chronique sur 12 semaines pour étudier les effets cardio-cérébraux protecteurs de l’électroacupuncture. Les approches thérapeutiques existantes pour les troubles liés à l’hypoxie, telles que l’oxygénothérapie hyperbare et certains médicaments, sont souvent limitées par un accès limité ou des mécanismes à cible unique. Pour combler cet écart, nous avons émis l’hypothèse que la stimulation de l’EA aux points d’acuacumesure traditionnellement utilisés pour l’amélioration cognitive pourrait simultanément améliorer les fonctions cognitives et cardiaques dans des conditions hypoxiques chroniques. Trente souris mâles C57BL/6J ont été répartis aléatoirement en trois groupes : groupe témoin (Con), groupe modèle hypoxie chronique (CH) et groupe hypoxie chronique plus traitement par électroacupuncture (CH+EA). Les groupes CH et CH+EA ont été exposés à un environnement hypoxique (10,0 % ± 0,5 % O₂) pendant 8 heures par jour sur 12 semaines, le groupe CH+EA subissant en outre une stimulation quotidienne de l’EA au niveau GV20, GV24 et ST36 bilatéral au cours des deux dernières semaines. Les tests comportementaux, l’évaluation échocardiographique et l’analyse histopathologique ont révélé que l’EA atténuait non seulement significativement les comportements anxieux et améliorait la mémoire spatiale, mais améliorait aussi plusieurs paramètres de la fonction cardiaque, tout en réduisant les lésions neuronales de l’hippocampe et le remodelage myocardique. Ces résultats démontrent que l’EA confère des effets protecteurs cardio-cérébraux, qui s’alignent sur le « concept holistique » de la médecine traditionnelle chinoise, fournissant ainsi une nouvelle stratégie d’intervention non pharmacologique pour les comorbidités cardiocérébrales liées à l’hypoxie.

Introduction

L’hypoxie représente un défi pathologique courant dans diverses affections, notamment les environnements d’altitude, la maladie pulmonaire obstructive chronique (MPOC), les maladies cardiovasculaires, ainsi que dans des scénarios spécialisés tels que les opérations aérospatiales et de plongée, pouvant entraîner une altération fonctionnelle multiorganique. En tant qu’organes ayant la plus forte consommation d’oxygène dans le corps, le cerveau et le cœur sont particulièrement vulnérables aux dommages hypoxiques. Les études montrent que la prévalence du trouble cognitif chez les patients atteints de MPOC varie de 32 % à 88 %, tandis que l’incidence des dysfonctionnements cardiaques atteint jusqu’à 70 %. Des études ont démontré que l’hypoxie chronique induit un dysfonctionnement mitochondrial cérébral, provoquant par la suite un stress oxydatif, une surcharge calcique et une neuroinflammation, ce qui provoque finalement des lésions neuronales dans l’hippocampe et le cortex cérébral et altère les fonctions d’apprentissageet de mémoire 4,5,6. Simultanément, l’hypoxie active à la fois le système nerveux sympathique et le système rénine-angiotensine-aldostérone (RAAS), entraînant une vasoconstriction, une pression artérielle élevée, une augmentation de la postcharge cardiaque, et la promotion de l’hypertrophie et de la fibrose myocardiques, conduisant finalement à une insuffisancecardiaque 7,8,9. Cette lésion cardio-cérébrale concomitante augmente considérablement la difficulté de la prise en charge clinique des patients, faisant du développement de stratégies thérapeutiques efficaces et accessibles un besoin clinique critique non satisfait.

Les stratégies thérapeutiques actuelles pour le trouble cognitif induit par l’hypoxie et les dysfonctionnements cardiaques incluent principalement l’oxygénothérapie hyperbare, les stimulants métaboliques cérébraux (par exemple, piracétam, oxiracétam), la thérapie par facteursneurotrophiques 10,11, et les β-bloqueants (par exemple, métoprolol)12. Cependant, ces approches présentent des limites importantes : l’oxygénothérapie hyperbare nécessite un équipement spécialisé et manque d’accessibilité ; Les interventions pharmacologiques provoquent souvent des effets secondaires et ciblent généralement des voies pathologiques uniques ; tandis que la thérapie par facteur neurotrophique rencontre des défis liés à la pénétration et à la stabilité de la barrière hémato-encéphalique. Ainsi, l’identification de stratégies efficaces et accessibles pour un traitement cardio-cérébral simultané est devenue une orientation clé de la recherche.

