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Impact des différentes méthodes d’extraction sur les profils de bioactivité in vitro de Terfezia claveryi

DOI:

10.3791/69950

March 20th, 2026

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Summary

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La bioactivité in vitro des extraits de Terfezia claveryi dépendait de la méthode d’extraction biophysique et de la polarité du solvant. L’extrait d’eau issu de l’extraction assistée par macération (MAE) a présenté l’activité antioxydante la plus forte, tandis que l’extrait d’extraction de Soxhlet (SE) a induit une cytotoxicité accrue dans les cellules SH-SY5Y. Ces résultats démontrent des différences nettes dépendantes de la méthode dans la bioactivité in vitro des extraits de Terfezia claveryi.

Abstract

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Terfezia claveryi est une truffe comestible du désert, traditionnellement consommée dans les régions arides. Ces dernières années, elle a suscité un intérêt scientifique croissant en raison de ses propriétés potentielles antioxydantes, antimicrobiennes et thérapeutiques, suggérant des applications possibles dans les domaines de l’alimentation et de la santé. Cependant, malgré les preuves croissantes de son potentiel biologique, l’influence des différentes stratégies d’extraction sur la récupération des composés bioactifs et le profil de bioactivité in vitro résultant de Terfezia claveryi n’a pas encore été clarifiée dans la littérature. Dans cette étude, la bioactivité in vitro des extraits de Terfezia claveryi obtenus à l’aide de différentes méthodes d’extraction et solvants de polarité variable a été évaluée. Le rendement d’extraction a été déterminé, et les extraits obtenus ont été évalués pour leurs activités antioxydantes, antimicrobiennes, antibiofilms et cytotoxiques à l’aide de systèmes de test établis. La capacité antioxydante a été mesurée à l’aide de tests 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyl (DPPH), 2,2′-azino-bis (3-éthylbenzothiazoline-6-sulfonique) (ABTS) et du pouvoir antioxydant réduction ferrique (FRAP), tandis que les effets cytotoxiques ont été étudiés dans les cellules neuroblastomes SH-SY5Y. Le rendement d’extraction variait selon la méthode et la polarité du solvant, le rendement le plus élevé étant obtenu à partir de l’extrait aqueux préparé par la méthode d’extraction assistée par ultrasons (EAU) (18,40 %). Il a été déterminé que l’activité antioxydante présentait des différences significatives selon la méthode d’extraction, et que les extraits aqueux obtenus par la méthode d’extraction assistée par macération (MAE) présentaient un profil riche en composés phénoliques ainsi qu’une capacité de récupération radicale la plus forte. L’analyse LC-MS/MS de cet extrait a révélé la présence de neuf composés phénoliques ; L’acide quinique et l’acide chlorogénique ont été identifiés comme les composants dominants. En revanche, les extraits dérivés de Soxhlet ont induit des effets cytotoxiques plus importants dans les cellules SH-SY5Y. Les réponses antimicrobiennes et antibiofilms ont montré une variation relativement limitée entre les méthodes d’extraction, indiquant une dépendance moindre à la stratégie d’extraction pour ces activités. Dans l’ensemble, ces résultats démontrent que la méthode d’extraction biophysique et la sélection des solvants sont des déterminants critiques du profil bioactif in vitro des extraits de Terfezia claveryi , avec des effets marqués observés pour les activités antioxydantes et cytotoxiques.

Introduction

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L’utilisation de diverses espèces de champignons pour améliorer la santé et prévenir et traiter les maladies remonte àl’Antiquité 1,2,3. Les macrochampignons sont généralement classés en deux groupes : épigées (champignons) et hypogées (truffes). Connue sous le nom de truffe du désert, Terfezia claveryi (T. claveryi) est une espèce de truffe de renommée mondiale et comestible appartenant au genre Terfezia5. T. claveryi est couramment réparti dans les régions a....

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Protocol

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REMARQUE : Le flux de travail expérimental global pour la préparation et l’analyse des extraits de T. claveryi est résumé schématiquement à la Figure 1. Tous les matériaux utilisés dans l’étude sont décrits dans le Tableau des Matériaux.

1. Authentification et préparation des matériaux fongiques

  1. Collecte et traitement du matériel
    REMARQUE : Des truffes T. claveryi fraîches ont été récoltées en mai 2023 sur des terres steppiques et sablonneuses non cultivées (non agricoles) de la province de Kırsehir, en Anatolie....

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Results

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Identification moléculaire de T. claveryi
L’amplification par PCR de la région ITS a été réalisée à l’aide des amorces universelles ITS1 et ITS4 pour l’identification moléculaire de T. claveryi. Les séquences résultantes ont été analysées et comparées aux séquences de référence de la base de données NCBI à l’aide de l’algorithme BLAST, permettant une identification définitive des espèces (fichier supplémentaire 1).

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Discussion

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La présente étude établit une plateforme comparative et standardisée d’extraction–bioactivité pour T. claveryi, démontrant que la stratégie d’extraction est un déterminant décisif à la fois de la composition chimique et de la fonctionnalité biologique. La principale force méthodologique de ce protocole réside dans le contrôle strict des paramètres d’extraction, en particulier le ratio solide-liquide fixe, le volume standardisé de solvant, le traitement post-extraction identique .......

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Disclosures

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Les auteurs ne déclarent aucun intérêt concurrent. Toutes les données soutenant les résultats de cette étude sont disponibles dans le manuscrit principal et dans les fichiers d’informations complémentaires. Les ensembles de données générés et analysés lors de l’étude en cours sont disponibles auprès de l’auteur correspondant sur demande raisonnable.

