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Article de recherche

L’acide lipoïque module la voie Nrf2/HO-1 pour supprimer l’inflammation dans la kératite fongique grâce à des mécanismes cytoprotecteurs dirigés par l’hôte

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DOI :

10.3791/69362

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9 décembre 2025

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1Department of Ophthalmology, Jinan 2nd People's Hospital

Dans cet article

Résumé

L’acide lipoïque active la voie cytoprotectrice Nrf2/HO-1 dans la kératite fongique, réduisant les niveaux de cytokines inflammatoires et les lésions cornéennes. Cette thérapie dirigée par l’hôte présente des profils de sécurité supérieurs à ceux des antifongiques conventionnels tout en fournissant des perspectives mécanistes sur le traitement des maladies oculaires dues au stress oxydatif grâce à l’amélioration des voies antioxydantes endogènes.

Résumé

L’acide lipoïque (LA), un antioxydant dithiol doté d’un profil de sécurité oculaire exemplaire, a été étudié pour sa capacité à tempérer le milieu oxydo-inflammatoire qui alimente la kératite fongique. Les cellules épithéliales cornéennes humaines toléraient la LA jusqu’à 60 μM sans perte de viabilité et, lors du défi Aspergillus fumigatus , LA a provoqué une escalade triple de la translocation nucléaire du facteur érythroïde 2 (Nrf2) et une surcharge de cinq fois dans son effecteur en aval, l’hémique oxygénase-1 (HO-1). Le silence pharmacologique de Nrf2 avec ML385 ou le blocage catalytique de HO-1 avec de l’étain protoporphyrine IX ont abrogé ces événements moléculaires et rétabli l’expression de l’interleukine-1β et du facteur de nécrose tumorale α, affirmant une dépendance stricte à Nrf2/HO-1. Des expériences parallèles dans un modèle de kératite murine ont corroboré les observations in vitro : l’AL topique a diminué l’opacité cornéenne et les scores inflammatoires de 47 %, amplifiant simultanément l’expression cornéenne de Nrf2 et HO-1 tout en divisant de moitié les transcriptes cytokinés ; la co-administration de SnPPIX annulait ces avantages. Collectivement, les données délimitent une hiérarchie mécaniste cohérente dans laquelle la LA, à des concentrations cliniquement atteignables, augmente les niveaux de protéines Nrf2 et améliore la translocation nucléaire, potentialise l’activité de HO-1, et ainsi calme la turbulence cytokinique induite par le pathogène. Ces résultats positionnent LA comme un adjuvant facilement traduisible et dirigé par l’hôte, capable de compléter la chimiothérapie antifongique et suggèrent des perspectives thérapeutiques plus larges pour la modulation centrée sur Nrf2 de l’inflammation cornéenne menaçant la vue.

Introduction

La kératite fongique (FK) est désormais reconnue comme une urgence ophtalmique omniprésente, responsable de plus d’un million de cas prouvés en culture chaque année et d’une part disproportionnée de la cécité cornéenne dans les régions tropicales etsubtropicales 1,2. Des estimations d’incidence approchant 6 à 8 pour 100 000 aux États-Unis et encore plus élevées dans les économies agricoles soulignent une menace mondiale croissante qui frappe préférentiellement les populations en âge de travailler après un traumatisme végétal ou l’usure des lentillesde contact 3,4. Les champignons filamenteux, notamment des espèces de Fusarium et Aspergillus, dominent le paysage étiologique, prospérant dans des climats chauds et humides et exploitant les micro-lésions oculaires pour initier l’infection5.