L’acupuncture, un élément fondamental de la médecine traditionnelle chinoise (MTC), met l’accent sur une perspective thérapeutique holistique qui s’aligne avec la demande de régulation multi-ciblée. Il démontre un potentiel thérapeutique unique pour les troubles neurologiques et cardiovasculaires. L’électroacupuncture (EA), une évolution moderne de l’acupuncture qui intègre le needling traditionnel à la stimulation électrique, permet une modulation plus précise de l’activité électrophysiologiqueneuronale 13,14. L’AA améliore efficacement la lésion ischémie-réperfusion cérébrale, réduit la libération d’enzymes myocardiques (GPBB, H-FABP) et exerce une cardioprotection significative15,16. En résumé, en tant qu’innovation moderne de l’acupuncture traditionnelle, l’électroacupuncture exerce une régulation multi-mécaniste et multi-ciblée, démontrant une valeur d’application claire et un potentiel clinique dans le traitement des maladies neurologiques et cardiovasculaires, et faisant le lien entre la MTC et la médecine moderne.

Cependant, les études actuelles sur l’AA pour le trouble cognitif hypoxique et les lésions cardiaques se limitent principalement à des effets sur un seul organe/système, ne parvenant pas à explorer son potentiel dans le traitement cardio-cérébral simultané. Basée sur le « concept holistique » de la MTC et la réalité clinique de la comorbidité cardio-pulmonaire-cérébrale induite par une hypoxie chronique à long terme, cette étude vise à étudier l’effet de l’EA dans le « traitement cardio-cérébral simultané », à clarifier son rôle dans l’amélioration synchrone des lésions neuronales induites par l’hypoxie, à l’hypertrophie/fibrose myocardique et aux troubles fonctionnels associés, et à fournir un schéma holistique et ciblé non pharmacologique pour les maladies cardio-pulmonaires et cérébrales associées maladies.

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Protocole

Trente souris mâles C57BL/6J, âgés de 7 à 8 semaines et pesant entre 18 et 22 g (voir Tableau des matériaux), étaient hébergés dans une installation de SPF au New Drug Evaluation Center de l’Institut de recherche pharmaceutique de Yiling du Hebei. La température ambiante était maintenue entre 20 et 26 °C avec une humidité relative de 40 % à 70 %, sous un cycle clair/obscurité de 12/12 heures. Les souris avaient un accès à volonté à la nourriture standard de rongeurs de laboratoire et à de l’eau propre. Après une période d’acclimatation d’une semaine, les souris ont été réparties aléatoirement en trois groupes (n = 10) : le groupe témoin normal (Con), le groupe modèle hypoxie chronique (CH) et le groupe traitement hypoxie chronique plus électroacupuncture (CH+EA). Toutes les procédures expérimentales ont été approuvées par le Comité d’éthique de la recherche animale de l’Institut de recherche pharmaceutique de Yiling du Hebei (Numéro d’approbation : TTN-2025001) et ont été strictement menées conformément aux directives relatives aux soins et à l’utilisation des animaux de laboratoire.

Établissement d’un modèle murin pour hypoxie chronique (Figure 1)

Le modèle murin pour hypoxie chronique a été établi sur la base d’une méthode précédemment décrite avec des modifications17. Un système automatisé de contrôle et de distribution de gaz a été utilisé pour générer et maintenir un environnement hypoxique. Ce système était programmé pour réguler précisément des électrovannes qui mélangeaient de l’oxygène pur et de l’azote à un certain ratio, livrant le mélange dans une chambre d’hypoxie en acier inoxydable sur mesure. Cette configuration permettait un contrôle précis à la fois du timing et de la concentration de l’apport de gaz. La concentration d’oxygène à l’intérieur de la chambre était continuellement surveillée à l’aide d’un analyseur numérique d’oxygène et maintenue à 10,0 % ± 0,5 % via un mécanisme de rétroaction ajustant le débit de gaz en conséquence. Les souris des groupes CH et CH+EA ont été co-logées dans la chambre d’hypoxie et soumises à des conditions hypoxiques pendant 8 heures par jour (de 9h00 à 17h00), après quoi elles ont été ramenées à des conditions normoxiques pour le reste de la journée. Ce protocole a été répété quotidiennement pendant 12 semaines. Tout au long de l’exposition à l’hypoxie, les animaux avaient un accès ad libitum à la nourriture et à l’eau. Une attention particulière a été portée lors de l’infusion initiale d’azote pour réduire la concentration d’oxygène ; Ce processus a été réalisé progressivement afin de prévenir la mort aiguë des animaux due à une baisse rapide des niveaux d’oxygène. Les souris du groupe Con étaient hébergées dans des conditions normoxiques dans une chambre adjacente, toutes les autres conditions d’hébergement étant identiques à celles des groupes expérimentaux.

