La résistance à la Teicoplanine est-elle détectée par le système automatisé dans les souches de Staphylococcus spp ?

Résumé

Ici, un protocole est présenté pour évaluer la fiabilité d’un système automatisé (VITEK 2) permettant de déterminer la susceptibilité à la teicoplanine dans les isolats de Staphylococcus par comparaison avec la microdilution du bouillon (DMO), avec des applications pour confirmer la résistance et guider une thérapie antimicrobienne appropriée.

Résumé

Un total de 467 isolats de Staphylococcus aureus (S. aureus) et 66 isolats de Staphylococcus (CoNS) coagulase négatif collectés entre juin 2022 et décembre 2024 ont été inclus dans cette étude. Le test de sensibilité à la Teicoplanine a été réalisé à l’aide du système automatisé de test de susceptibilité antimicrobienne, de la microdilution du bouillon (DMO) et d’une méthode de test de gradient. La résistance à la méthicilline a été détectée dans 71,7 % des isolats de S. aureus et dans tous les isolats de CoNS. Dans cette étude, 13 isolats de S. aureus et 4 isolats de CoNS ont été identifiés comme résistants à la téicoplanine par un système automatisé de test de susceptibilité. Les 13 isolats de S. aureus se sont révélés vulnérables à la téicoplanine à la fois par le test du gradient et la DMO. Les quatre isolats de CoNS ont tous été identifiés comme susceptibles par le test du gradient, tandis que la DMO a classé deux isolats comme susceptibles et deux comme résistants. La résistance à la Teicoplanine a été détectée dans quatre souches [S. capitis (n = 1) et S. haemolyticus (n = 3)] parmi les isolats de CoNS par DMO. Les quatre souches de CoNS résistantes à la teicoplanine identifiées par la DMO ont été isolées à partir de hémocultures ; trois ont été obtenus auprès de patients pédiatriques et un d’un patient adulte. Dans l’ensemble, le taux de S. aureus résistant à la méthicilline (MRSA) était relativement élevé dans l’étude, et tous les isolats de CoNS étaient résistants à la méthicilline. De plus, les systèmes automatisés se sont révélés peu fiables pour déterminer la résistance à la teicoplanine, et les isolats identifiés comme résistants doivent être confirmés par la DMO. Étant donné que la téicoplanine est un antibiotique de dernier recours utilisé pour traiter des agents pathogènes tels que le MRSA et le CoNS résistant à la méthicilline, sa susceptibilité doit être étroitement surveillée.

Introduction

Staphylococcus aureus (S. aureus) est l’une des espèces de Staphylococcus les plus cliniquement significatives en raison de sa grande diversité de facteurs de virulence et de sa capacité à provoquer des infections graves dans divers tissus et organes. Il est responsable des infections de la peau et des tissus mous, des infections des tissus profonds, des infections des voies respiratoires, des infections urinaires et des infections sanguines, et reste l’un des agents pathogènes les plus importants dans les milieux^{hospitaliers 1,2}. En particulier, le S. aureus résistant à la méthicilline (MRSA) est une cause majeure d’infections associées aux soins de santé dans le monde et continue d’être une cause majeure d’infections postopératoires des plaies ^2,3. Les staphylococcies coagulases négatifs (CoNS), bien qu’ils fassent partie de la flore cutanée normale, ont été de plus en plus impliqués dans des infections locales et systémiques ces dernières années. Cette augmentation a conduit à des tests de susceptibilité antimicrobienne plus fréquents et, par conséquent, à une détection accrue de la résistance aux antibiotiques glycopeptidiques tels que la^{téicoplanine 4}.

Parce que les souches de S. aureus et CoNS présentent souvent une résistance aux antibiotiques β-lactamiques, les antibiotiques glycopeptidiques, principalement la vancomycine et la teicoplanine, sont largement utilisés pour le traitement de ces infections5. La prévalence croissante des agents pathogènes nosocomiaux Gram-positifs résistants a conduit à une utilisation accrue des glycopeptides, ce qui a contribué à la diminution de la susceptibilité bactérienne à ces^{agents 5,6}. La vancomycine et la téicoplanine ont une efficacité antimicrobienne comparable ; Cependant, plusieurs études ont démontré que la teicoplanine est associée à moins d’effets indésirables, notamment une néphrotoxicité^{réduite 7,8}. Ainsi, la teicoplanine est souvent considérée comme une alternative adaptée à la vancomycine dans certaines populations de patients, y compris celles atteintes de neutropénie, de bactériémie ou d’altération de la fonction^{rénale 9,10}.