Malgré un demi-siècle d’utilisation clinique, la natamycine 5 % reste le seul agent topique spécifiquement approuvé pour la FK ; cependant, sa chimie polyénétique confère une pénétration cornéenne faible, nécessite des dosages fréquents et n’est pas universellementdisponible 6,7. De manière alarmante, une étude de surveillance successive en Asie du Sud a révélé des augmentations progressives des concentrations inhibitrices minimales de natamycine et de triazoles, les isolats de Fusarium présentant une augmentation annuelle de ≥6 % de la résistance à la natamycine et une tendance parallèle pour le voriconazole8. Ces données correspondent aux rapports cliniques sur l’échec thérapeutique et renforcent les prévisions selon lesquelles le marché des traitements FK passera de 0,9 milliard USD en 2023 à 1,48 milliard USD d’ici 2033, principalement en raison des insuffisances de la pharmacothérapie actuelle. Les mesures chirurgicales ad hoc, telles que les lambeaux conjonctivals ou la kératoplastie pénétrante, sauvent l’anatomie des ulcères récalcitrants, mais sont gourmandes en ressources et limitent la vision9. Collectivement, ces lacunes soulignent la nécessité de stratégies dirigées par l’hôte ou multi-cibles qui vont au-delà de l’action fongostatique.

Le stress oxydatif et la cascade inflammatoire qui en résulte sont désormais considérés comme des déterminants majeurs de la pathogenèse fongique et des cicatrices cornéennes. Lors de l’invasion fongique, les cellules épithéliales cornéennes et les populations immunitaires résidentes, y compris les mastocytes conjonctivals, les cellules dendritiques limbales et les kératocytes stromals, initient des réponses immunitaires innées via des récepteurs de reconnaissance de motifs, tels que Dectin-1 et les récepteursToll-like 10. Les espèces réactives d’oxygène (ROS) dérivées des neutrophiles s’accumulent dans le stroma infecté dans le cadre de l’explosion oxydative antimicrobienne, tandis que les macrophages infiltrants et les lymphocytes T perpétuent l’inflammation chronique par amplification descytokines 11. Paradoxalement, les champignons filamenteux régulent à l’excès leurs propres circuits antioxydants (par exemple, les dismutases de superoxyde régulées par Yap1) pour survivre à ce milieu hostile. Un excès de ROS active à son tour la transcription dépendante de NF-κB d’IL-1β, TNF-α et d’autres médiateurs pro-inflammatoires qui entraînent la destruction des tissus et l’opacificationcornéenne 12. Au centre de la cytoprotection endogène se trouve le facteur 2 lié au facteur érythroïde nucléaire 2 (Nrf2), dont la translocation vers le noyau orchestre l’expression de l’hémigène-oxygénase-1 (HO-1) et d’un ensemble d’enzymes détoxifiantes à travers plusieurs types cellulaires cornéens, y compris les cellules épithéliales, les kératocytes etles cellules endothéliales 13,14. Le vieillissement, le diabète et l’inflammation chronique régulent à la baisse cet axe, rendant les tissus oculaires vulnérables aux insultes oxydatives, tandis que l’amélioration génétique ou pharmacologique de Nrf2 accélère la fermeture des plaies épithéliales et supprime la montée des cytokines dans diverses lésions cornéennes15.

Des études de preuve de concept ont commencé à exploiter cette voie dans la FK. De petites molécules naturelles telles que le périlldéhyde16, l’acidegaulique 17, l’hydroxytyrosol18 et le composé organoséléniqueebselène 19 obtiennent des effets antifongiques et anti-inflammatoires en potentialisant la signalisation du Nrf2-HO-1 tout en altéléssant directement la viabilité fongique. Les plateformes de nanomédecine qui co-administrent antifongiques et antioxydants illustrent encore davantage le potentiel thérapeutique de combiner l’élimination des agents pathogènes avec le renforcement de la défense de l’hôte20,21. Pourtant, beaucoup de ces candidats rencontrent des obstacles translationnels liés à la complexité de la formulation ou à la sécurité oculaire non prouvée.