Anesthésie (Figure 2)

Pour assurer la stabilité animale lors de l’intervention électroacupuncture et minimiser les interférences du stress physiologique sur les résultats, l’isoflurane inhalé a été utilisé pour l’anesthésie dans cetteétude 17. Une anesthésie a été administrée à toutes les souris des groupes expérimentaux pendant les procédures afin d’assurer des conditions opérationnelles constantes. Avant l’anesthésie, une machine d’anesthésie pour petits animaux (voir Tableau des matériaux) et une bouillotte thermostatique réglée à 37 °C ont été préparées pour prévenir l’hypothermie des animaux pendant la procédure. L’induction par anesthésie a été réalisée dans une chambre d’induction scellée utilisant de l’isoflurane à 2 % à 2,5 % (voir Tableau des matériaux) pendant environ 1 minute. Après la perte du mouvement spontané et une réduction significative du tonus musculaire, chaque souris a été transférée sur la bouillotte. Un masque miniature spécialement conçu a été délicatement placé sur son museau pour maintenir l’anesthésie contenant 0,5 % à 1,2 % d’isoflurane. La profondeur effective de l’anesthésie était déterminée par l’absence du réflexe de clignement et l’absence d’un réflexe de retrait significatif en réponse à la stimulation plantaire. Ce protocole anesthésique a maintenu un état anesthésique stable chez les souris pendant plus de 30 minutes, ce qui a suffi pour réaliser toutes les procédures ultérieures.

Traitement par électroacupuncture

L’intervention par électroacupuncture a débuté pour le groupe CH+EA des souris à la 11e semaine d’exposition à l’hypoxie chronique. Les points d’acupuncture sélectionnés étaient Baihui (GV20) et Shenting (GV24) sur la tête, ainsi que le Zusanli bilatéral (ST36). GV20 est situé sur la ligne médiane du sommet crânien, à peu près au milieu entre les deux sommets del’oreille 18. GV24 est situé sur la ligne médiane du front, environ 1 à 2 mm au-dessus du point médian de la ligne reliant le canthi interne desyeux 19. ST36 se trouve sur le membre postérieur, inférieur et latéral à l’articulation du genou, dans une dépression environ 2 mm sous la bordure inférieure de la têtefibulaire 20,21. Après que les souris atteignaient un état anesthésique stable, l’opérateur tenait une aiguille d’acupuncture jetable en acier inoxydable stérile (spécification : 0,18 × 7 mm ; voir Tableau des matériaux) dans la main droite. Pour les points d’acupuncture de la tête (GV24 et GV20), le cuir chevelu était doucement soulevé de la main gauche, et l’aiguille insérée par voie sous-cutanée à un angle de 15 à 30°, avançant vers l’arrière jusqu’à une profondeur d’environ 2 mm. Pour le point d’acupuncture ST36 sur le membre inférieur, l’aiguille était insérée perpendiculairement à une profondeur d’environ 3 à 4 mm. Les électrodes de sortie du dispositif d’électroacupuncture (voir Tableau des matériaux) étaient alors connectées aux poignées des aiguilles : un jeu de fils reliait GV20 et le ST36 gauche, tandis que l’autre reliait GV24 et le ST36 droit. Une stimulation simultanée par électroacupuncture a été appliquée via deux jeux de fils. Les paramètres EA étaient réglés comme suit : onde continue, fréquence 2 Hz22,23. L’intensité du courant a progressivement augmenté de 0,1 mA jusqu’à l’observation de légers spasmes rythmiques du membre local (généralement maintenus autour de 2 mA). L’électroacupuncture a été pratiquée une fois par jour pendant 30 minutes, en continu pendant 6 jours avec 1 jour de repos, pour un traitement total de 2 semaines. Pendant ce temps, les souris des groupes Con et CH ont subi une anesthésie et une contention de durée et de conditions identiques, mais sans insertion d’aiguille ni activation du dispositif d’électroacupuncture.