La détermination rapide et précise de la susceptibilité aux glycopeptides est importante en raison de l’utilisation généralisée de ces agents dans les infections à Staphylococcus résistantes à la méthicilline et des rapports croissants de souches résistantes aux glycopeptides¹¹. Plusieurs méthodes de laboratoire sont disponibles pour évaluer la susceptibilité aux glycopeptides chez les espèces de Staphylococcus, notamment la dilution de l’agar, les tests de gradient, la microdilution du bouillon (DMB) et les systèmes automatisés de test de susceptibilité aux^{antimicrobiens 5}. Des études antérieures ont rapporté des divergences entre les systèmes automatisés et les méthodes de référence dans la détection d’une sensibilité ou d’une résistance réduite aux glycopeptides, en particulier la teicoplanine,^{chez les espèces} 4,11 de Staphylococcus.

La présente étude visait à évaluer la fiabilité du système automatisé de test de susceptibilité antimicrobienne pour déterminer la susceptibilité à la teicoplanine dans les isolats de Staphylococcus , par rapport à la méthode de microdilution du bouillon, la norme de référence. L’évaluation des caractéristiques de performance du système automatisé peut aider les laboratoires cliniques à évaluer son adéquation à la détection de routine de la susceptibilité aux glycopeptides en pratique clinique.

Protocole

L’étude a été approuvée par le comité d’éthique local le 27 janvier 2025 (numéro de protocole : HRU/25.02.03). L’étude a été menée conformément aux principes de la Déclaration d’Helsinki.

1. Conception de l’étude

Cette étude rétrospective a évalué la performance du système automatisé de test de susceptibilité antimicrobienne pour déterminer la susceptibilité à la teicoplanine chez les espèces de Staphylococcus , en comparant les résultats avec la méthode de référence de microdilution du bouillon (DMO) et une méthode de test de gradient.

2. Sélection isolée

1. Collection d’isolats cliniques
   1. Incluez un total de 467 isolats de S. aureus et 66 isolats de Staphylococcus (CoNS) coagulase négatif obtenus à partir de divers échantillons cliniques entre juin 2022 et décembre 2024.
   2. Traiter tous les échantillons cliniques selon des procédures microbiologiques de routine dans le laboratoire de diagnostic.
   3. N’incluez qu’un seul isolat par patient dans l’analyse. Excluez les isolats répétés obtenus à partir de différents échantillons du même patient.
2. Identification initiale et dépistage
   1. Identifier tous les isolats au niveau de l’espèce à l’aide de la spectrométrie de masse par désorption laser assistée par matrice (MALDI-TOF MS).
   2. Tester S. aureus et CoNS isoler la résistance à la méthicilline et la susceptibilité à la téicoplanine à l’aide de cartes VITEK 2 AST-P664 avec le système automatisé de test de susceptibilité.
   3. Notez les valeurs de concentration inhibitrice minimale (CMI) générées par le système automatisé de test de susceptibilité pour une comparaison ultérieure.
3. Stockage isolément et sous-culture
   1. Conserver les isolats à −80 °C dans un bouillon de soja tryptique complété avec 20 % de glycérol après un système automatisé de tests de susceptibilité.
   2. Avant les tests de référence, isolez la décongélation à température ambiante et faites-les subculturer deux fois sur des agare sanguins de mouton à 5 %.
   3. Incubez les plaques à 37 °C pendant 24 heures après chaque passage afin d’assurer la pureté et la viabilité.

3. Test de susceptibilité aux antimicrobiens

1. Microdilution du bouillon (DMO)
   1. Préparation des solutions de Teicoplanine
      1. Préparez une solution de réserve de poudre de teicoplanine à une concentration de 2560 mg/L dans un bouillon Mueller-Hinton ajusté par cations (CAMHB).
   2. Procédure de microdilution du bouillon
      1. Effectuez des tests de microdilution du bouillon à l’aide de microplaques stériles à 96 puits en U-bottom.
      2. Distribuez 100 μL de CAMHB dans chaque puits. Diluez la solution de stock de téicoplanine dix fois et ajoutez 100 μL au premier puits.
      3. Préparez des dilutions en série doubles entre les puits 1 à 10 afin d’obtenir des concentrations finales d’antibiotiques allant de 64 à 0,125 μg/mL.
      4. Utilisez le puits 11 comme contrôle de la croissance contenant le CAMHB et l’inocule bactérien. Utilisez le puits 12 comme témoin négatif contenant uniquement le CAMHB¹².
   3. Préparation et incubation de l’inocule
      1. Suspendre les colonies bactériennes pures dans une solution saline stérile et ajuster la suspension à une turbidité équivalente à une norme McFarland de 0,5.
      2. Préparez une dilution 1:100 dans le CAMHB et ajoutez 100 μL de la suspension bactérienne aux puits 1 à 11 pour obtenir une concentration finale d’inoculum d’environ 5 × 10⁵ UFC/mL.
      3. Incuber les microplaques à 37 °C pendant 24 heures dans des conditions atmosphériques^{ambiantes 12}.
   4. Détermination et interprétation des CMI
      1. Définissez la concentration inhibitrice minimale (CMI) comme la plus faible concentration de teicoplanine qui inhibe complètement la croissance bactérienne visible après incubation.
      2. Interpréter les valeurs de CMI conformément aux directives 14.0 du Comité européen pour les tests de susceptibilité aux antimicrobiens (EUCAST)^{version 14.0}.