L’acide lipoïque (LA) est un antioxydant dithiol omniprésent avec un dossier de sécurité systémique bien établi et une polyvalence pharmacodynamique exceptionnelle. Sur la base d’études sur les tissus hépatiques etneuronaux, 10,12 LA est proposé de modifier directement les résidus de cystéine (en particulier Cys151, Cys273 et Cys288) sur la protéine ECH-1 associée à Kelch (Keap1), perturbant ainsi son interaction avec Nrf2 et empêchant ainsi l’ubiquitination de Nrf2 et la dégradation protéosomale, ce qui entraîne une augmentation des niveaux de protéines Nrf2, une translocation nucléaire accrue et une transcription accrue de HO-1. Cependant, une démonstration directe de l’interaction Keap1-LA dans les cellules épithéliales cornéennes nécessite une investigation future. LA a démontré des bénéfices cytoprotecteurs dans les modèles hépatique, neural et oculaire de lésions oxydatives13,15. Sa nature amphipathique facilite la pénétration tissulaire sans la toxicité membranaire observée avec les polyènes, et des formulations cliniques existent déjà pour des indications topiques et systémiques. Néanmoins, la capacité de LA à moduler le microenvironnement inflammatoire cornéen et ainsi à atténuer la FK n’a pas été examinée de manière rigoureuse.

La présente étude a donc examiné si la LA pouvait atténuer la kératopathie induite par A. fumigatus en activant l’axe Nrf2/HO-1 tout en supprimant les cytokines pro-inflammatoires. En utilisant des cellules épithéliales cornéennes humaines et un modèle FK murien validé, nous avons délimité les caractéristiques dose-réponse, disséqué les dépendances mécanistes avec des inhibiteurs sélectifs, et évalué les résultats thérapeutiques avec des groupes témoins non infectés et des groupes infectés traités par véhicule. À notre connaissance, il s’agit de la première étude systématique établissant l’efficacité thérapeutique de l’acide lipoïque dans la kératite fongique par caractérisation complète dose-réponse, une dissection mécaniste utilisant des inhibiteurs pharmacologiques sélectifs de Nrf2 et HO-1, ainsi que la validation sur des modèles cellulaires et animaux. Ce travail intègre de manière unique des relevés moléculaires, cellulaires et translationnels pour fournir des preuves définitives de la dépendance à la voie Nrf2/HO-1 sous-jacente aux effets anti-inflammatoires de LA. En intégrant des relevés moléculaires, cellulaires et in vivo , nous avons cherché à fournir une évaluation complète de LA comme thérapie facilement tradusible et dirigée par l’hôte, qui répond aux deux impératifs de l’éradication des pathogènes et de la retenue inflammatoire dans la FK.

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Protocole

Toutes les procédures animales ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux (numéro de protocole : IACUC-2024-FK-007) et menées conformément à la déclaration de l’Association for Research in Vision and Ophthalmology for the Use of Animals in Ophthalmic and Vision Research. Les mâles C57BL/6 souris, âgés de 8 à 10 semaines et pesant entre 20 et 25 g, étaient hébergés dans des cages ventilées individuellement dans des conditions environnementales contrôlées de 22 ± 2 °C et une humidité relative de 50 % à 60 %, avec un cycle clair-obscur de 12 h 12 h. Ces animaux spécifiques exempts de pathogènes ont été obtenus auprès des laboratoires Charles River (voir Tableau des matériaux). Toutes les souris ont suivi une période d’acclimatation d’une semaine pour s’adapter au nouvel environnement avant les procédures expérimentales, avec un accès illimité à la nourriture et à l’eau standard des rongeurs.

ATTENTION : Aspergillus fumigatus est un organisme pathogène nécessitant un confinement de niveau de biosécurité 2. Toutes les cultures fongiques doivent être manipulées dans un cabinet de sécurité biologique certifié, utilisant un équipement de protection individuelle approprié, y compris des gants, des blouses de laboratoire et une protection oculaire. Le diméthyle sulfoxyde (DMSO) est inflammable et peut pénétrer la peau ; Manipulez dans des zones bien ventilées et évitez le contact direct. La kétamine et la xylazine sont des substances contrôlées nécessitant un stockage sécurisé et une documentation appropriée selon les réglementations institutionnelles.