Test en champ ouvert

Le Test Open Field (OFT) a été réalisé pour évaluer l’activité locomotrice spontanée, le comportement exploratoire et les réponses anxieuses des souris dans un environnement nouveau24. L’appareil OFT était un box blanc (50 cm 50 cm 30 cm), dont le sol était pratiquement divisé en une grille de 25 carrés (chacun de 10 cm 10 cm) pour l’analyse comportementale. Avant le test officiel, toutes les souris étaient acclimatées à la salle de test pendant 1 heure afin de minimiser l’impact du stress induit par le changement environnemental sur les résultats comportementaux. Lors des tests, chaque souris a été délicatement placée au centre de l’appareil. Après une période d’habituation de 2 minutes, son comportement a été officiellement enregistré pendant 10 minutes. L’ensemble de la session a été enregistré à l’aide d’un système de suivi vidéo (voir Tableau des matériaux) pour suivre automatiquement la trajectoire du mouvement. Les paramètres analysés comprenaient la distance totale parcourue, le temps passé dans la zone centrale, la vitesse dans la zone centrale et le nombre d’entrées dans la zone centrale. Toutes les souris ont commencé l’exploration depuis le même endroit central, et chaque souris n’a été testée qu’une seule fois. Pour éviter les interférences olfactives, l’appareil a été soigneusement nettoyé avec 75 % d’éthanol après les tests de chaque souris

Labyrinthe aquatique Morris (MWM)

Le test du labyrinthe d’eau Morris (MWM), une méthode standard pour évaluer la fonction de mémoire, a été principalement utilisé pour évaluer les capacités d’apprentissage spatial et de mémoire chezla souris 25. L’appareil se composait d’un bassin circulaire de 120 cm de diamètre et 30 cm de profondeur, qui était conceptuellement divisé en quatre quadrants égaux (I, II, III, IV). Pour minimiser les distractions extérieures, des rideaux occultants furent accrochés autour de la piscine, et des indices visuels distincts furent fixés sur les murs au-dessus, restant constants tout au long de l’expérience. Le bassin était rempli d’eau maintenue entre 22 et 24 °C, et le niveau d’eau était maintenu à environ 1 cm au-dessus de la surface de la plateforme. Une poudre de dioxyde de titane non toxique a été ajoutée à l’eau à une concentration de 20 % pour la rendre opaque, améliorant ainsi le contraste entre la souris et l’arrière-plan pour un suivi vidéo plus précis. La procédure expérimentale a duré 6 jours consécutifs, comprenant une phase d’entraînement à l’acquisition spatiale de 5 jours suivie d’un essai spatial d’une journée. Pendant la phase d’entraînement, une plateforme circulaire de 10 cm de diamètre a été placée dans le quadrant III, servant de cible. Le premier jour, la plateforme a été positionnée légèrement au-dessus de la surface de l’eau (~1 cm) pour familiariser les souris avec l’objectif d’évasion. Du 2e au 5e jour, la plateforme était submergée à environ 1 cm sous la surface de l’eau pour évaluer l’apprentissage spatial. Chaque jour, chaque souris était placée séquentiellement dans l’eau, face au mur de la piscine, depuis chacun des quatre quadrants dans un ordre prédéterminé. L’expérimentateur quittait aussitôt la pièce après avoir placé l’animal afin d’éviter de devenir un signal spatial involontaire. Le temps nécessaire pour localiser la plateforme cachée (latence d’évasion) était enregistré pour chaque essai. Si une souris ne trouvait pas la plateforme dans le délai de coupure de 90 secondes, elle était doucement guidée vers la plateforme et laissée y rester pendant 30 secondes pour renforcer l’apprentissage spatial, sa latence étant enregistrée à 90 secondes. Si la souris trouvait la plateforme dans les 90 secondes, elle était autorisée à y rester pendant 10 secondes. Après chaque séance d’entraînement, la souris était séchée avec une serviette et ramenée dans sa cage d’origine. La séquence du quadrant de départ était modifiée de manière systématique, avec un intervalle inter-essais d’environ 20 minutes pour chaque souris. Un système de suivi vidéo (voir Tableau des matériaux) enregistrait automatiquement des paramètres tels que la distance de nage, la vitesse et la latence d’échappement. Le sixième jour, un essai par sonde a été mené pour évaluer la mémoire spatiale. La plateforme a été retirée du quadrant cible (quadrant III), et chaque souris a été libérée du quadrant opposé à l’emplacement précédent (quadrant I) et autorisée à nager librement pendant 90 secondes. Le temps passé dans le quadrant cible (où se trouvait auparavant le quai), le nombre de traversées au-dessus de l’emplacement exact de l’ancien quai et la trajectoire de nage ont été enregistrés. Immédiatement après l’essai de la sonde, la souris a été soigneusement séchée et renvoyée dans sa cage d’origine sous une source de chaleur pour éviter l’hypothermie. Tout au long de l’expérience, la position de tous les indices visuels autour du labyrinthe est restée inchangée afin d’assurer la cohérence dans les conditions expérimentales.