Acknowledgements

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Les auteurs ont déclaré que cette étude n’a reçu aucun soutien financier.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Plaques micro-titrées en polystyrène à 96 puitsNest Scientific701001Culture cellulaire / plaques d’essai
ABTS (acide 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonique))Sigma-AldrichA3219Essai de récupération radical cationique
Acétone (qualité analytique)Sigma-Aldrich179124Solvant d’extraction
Acétonitrile (grade LC-MS)Sigma-Aldrich34851Phase mobile organique
Acinetobacter baumanniiATCCManassas, VA, États-UnisATCC 17978
Triple Quad LC-MS/MS avec système UPLC 1290 InfinityAgilent Technologies6460Analyse quantitative
Colonne analytique (C18, 4,6 et fois 100 mm, 3,5 et mu ; m)Technologies Agilent (Zorbax)959990-902Colonne à phase inversée
Standards antioxydants (acide ascorbique / Trolox)Sigma-AldrichA7506 / 238813Contrôles positifs
Analyseurs d’ADN Applied Biosystems 3730xlApplied Biosystems  ;Analyseurs d’ADN 3730xlSystème de séquençage de l’ADN
Biosystèmes appliqués et commerce ; BigDye&trade ; Kit de séquençage de cycle Terminator v3.1Applied Biosystems  ;4337455Kit de séquençage Sanger
Bacillus cereusATCCManassas, VA, États-UnisATCC 14579
Analyse bioinformatique, logiciel BioEdit, algorithme utilisé : assemblage CAP contigIbis BiosciencesNALogiciel d’assemblage de séquences
Dé à coudre d’extraction de celluloseFisherbrand et commerce ;   ;11724043Utilisé pour l’extraction des Soxhlet
Diméthylsulfoxyde (DMSO)Merck102952Solvant
Kit d’isolement ADN (Plant & Plant & Kit d’isolement de l’ADN des champignons (Pologne) )EurX GeneMATRIXE3595Isolation ADN  ;
DPPH (2,2-diphényl-1-picrylhydrazyle)Sigma-AldrichD9132Essai radical de récupération
Eagle Medium modifié de DulbeccoCapricorne,   ;DMEM-HA
Enterobacter aerogenesATCCManassas, VA, États-UnisATCC 13048
Enterococcus faecalisATCCManassas, VA, États-UnisATCC 29212
Escherichia coliATCCManassas, VA, États-UnisATCC 25922
ÉthanolMerck100983Solvant
Acétate d’éthyleMerck109623Solvant d’extraction
Sérum fœtal bovin (FBS)Capricorn ScientificFBS-16A
Kit de séquençage de cycles BigDyeTerminator v3.1ThermoFisher4337455Kit de séquençage
Réactif de Folin-CiocalteuSigma-Aldrich & nbsp ;47641Teneur phénolique totale
Acide formiqueSigma-Aldrich & nbsp ;33015Additif de phase mobile
Acide gauloisCarlo Erba406335Courbe d’étalonnage
Plante MATRIX Génétique & Kit d’isolement de l’ADN fongiqueEurX  ;E3595Kit d’isolation ADN
GraphPad Prism (v9)Visualisation des données et analyse statistiqueN/AAnalyse statistique
Chauffant le manteauÉlectrothermal  ;EME30500Utilisé pour maintenir le reflux des solvants
HighPrep et commerce ; Système de nettoyage PCRMAGBIOAC-60005
GlaceQualité laboratoire&mdash ;Contrôle de la température aux Émirats arabes unis
Klebsiella pneumoniaeATCCManassas, VA, États-UnisATCC 13883
L-glutamineCapricorn ScientificAllemagne
Listeria monocytogenesATCCManassas, VA, États-UnisATCC 19115
LyophiliseurScientzN/ALyophilisation des extraits
Bille magnétique & trait de trait ; système de nettoyage PCR baséMAGBIOAC-60005PCR
MéthanolMerck106009Solvant d’extraction
n-HexaneMerck103701Solvant d’extraction
Pénicilline/StreptomycineCapricorn ScientificAllemagne
Pseudomonas aeruginosaATCCManassas, VA, États-UnisATCC 27853
Papier filtre (n° 541)Cytiva1541-125 VDans le processus de filtration par extraction
Évaporateur rotatifBuchi R10011100V101Élimination des solvants
Shigella dysenteriaeATCCManassas, VA, États-UnisATCC 13313
Carbonate de sodiumMerck106392Analyse phénolique totale
SPECTROstar Nano Microplate Reader  ;BMG LabtechMesures d’absorbance
Staphylococcus aureusATCCManassas, VA, États-UnisATCC 25923
Staphylococcus epidermidisATCCManassas, VA, États-UnisATCC 12228
Logiciel d’analyse statistique (SPSS, v23)Analyse des donnéesNA
Thermo Scientific Nanodrop 2000  ;Thermo Fisher ScientificND-2000
Agar de soja à tryptone (TSA)MerckAllemagne&mdash ;
Bouillon de soja à la tryptone (TSB)MerckAllemagne&mdash ;
Homogénéiseur ultrasoniqueScientzSCIENTZ-650LExtraction assistée par ultrasons

References

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  1. Wasser, S. P., Weis, A. L. Medicinal properties of substances occurring in higher basidiomycetes mushrooms: current perspectives (Review). Int. J. Med. Mushrooms. 1 (1), 31-62 (1999).
  2. Wasser, S. P.

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Terfezia ClaveryiExtraction MethodsIn Vitro BioactivityAntioxidant ActivityAntimicrobial ActivityCytotoxic ActivityUltrasound Assisted ExtractionMaceration Assisted ExtractionPhenolic CompoundsLC MS MS Analysis

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