Préparation expérimentale
Tous les réactifs, médicaments et matériaux nécessaires ont été préparés selon le flux de travail expérimental (voir le tableau des matériaux et la Figure supplémentaire 1 pour le schéma). Des solutions de stock d’acide racinémique (±)-α-lipoïque (LA) ont été préparées à l’aide d’acide racémique α-lipoïque (acide 1,2-dithiolane-3-pentanoïque) dissous dans du DMSO à une concentration de 60 mM et stockées dans des aliquotes à usage unique à -80 °C pour prévenir la dégradation oxydative. L’inhibiteur de Nrf2 ML385 et l’inhibiteur de HO-1 SnPPIX ont été préparés et aliquotés de manière similaire pour un usage unique afin d’éviter les cycles de gel-dégel. Tous les milieux de culture cellulaire et les compléments étaient préparés dans des conditions stériles et préchauffés à 37 °C avant utilisation.

Tous les matériaux contaminés par des cultures fongiques, y compris les plaques d’agar, les tubes de culture et les plastiques jetables, ont été autoclavés à 121 °C pendant 30 minutes avant d’être jetés dans des contenants à déchets biologiques. Les déchets chimiques contenant des solvants organiques étaient collectés séparément et éliminés selon les protocoles institutionnels de santé et sécurité environnementale. Les tissus et carcasses animaux ont été incinérés grâce à des services de déchets biomédicaux agréés.

Culture fongique et préparation à l’infection
Aspergillus fumigatus a été cultivé sur l’agar dextrose de Sabouraud à 37 °C pendant 5 à 7 jours jusqu’à l’observation d’une formation de conides matures. Les conidies ont été récoltés en inondant les cultures matures avec une solution stérile phosphatée tamponnée (PBS) contenant 0,05 % de Tween-80, et les suspensions conidiales ont été filtrées à travers une gaze stérile pour éliminer les fragments hyphaux. La concentration de conidiaux a été déterminée à l’aide d’un hémocytomètre et ajustée aux concentrations établies sur la base de modèles publiés de kératite fongique. Pour les expériences in vitro, 1 x 106 conidies/mL (multiplicité d’infection de 10:1) a été sélectionnée sur la base d’études antérieures démontrant que cette concentration induit des réponses inflammatoires robustes dans les cellules épithéliales cornéennes tout en maintenant une viabilité cellulaire adéquate pour les analyses enaval 16,17. Pour les études in vivo, 1 x 107 conidies/mL a été choisi car cet inoculum produit une kératite constante, de gravité modérée, avec des scores de maladie reproductibles au jour 5 post-infection, offrant une plage dynamique suffisante pour évaluer l’efficacité thérapeutique sans mortalité excessive16,19.

Traitement animal et infection cornéenne
Sous anesthésie générale (injection intrapéritonéale de kétamine 100 mg/kg et xylazine 10 mg/kg), la kératite fongique a été induite en créant trois égratignures linéaires de 1 mm sur la cornée centrale à l’aide d’une aiguille stérile de 25G, suivies d’une application topique de 5 μL de suspension conidiale d’A. fumigatus . Les souris ont été assignées aléatoirement aux groupes de traitement (n=8 par groupe) : témoins (non infectés), témoins infectés, infectés + traitement LA (60 μmol/L localement 4 fois par jour), et infectés + traitement LA + SnPPIX (LA plus 5 mg/kg de SnPPIX intrapéritonéalement par jour). L’évaluation clinique et la collecte de tissus ont été réalisées au cinquième jour post-infection.

Précautions de manipulation des animaux : Toutes les interventions impliquant des animaux anesthésiés doivent être réalisées dans des conditions aseptiques. Surveillez les animaux en continu pendant l’anesthésie pour détecter la dépression respiratoire. Éliminer la literie contaminée, les déchets chirurgicaux et les tissus infectés par autoclavage suivi d’une incinération selon les protocoles institutionnels de gestion des déchets biologiques.