Échocardiographie

L’échocardiographie chez la souris est une technique d’imagerie non invasive et en temps réel, essentielle pour évaluer la structure et la fonction cardiaques, et elle a été largement appliquée dans la recherche sur les modèles de maladies cardiovasculaires. L’examen est réalisé sous anesthésie générale, en maintenant l’état anesthésique tout au long de la procédure selon le protocole décrit précédemment. La souris est positionnée sur le dos sur une plateforme contrôlée par thermostat maintenue à 37 °C. Après que les membres ont été délicatement fixés, une crème dépilatoire est appliquée uniformément sur la région thoracique et abdominale. Tous les poils et les résidus de crème sont soigneusement retirés après 1 à 2 minutes pour garantir une qualité optimale de transmission des ultrasons. Pour un suivi physiologique en temps réel, des patchs d’électrodes connectés aux membres via un gel conducteur sont utilisés pour enregistrer en continu l’électrocardiogramme et la fréquence respiratoire. Pour obtenir des vues échographiques standard, la position de la souris est ajustée de façon à ce que sa tête soit légèrement plus haute que sa queue, assurant que l’axe long du cœur soit parallèle à la plateforme. Une attention particulière est portée à éviter d’exercer une pression excessive sur la paroi thoracique avec la sonde, car cela peut modifier la géométrie cardiaque et affecter la précision des mesures. Une quantité généreuse de gel à ultrasons sans bulles (2 à 5 mm d’épaisseur) est appliquée sur la zone rasée. Une sonde à réseau linéaire haute fréquence (30-50 MHz) est utilisée, avec le marqueur d’orientation de la sonde pointant systématiquement vers la tête de la souris. La sonde est initialement positionnée parallèlement à l’axe long du corps de la souris, puis tournée dans le sens antihoraire d’environ 30°-45°. Des ajustements fins sont effectués pour obtenir une vue claire du long axe parasternal du ventricule gauche. L’acquisition dynamique de l’image commence lorsque l’image échographique montre clairement la chambre ventriculaire gauche, les valves aortique et mitrale, et montre l’alignement horizontal de l’apex cardiaque avec le conduit de sortie aortique. Toutes les images sont acquises par un opérateur expérimenté en utilisant des paramètres cohérents afin d’assurer la comparabilité des données. Après l’examen, la sonde échographie est nettoyée selon les procédures standard, et tout gel résiduel est essuyé du corps de la souris. La souris est ensuite transférée dans une cage chaude pour une surveillance rapprochée jusqu’à ce qu’elle se remette complètement de l’anesthésie et retrouve une déambulation normale.

