Le test d’hémostase de Nimègue : mesure simultanée fluorogénique de la génération de thrombine et de plasmine dans un seul puits

Bauke Haisma; Waander L. van Heerde; An K. Stroobants; Sanna R. Rijpma; Saskia E.M. Schols

doi:10.3791/69701

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Article de méthode

Le test d’hémostase de Nimègue : mesure simultanée fluorogénique de la génération de thrombine et de plasmine dans un seul puits

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DOI :

10.3791/69701

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27 février 2026

Bauke Haisma¹^,² , Waander L. van Heerde²^,³ , An K. Stroobants²^,⁴^,⁵ , Sanna R. Rijpma²^,⁵ , Saskia E.M. Schols¹^,²

¹Department of Hematology, Radboud university medical center, ²Hemophilia Treatment Center Nijmegen-Eindhoven-Maastricht, ³Enzyre BV, Noviotech Campus, ⁴Department of Laboratory Medicine, Radboudumc Laboratory of Diagnostics, Radboud university medical center, ⁵Department of Laboratory Medicine, Laboratory of Hematology, Radboud university medical center

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit le test d’hémostase de Nimègue, qui permet une mesure simultanée et temporelle de la génération de thrombine et de plasmine afin d’assurer une évaluation intégrée de la coagulation et de la fibrinolyse. Le test vise à améliorer la caractérisation de l’équilibre hémostatique dans les milieux de recherche et cliniques, au-delà du cadre des tests hémostatiques conventionnels.

Résumé

La thrombine et la plasmine jouent toutes deux un rôle central dans l’hémostasie, régulant respectivement la coagulation et la fibrinolyse. Les tests hémostatiques conventionnels se concentrent souvent sur des composants isolés ou des phases limitées d’hémostasie ; Par exemple, le temps de thromboplastine partielle activée et le temps de prothrombine évaluent uniquement l’initiation de la formation de fibrine, tandis que les tests d’activité factorielle évaluent la fonction des facteurs de coagulation individuels. Bien que précieux, ces tests manquent d’une vue globale du processus global d’hémostasie secondaire et de fibrinolyse, qui se déroulent dynamiquement dans le temps. Le test d’hémostase de Nimègue (NHA) répond à cette limitation en permettant une mesure simultanée et temporelle de la génération de thrombine et de plasmine dans un seul puits de microplaque. En utilisant deux substrats fluorogéniques synthétiques avec des spectres d’excitation et d’émission distincts et sans réactivité croisée, le test permet une quantification précise des deux enzymes en parallèle. L’hémostasie est initiée dans un plasma pauvre en plaquettes à l’aide d’un facteur tissulaire, d’un calcium et d’un activateur de plasminogène de type tissulaire, et la fluorescence est enregistrée tous les 30 s sur 70 minutes à 37 °C. Les courbes d’activité enzymatique sont générées à l’aide d’étalonnages, à partir desquelles des paramètres tels que le temps de latence, le potentiel de thrombine, le temps de lyse de la fibrine et la hauteur du pic de plasmine sont dérivés. Le test capture de manière fiable la génération simultanée de thrombine et de plasmine avec une bonne précision intra- et inter-dossages, et détecte la modulation de la coagulation et de la fibrinolyse par des effecteurs tels que l’héparine, la protéine C activée et l’acide epsilon-aminocaproïque. Dans des échantillons cliniques, une diminution significative de la génération de thrombine a été observée chez les patients présentant des déficiences en facteurs de coagulation, tandis que les patients atteints de troubles fibrinolytiques présentaient des profils de génération de plasmine élevés. En combinant les mesures de génération de thrombine et de plasmine, la NHA offre une vision complète de l’équilibre hémostatique, au-delà des tests conventionnels. Cette approche intégrée est prometteuse pour la recherche et les applications cliniques, telles que la caractérisation des phénotypes hémostatiques, l’évaluation du risque de saignement et de thrombotique, ainsi que le suivi des interventions thérapeutiques ciblées. Ce protocole décrit la procédure NHA visant à améliorer la compréhension et l’évaluation de l’équilibre hémostatique.

Introduction

L’hémostasie résulte d’un équilibre dynamique entre la coagulation et la fibrinolyse. La thrombine et la plasmine sont les enzymes clés qui alimentent ces processus : la thrombine convertit le fibrinogène en fibrine, tandis que la plasmine dégrade la fibrine pour dissoudre les caillots. La perturbation de cet équilibre peut entraîner des saignements ou des événements^{thrombotiques} ^1,2. Cependant, les tests de laboratoire utilisés pour évaluer l’hémostasie en pratique clinique se concentrent généralement sur des étapes isolées de coagulation ou de fibrinolyse, fournissant une co....