Culture cellulaire et traitement
Les cellules épithéliales cornéennes humaines (HCEC) ont été obtenues à partir de l’ATCC et maintenues dans un milieu DMEM/F-12 complété avec 10 % de sérum bovin fœtal, 1 % de pénicilline-streptomycine et 1 % de L-glutamine à des concentrations équimolaires à 37 °C dans une atmosphère humidifiée de 5 % de CO₂. Les cellules étaient subcultivées tous les 3 à 4 jours après avoir atteint une confluence de 80 % à 90 % et utilisées entre les passages 3 à 8 pour assurer la cohérence. Pour les traitements expérimentaux, les cellules ont été semées à 5 x 10⁴ cellules par puits dans des plaques appropriées et laissées adhérer pendant 24 heures avant le traitement. Pour toutes les expériences mécanistiques in vitro , les cellules ont d’abord été exposées aux conidies d’Aspergillus fumigatus à une multiplicité d’infection (MOI) de 10:1 pendant 4 heures pour établir l’infection, suivies de l’ajout de LA (60 μM), ML385 (5 μM) ou SnPPIX (1 μM) seul ou en combinaison pendant 24 heures supplémentaires avant la collecte de l’échantillon. Cette conception séquentielle permet d’évaluer les effets thérapeutiques de l’AL sur le défi fongique établi plutôt que sur un traitement prophylactique.

Évaluation de la viabilité cellulaire (analyse CCK-8)
La viabilité cellulaire a été évaluée à l’aide du Kit de comptage cellulaire-8 (CCK-8). Les cellules ont été ensemées dans des plaques à 96 puits à 5 x 104 cellules par puits et incubées pendant 24 heures avant traitement. Après exposition au médicament, 10 μL de solution de CCK-8 ont été ajoutés à chaque puits, et les plaques ont été incubées pendant 2 heures à 37 °C. L’absorbance a été mesurée à 450 nm à l’aide d’un lecteur de microplaques multimode. Chaque condition expérimentale a été réalisée en octuplicate, et les expériences ont été répétées trois fois indépendamment. La concentration de contrôle des véhicules (DMSO) a été maintenue en dessous de 0,1 % afin d’éviter les effets cytotoxiques.

Extraction d’ARN et PCR quantitative en temps réel
L’ARN total a été isolé à partir de cellules cultivées et de tissus cornéens à l’aide du kit RNeasy Mini selon le protocole du fabricant. Les échantillons de tissu ont été homogénéisés dans un tampon RLT à l’aide d’un homogénéiseur tissulaire pendant 2 minutes à 50 Hz. La qualité et la concentration d’ARN ont été évaluées à l’aide d’un spectrophotomètre, avec des échantillons présentant des rapports 260/280 de 1,8-2,0 utilisés pour l’analyse en aval. La synthèse d’ADNc de première brin a été réalisée à l’aide du kit de transcription inverse à haute capacité d’ADNc, avec 1 μg d’ARN total par réaction. La PCR quantitative a été réalisée en utilisant un mélange maître qPCR à base de SYBR Green sur un système de PCR en temps réel, avec une dénaturation initiale à 95 °C pendant 2 minutes, suivie de 40 cycles à 95 °C pendant 15 s et 60 °C pendant 1 minute. Une analyse de la courbe de fusion a été réalisée pour vérifier la spécificité de l’amplicon. Tous les amorces ont été validés pour leur efficacité (90 %-110 %) et leur spécificité avant utilisation. L’expression relative de l’ARNm a été calculée à l’aide de la méthode 2(-ΔΔCT) avec GAPDH comme gène de référence.

Extraction des protéines et analyse du Western blot
Pour l’extraction totale des protéines, les cellules et tissus ont été lysés dans un tampon RIPA complété avec des cocktails inhibiteurs de protéase et de phosphatase. Les fractions protéiques nucléaires et cytoplasmiques ont été préparées à l’aide des réactifs d’extraction nucléaire et cytoplasmique NE-PER selon le protocole du fabricant. Les concentrations de protéines ont été déterminées à l’aide du test de Bradford. Des quantités égales de protéines (30-50 μg) ont été séparées par SDS-PAGE et transférées dans les membranes PVDF. Après un blocage avec 5 % de lait écrémé dans une solution saline tamponnée contenant 0,1 % Tween-20 pendant 1 heure, les membranes ont été incubées avec des anticorps primaires toute la nuit à 4 °C, suivies d’anticorps secondaires conjugués à HRP appropriés pendant 1 heure à température ambiante. Les bandes protéiques ont été visualisées à l’aide d’un réactif chimiluminescence amélioré avec des temps d’exposition de 30 à 180 s selon l’intensité du signal. Les bandes ont été quantifiées à l’aide du logiciel ImageJ, la β-actine servant de contrôle de charge pour les protéines totales et la lamin B1 pour les protéines nucléaires.