Préparation des sections de paraffine

Après la réalisation des tests comportementaux, les souris ont été anesthésiées par injection intrapéritonéale de pentobarbital sodique (20 mg/kg). La fixation systémique a ensuite été obtenue par perfusion transcardique avec solution saline, suivie de 10 % de paraformodéhyde (voir Tableau des matériaux). Après l’extraction soigneuse des tissus cérébraux, ils ont été immergés dans 10 % de paraformoldéhyde pendant 72 heures de fixation à température ambiante. Il est important de noter que, comme la perfusion cardiaque modifie la microstructure myocardique, les échantillons cardiaques utilisés pour l’analyse histologique dans cette étude ont été spécifiquement prélevés sur des souris n’ayant pas subi la perfusion, tandis que toutes les autres conditions de manipulation sont restées identiques. Après la fixation, les mouchoirs ont été rincés sous l’eau courante pendant 6 heures. La déshydratation par gradient ultérieure a été réalisée à l’aide d’un processeur de tissus automatisé (voir Tableau des matériaux), impliquant une immersion séquentielle dans 60 %, 70 % et 90 % d’éthanol pendant 1 h chacun, suivi de 95 % et 100 % d’éthanol pendant 2 heures chacun. Les échantillons déshydratés ont ensuite été éliminés dans du xylène pendant 2 heures et infiltrés avec de la paraffine à 60°C pendant 3 heures. Enfin, les tissus ont été intégrés dans la paraffine à l’aide d’une machine d’incorporation, assurant une orientation anatomique standard. Après la solidification complète des blocs intégrés, des sections sérieuses de 4 μm d’épaisseur étaient découpées avec un microtome rotatif, montées sur des lames en verre recouvertes de poly-L-lysine, séchées à l’air et stockées pour une teinture et une analyse ultérieures.

Coloration à l’hématoxyline-éosine

L’examen histologique des tissus cérébraux et cardiaques a été réalisé à l’aide de coloration par hématoxyline et éosine (HE) afin d’évaluer la lésion hypoxique et d’évaluer les effets thérapeutiques de l’intervention par électroacupuncture. Les sections de tissu, de 4 μm d’épaisseur, ont d’abord été déparaffinées en xylène I et xylène II (10 min chacune) puis réhydratées à travers une série éthanol graduée (100 %, 95 % et 80 %, 2 min chacune), puis un dernier rinçage à l’eau distillée. Pour la coloration, les coupes étaient immergées dans une solution d’hématoxyline pendant 3 à 8 minutes jusqu’à obtenir une coloration nucléaire claire, rincées sous l’eau courante pour induire le bleuissement, puis contre-colorées à l’éosine pendant 1 à 3 minutes pour obtenir une coloration rose appropriée dans le cytoplasme. Enfin, les sections tachées ont été déshydratées dans de l’alcool absolu, dégagées au xylène et montées avec du baume neutre.

Coloration de Nissl

Pour évaluer le statut de survie des neurones dans la région hippocampique, la coloration de Nissl a été utilisée pour observer la distribution des corps de Nissl et la morphologie cellulaire au sein des neurones. Après la déparaffinisation et la réhydratation des sections de paraffine du tissu cérébral, les tranches étaient immergées dans une solution préchauffée de coloration au bleu toluidine et incubées à 56 °C dans un incubateur à température constante pendant 1 heure. Après la teinture, les sections ont été délicatement rincées à l’eau distillée puis transférées dans une solution de différenciation Nissl pendant plusieurs secondes jusqu’à 2 minutes. Le processus de différenciation était soigneusement surveillé au microscope jusqu’à ce que le fond devienne presque incolore. Par la suite, les sections différenciées étaient rapidement déshydratées par une série absolue d’éthanol, nettoyées en xylène, puis montées avec de la résine neutre pour une conservation et une observation permanentes.

Coloration trichrome de Masson

La coloration trichrome de Masson, une technique classique de coloration des tissus conjonctifs, a été utilisée principalement pour distinguer les fibres de collagène des fibres musculaires dans le tissu cardiaque. Après la déparaffinisation et la réhydratation des sections de paraffine cardiaque, la procédure de coloration a été réalisée conformément aux instructions du fabricant fournies avec le kit de coloration trichrome Masson (voir Tableau des matériaux). Le protocole de coloration s’est déroulé comme suit. Au départ, les coupes étaient immergées dans une solution de travail à l’hématoxyline de fer de Weigert fraîchement préparée pendant 4 minutes pour colorer les noyaux, avec une légère agitation appliquée pour assurer une coloration uniforme. Ensuite, les sections ont été rincées sous l’eau courante, différenciées dans de l’alcool acide à 1 % pendant 5 à 10 s, puis traitées avec une solution de bluissement pendant 4 minutes pour obtenir une coloration nuclée bleu-violet claire. Les coupes ont ensuite été colorées avec une solution de fuchsine acide de Ponceau pendant 5 minutes, suivies d’une différenciation en solution d’acide phosphomolybdique à 0,2 % pendant 1 minute. Après un bref rinçage dans une solution acide faible pendant 1 minute, les sections ont été contre-colorées avec une solution bleue d’aniline à 0,2 % (pH 6,8) pendant 2 minutes pour mettre en valeur les fibres de collagène. Après avoir terminé les étapes de coloration, les sections ont été déshydratées à travers une série d’éthanol gradué, nettoyées au xylène, puis finalement montées avec du baume neutre. Toutes les sections montées ont été capturées numériquement à l’aide d’un système de balayage entièrement automatisé (voir Tableau des matériaux) pour une analyse ultérieure.

