Test de la barrières physiologiques à la transmission virale chez les pucerons avec microinjection

Résumé

Les pucerons sont des transmetteurs efficaces des virus des plantes. Microinjection pucerons du virus, la procédure que nous allons vous montrer aujourd'hui, est une technique qui permet aux chercheurs d'injecter le virus directement dans le hemocoel du puceron, en contournant l'intestin, l'un des deux principaux obstacles à la transmission du virus d'une manière circulante. La même technique est également utilisée pour injecter ARNdb pour l'ARNi.

Résumé

Potato loafroll virus (PLRV), de la famille Luteoviridae infecte solanacées. Il est transmis par les pucerons, principalement, le puceron vert du pêcher. Lorsque les pucerons infectés nourrit une plante infectée il se contracte le virus par le phloème des plantes. Une fois ingéré, le virus doit passer de l'intestin de l'insecte à l'hémolymphe (le sang des insectes) et doit ensuite passer par les glandes salivaires, afin d'être transmis vers un nouvelle usine. Un puceron peut prendre jusqu'à virus différent quand grignotant sur une plante, mais seulement une petite fraction va passer à travers la glande intestinale et salivaires, les deux principaux obstacles à la transmission d'infecter davantage de plantes. Dans le laboratoire, nous utilisons des plantes physalis pour étudier la transmission du PLRV. Dans cet hôte, les symptômes sont caractérisés par une chlorose retard de croissance et les nervures (jaunissement des feuilles entre les nervures des veines restantes vert). La vidéo que nous présentons montre une méthode pour effectuer des micro-injection de pucerons sur les insectes qui ne sont pas des virus PLVR vecteur et teste si l'intestin est de prévenir la transmission virale. La vidéo que nous présentons montre une méthode pour effectuer des micro-injection de pucerons sur les insectes qui ne sont pas des virus PLVR vecteur et teste si l'intestin ou les glandes salivaires est de prévenir la transmission virale.

Protocole

1. Pour tester si un puceron est capable de vecteur un virus, nous nourrissons les pucerons sur les tissus infectés pendant 2 jours.
2. Ensuite, nous lui permettons de se nourrir dans une plante saine pendant 5 jours. La plante est ensuite désinfectée et après 3 semaines, nous avons commencer à chercher des symptômes.
3. Lorsque nous trouvons un puceron vecteur qui ne peut pas d'un virus, nous pouvons évaluer lequel des deux barrières est d'arrêter le virus en utilisant une procédure de microinjection.
4. Le virus est injecté directement dans le hemocoel, contournant ainsi la barrière de transmission intestin.

S'il vous plaît visitez examens annuels de biologie végétale pour plus d'informations sur ce protocole et l'immunité des plantes aux insectes herbivores.