Évaluation clinique et analyse histologique
La gravité de la maladie cornéenne a été évaluée à l’aide d’un système de notation clinique standardisé basé sur des protocoles établis pour la kératite fongiquemurine 22. Le système de notation évalue trois paramètres sur une échelle de 0 à 4 : l’opacité cornéenne (0 = clair, 4 = complètement opaque), l’irrégularité de surface (0 = lisse, 4 = ulcération sévère avec perforation) et la réponse inflammatoire (0 = pas d’infiltré, 4 = infiltration dense avec hypopyon), donnant des scores totaux de 0 à 12. Toutes les évaluations cliniques ont été réalisées par deux observateurs indépendants qui ont été masqués pour des affectations de groupe de traitement, avec un accord inter-observateurs dépassant 90 %. Des photographies cornéennes ont été prises à l’aide d’un biomicroscope à lampe à fente équipé d’un appareil photo numérique. Pour l’analyse histologique, les yeux ont été nucléés, fixés dans 4 % de paraformaldéhyde, incorporés dans la paraffine, et sectionnés à une épaisseur de 5 μm. Les coupes ont été colorées à l’hématoxyline et à l’éosine pour une évaluation morphologique générale.

Dosage immunosorbant lié aux enzymes (ELISA)
Les niveaux sécrétés d’IL-1β et de TNF-α dans les surnadants en culture cellulaire et les homogénéats de tissu cornéen ont été quantifiés à l’aide de kits ELISA commerciaux selon les instructions du fabricant. Des surnadants en culture cellulaire ont été prélevés après 24 heures de traitement, tandis que les tissus cornéens ont été homogénéisés dans des inhibiteurs de protéases contenant des PBS. Les échantillons ont été centrifugés à 12 000 x g pendant 10 minutes à 4 °C, et des surnatants ont été utilisés pour l’analyse ELISA. Tous les échantillons ont été analysés en double, et les concentrations de cytokines ont été calculées à partir de courbes standard.

Analyse statistique
Toutes les expériences ont été réalisées avec des réplications biologiques appropriées (n ≥6 pour les études in vitro , n = 8 pour les études animales) et répétées au moins 3 fois indépendamment. Les données sont présentées comme moyenne ± erreur standard de la moyenne (MEB). L’analyse des données a été réalisée à l’aide de GraphPad Prism version 9.0. Plus précisément, nous avons utilisé la fonction du test de normalité (Shapiro-Wilk) pour évaluer la distribution des données, l’ANOVA unidirectionnelle avec le test de comparaison multiple de Tukey pour les expériences avec plus de deux groupes, et le test t de Student non apparié pour les comparaisons à deux groupes. Les graphiques étaient générés sous forme de graphiques à barres groupés avec des points de données individuels superposés sous forme de nuages de points, avec des barres d’erreur représentant l’erreur standard de la moyenne.

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Résultats

Le flux de travail expérimental a démontré que le traitement à l’acide lipoïque module efficacement la voie de signalisation Nrf2/HO-1 pour supprimer l’inflammation dans les modèles de kératite fongique.

Évaluation de la cytotoxicité de l’acide lipoïque et des inhibiteurs spécifiques à la voie
Des études initiales dose-réponse ont été menées afin d’établir les concentrations optimales pour chaque composé utilisé dans cette étude. L’AL a démontré une excellente biocompatibil...

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Discussion

Les résultats présents confirment que l’acide lipoïque (LA) est un puissant inducteur de l’axe Nrf2/HO-1 qui atténue la kératite fongique (FK) en limitant l’expression des cytokines pro-inflammatoires et en préservant l’architecture cornéenne. Conformément aux travaux récents montrant une activation robuste de Nrf2 par les composés de dithiolane dans les troublesoxydatifs 15, LA a provoqué une augmentation par cinq des transcrits de HO-1 et a réduit de moitié la s...