Analyse statistique

Les résultats obtenus sont présentés sous la forme de la moyenne ± SEM. Les données ont été analysées à l’aide d’ANOVA unidirectionnelle suivie du test post hoc du LSD ou test t. L’ANOVA bidirectionnelle a été utilisée pour analyser les données de l’OFT et du MWM. P < 0,05 était considéré comme le niveau de signification. L’analyse statistique et les graphiques ont été créés par le logiciel GraphPad Prism 9.0.

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Résultats

L’électroacupuncture atténue les comportements anxieux et les dysfonctionnements cognitifs induits par une hypoxie chronique et soutenue chez la souris.

Le comportement anxieux chez les souris exposées à l’IC a d’abord été évalué à l’aide d’une TO (Figure 3A). Les tracés de trajectoire ont révélé des comportements distincts : les souris témoins présentaient de fortes tendances exploratoires dans cet environnement ...

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Discussion

Cette étude confirme que l’hypoxie chronique à long terme peut induire des comportements anxieux et des troubles de la mémoire spatiale chez la souris, ce qui est cohérent avec les résultats de recherchesprécédentes 26,27. Par ailleurs, nous avons constaté que l’hypoxie chronique à long terme peut également provoquer des dysfonctionnements cardiaques et des lésions structurelles du myocarde. Cependant, il existe actuellement un m...

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Ce travail a été soutenu par la Fondation des sciences naturelles provinciale du Heilongjiang de Chine (PL2025H264), la Plateforme dorée de Yanzhao (A20240022) et le projet de soutien de l’Administration nationale de la médecine traditionnelle chinoise (projet n° : n° 272 [2021] du Bureau du personnel et de l’éducation, NAPTCM).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Solution à 10 % de paraformaldéhydeBioroyee (Beijing) Biotechnology Co.,
Ltd		RL3234
LABYRINTHE ANYScienceSA201Système de suivi vidéo
Souris C75BL/6JBEIJING HFK BIOSCIENCE
CO.,LTD		N°110322220103041767Sexe : Homme,   ; Poids : 18 & nbsp ; 22 g
Aiguilles d’acupuncture jetablesHuatuo246076Aiguilles d’acupuncture stériles à usage unique (0,25 mm & aiguë ; 13 mm)
Dispositif d’électroacupunctureGrande MurailleKWD-808 I
HistoCore MULTICUT - Microtome rotatif semi-automatiséAllemagne, LeicaRM2245Trancheuse à paraffine
Hwato acupuncture   ; aiguilleUsine d’appareils médicaux de Suzhou2655519
IsofluraneRWD Life Science Co., LtdR510-22
Masson' s Kit de taches trichromesSolarbioG1340Kit de teinture en maçons
Labyrinthe aquatique MorrisSansbioSA201Dispositif de labyrinthe aquatique Morris
Pathologie numérique du NanoZoomerHamamatsu Photonics K. KC9600-01
NPD. Vue 2Japon, SakuraLogiciel de lecture de diapositives
Machine d’anesthésie pour petits animauxPropulsionYL-LE-A106
Tissulaire Prisma PlusJapon, Sakura20B2X00014000034Dispositif entièrement automatisé conçu pour colorer des échantillons tels que des sections de tissu incrustées dans la paraffine, des sections congelées et des cellules montées sur lames.
Module d’Intégration Tissue-Tek TEC 6Japon, SakuraM01-021E-02Machine d’embedding à paraffine

Références

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