4. Contrôle qualité

1. Utilisez Staphylococcus aureus ATCC 29213, avec une plage de référence de CIM de teicoplanine de 0,25 à 1 mg/L, comme souche de contrôle qualité.

5. Analyse statistique

1. Comparaison de méthodes
   1. Comparez les résultats de la CIM de la teicoplanine obtenus avec le système automatisé de test de susceptibilité avec ceux obtenus par la méthode de référence BMD.
   2. Définissez l’accord catégoriel (AC) comme des résultats concordants susceptibles ou résistants entre les deux méthodes.
2. Classification des erreurs
   1. Définir les erreurs très majeures (VME) comme des isolats catégorisés comme susceptibles par le système automatisé de tests de susceptibilité mais résistants par la DMO.
   2. Définir les erreurs majeures (ME) comme des isolats catégorisés comme résistants par le système automatisé de test de susceptibilité mais susceptibles par la DMO.
3. Critères de performance
   1. Considérer la performance de la méthode comme acceptable lorsque l’accord catégoriel est de ≥90 % et que les taux de VME et ME sont de ≤3 %, conformément aux critères d’évaluation^{publiés 14,15}.

Résultats

Un total de 533 isolats récupérés à partir d’échantillons cliniques sur une période de 2,5 ans ont été inclus dans l’analyse. Tous les isolats de CoNS résistants à la méthicilline (MR-CoNS), ainsi que 71,7 % des isolats de S. aureus , se sont révélés résistants à la méthicilline. Les échantillons de prélèvement de plaie étaient les échantillons cliniques les plus courants fournissant des isolats de S. aureus , tandis que les isolats de MR-CoNS étaient les plus fréquemme...

Discussion

La résistance aux antimicrobiens est l’une des menaces les plus importantes pour la santé publique mondiale, contribuant à l’augmentation des coûts de santé, à l’échec des traitements et à la^{mortalité 3}. L’incidence des infections acquises tant dans la communauté que dans les hôpitaux causées par Staphylococcus aureus continue d’augmenter au niveau national et mondial. La résistance à la méthicilline, en particulier, est associée à une augmentation de la ...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Bouillon Mueller Hinton ajusté au cation.	Sigma-Aldrich, Darmstadt, Allemagne	CM0405B	Pour la croissance bactérienne dans la méthode de microdilution du bouillon
MALDI-TOF MS	VITEK MS, BioM & eacute ; rieux, France	410893	Pour l’identification bactérienne
Norme McFarland	bioMé ; rieux, France	95060-958	Standardisation de l’inoculum bactérien
Plaques de Petri	RTA, T&UUML ; Rkiye	2102	Pour la préparation du milieu et la culture bactérienne
Pointe de pipette 20 - 200 & mu ; L	Sigma-Aldrich, Darmstadt, Allemagne	Z740105	Pour la distribution de Mueller et d’un trait de bord ajusté par cations ; Bouillon Hinton (CAMHB) dans des microplaques U-bottom et préparation de dilutions en série
Agar de sang de mouton	RTA, T&UUML ; Rkiye	2001	Isolement et culture des micro-organismes
Staphylococcus aureus	Collection de la culture de type américain	29213	Souche de référence utilisée dans cette étude
Poudre de Teicoplanine	Sigma-Aldrich, Darmstadt, Allemagne	T0578	Antibiotiques
Bouillon de soja tryptique & nbsp ;	Merck, Allemagne	1,054,590,500	Isolement et culture des micro-organismes
Plaque de puits inférieur en U	Thermo Fisher Scientific	163320	Pour le test de susceptibilité aux antimicrobiens par la méthode de microdilution du bouillon
VITEK 2 cartes AST-P664   ;   ;	bioMé ; rieux, France	414197	Pour les tests de sensibilité aux antimicrobiens
VITEK2 Compact	bioMé ; rieux, France	4700030	Pour les tests de sensibilité aux antimicrobiens