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Déclarations de divulgation

Les auteurs ne déclarent aucun conflit d’intérêts lié à cette œuvre. Aucun financement externe ni relation commerciale n’a influencé la conception, l’exécution ou l’interprétation de l’étude.

Remerciements

Cette recherche a été soutenue par un financement interne du département d’ophtalmologie du 2e hôpital populaire Jinan. Les auteurs remercient chaleureusement l’assistance technique fournie par le personnel de laboratoire pour le maintien en culture cellulaire et les procédures de modèles animaux. Remerciements particuliers au Comité de Soins et d’Utilisation Institutionnels des Animaux pour la révision et l’approbation du protocole.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Anti-HO-1Technologie de signalisation cellulaire, Danvers, MA, États-Unis#8803
Anti-&bêta ;-actineSigma-Aldrich, St. Louis, MO, États-UnisA5441
Anti-lamin B1Abcam, Cambridge, MA, États-Unisab16048
Anti-Nrf2Abcam, Cambridge, MA, États-Unisab62352
Aspergillus fumigatus204305 ATCCN/A
Kit d’analyse BradfordLaboratoires Bio-Rad5000006
C57BL/6 sourisLaboratoires Charles RiverN/A
Kit de comptage cellulaire-8 (CCK-8)Laboratoires Dojindo, Kumamoto, Japon343-07623
Milieu DMEM/F-12Gibco, Thermo Fisher Scientific11320033
DMSOSigma-AldrichD2650
Réactif ECLThermo Fisher Scientific32106
Sérum bovin fœtalGibco, Thermo Fisher Scientific16000044
Amorce avant GAPDHSynthèse personnaliséeCoutumes
GlutaMAXGibco, Thermo Fisher Scientific35050061
Kit de transcription inverse à haute capacité d’ADNcBiosystèmes appliqués, Thermo Fisher Scientific4368814
Amorce avant HO-1Synthèse personnaliséeCoutumes
Amorce inversée HO-1Synthèse personnaliséeCoutumes
IgG anti-souris conjugué HRPAbcam, Cambridge, MA, États-Unisab205718
IgG anti-lapin conjugué HRPAbcam, Cambridge, MA, États-Unisab205719
Cellules épithéliales cornéennes humaines (HCEC)ATCC, Manassas, VA, USACRL-11135
IL-1 & bêta ; ELISA KitR& D Systems, Minneapolis, MN, États-UnisDY201
Acide lipoïque (LA)Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, États-UnisT1395
ML385 (inhibiteur de Nrf2)MedChemExpress, Monmouth Junction, NJ, États-UnisHY-100523
Spectrophotomètre NanoDrop 2000Thermo Fisher ScientificND-2000
Réactifs d’extraction nucléaire et cytoplasmique NE-PERThermo Fisher Scientific78833
Amorçage avant Nrf2Synthèse personnaliséeCoutumes
Amorce inversée Nrf2Synthèse personnaliséeCoutumes
PBS avec 0,05 % Tween-80Préparation personnaliséeCoutumes
Pénicilline-streptomycineGibco, Thermo Fisher Scientific15140122
PowerUp SYBR Green Master MixBiosystèmes appliqués, Thermo Fisher ScientificA25741
Système PCR en temps réel QuantStudio 5Thermo Fisher ScientificA28140
Tampon RIPAPréparation personnaliséeCoutumes
RNeasy Mini KitQiagen, Hilden, Allemagne74104
Agar dextrose de SabouraudPréparation personnaliséeCoutumes
Biomicroscope à lampe à fenteÉquipement personnaliséN/A
SnPPIX (inhibiteur de HO-1)Frontier Scientific, Logan, UT, États-UnisF6140
Lecteur de microplaques multimodes Synergy HTXBioTek Instruments, Winooski, VT, États-UnisSYNHXTTR
TBS-T (0,1 % préados-20 ans)Préparation personnaliséeCoutumes
TissueLyser LTQiagen69980
TNF-& alpha ; ELISA KitR& D Systems, Minneapolis, MN, États-UnisDY210

Références

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