Article de méthode

Stratégies d’imagerie pour l’intervention par acupuncture chez les souris modèles de la maladie d’Alzheimer

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DOI :

10.3791/70998

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21 avril 2026

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1Department of Traditional Chinese Medicine, General Hospital of the Chinese People's Liberation Army, 2Meizhou Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine (Meizhou Hospital of Traditional Chinese Medicine), 3School of Traditional Chinese Medicine, Capital Medical University, 4Department of Psychosomatic Medicine, Beijing Hospital of Traditional Chinese Medicine Affiliated to Capital Medical University

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit une stratégie d’imagerie micro-PET in vivo combinée à des tests comportementaux et moléculaires pour évaluer dynamiquement les effets de l’électroacupuncture sur le dépôt de β-amyloïde et la fonction cognitive dans un modèle murin atteint de la maladie d’Alzheimer.

Résumé

La maladie d’Alzheimer (MA) est un trouble neurodégénératif principalement caractérisé par un dysfonctionnement cognitif progressif. L’une de ses caractéristiques pathologiques typiques est la formation de plaques séniles dans le cerveau dues au dépôt de protéines β-amyloïdes (Aβ). L’acupuncture a démontré un potentiel en pratique clinique pour améliorer la fonction cognitive chez les patients atteints de MA. Cependant, ses effets dynamiques sur la pathologie de l’Aβ nécessitent une élucidation objective par des approches technologiques modernes. La tomographie par émission de micro-positrons (micro-PET) fournit un outil puissant pour l’observation in vivo et non invasive du dépôt d’Aβ dans le cerveau de souris modèles d’Alzheimer. Dans ce protocole, nous détaillons une stratégie d’imagerie utilisant le micro-PET [18F]AV-45 pour évaluer les effets de l’intervention électroacupuncture, complétée par les tests comportementaux Morris Water Maze et l’analyse moléculaire Western Blot. Cette approche intégrée permet la visualisation et la quantification de la progression pathologique de l’Aβ dans le cerveau de souris modèles d’Alzheimer. Cela fournit des preuves objectives et quantitatives pour explorer l’effet régulateur de l’acupuncture sur le dépôt d’Aβ. En intégrant les principes de la médecine traditionnelle chinoise avec les technologies modernes d’imagerie moléculaire et de biologie moléculaire.

Introduction

La surveillance in vivo du dépôt de β-amyloïde(Aβ) dans le cerveau est cruciale pour évaluer la progression pathologique de l’AD1. Suite à l’application clinique de thérapies ciblées par anticorps Aβ (par exemple, Lecanemab), l’évaluation longitudinale et quantitative de la charge cérébrale Aβ à l’aide de TEP est devenue une référence pour déterminer l’efficacitéthérapeutique 2. Bien que l’acupuncture ait démontré un potentiel dans des études précliniques pour moduler le métabolisme de l’Aβ, les approches de recherche traditionnelles se sont largement appuyées sur des analyses ex vivo, manquant d’outils efficaces pour l’évaluation directe et objective de son impact dynamique sur le dépôt d’Aβ chez les organismes vivants. Ces dernières années, les avancées dans les technologies d’imagerie moléculaire ont créé des opportunités pour combler cette lacune. la micro-PET a permis l’observation longitudinale non invasive du dépôt d’Aβ chez des souris modèleAD 1. Plus important encore, de nouvelles stratégies d’imagerie évoluent des approches à cible unique vers des paradigmes multimodaux. Par exemple, des études ont confirmé que différents sous-types structurels de fibrilles Aβ présentent des affinités de liaison variables aux traceurs PET couramment utilisés, soulevant de nouvelles exigences pour une quantificationprécise 3. Parallèlement, des techniques émergentes telles que l’imagerie neuro-immune (par exemple, TSPO PET) et les évaluations de la fonction de la barrière hémato-encéphalique offrent des perspectives sans précédent pour élucider de manière exhaustive les mécanismes pathologiques complexes de la MA et les effets multi-cibles des interventionsthérapeutiques 4.

Sur cette base, cette étude vise à développer une stratégie avancée d’imagerie micro-PET utilisant les dernières sondes spécifiques à Aβ pour évaluer dynamiquement et quantitativement l’impact de l’intervention par acupuncture sur le dépôt d’Aβ dans le cerveau de souris modèles de la maladie d’Alzheimer in vivo. L’étude validera non seulement l’efficacité thérapeutique de l’acupuncture, mais s’efforcera également de fournir des preuves directes de ses mécanismes sous-jacents au niveau de l’imagerie moléculaire.

Protocole

Mener toutes les expériences conformément aux Directives pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire émises par les National Institutes of Health. Le protocole d’étude a été approuvé par le Comité d’éthique animale expérimentale de l’Université de médecine chinoise de Pékin (n° : bucm-4-2021102707-5421).

1. Préparation des animaux expérimentaux

  1. Obtenez des souris mâles APP/PS1 de 6 mois ainsi que des souris C57BL/6 correspondant à l’âge et au genre, pesant 28,0 ± 2,0 g.
  2. Hébergez les souris dans des cages standard à une température ambiante de 24 ± 2 °C avec une humidité de 40 % à 60 %.
    REMARQUE : Les animaux étaient hébergés dans des cages standard au Centre des animaux de laboratoire de l’Université de médecine chinoise de Pékin, Université médicale de la capitale.
  3. Maintenez les animaux sous un cycle standard de 12 heures lumière/obscurité (période sombre : 20h00 à 8h00) avec un accès gratuit à la nourriture et à l’eau. Changez la literie chaque jour pour garantir des conditions de logement propres et sèches.
  4. Acclimatez les animaux à l’environnement de laboratoire pendant 7 jours. Commencez les expériences le huitième jour suivant l’acclimatation.

2. Regroupement animal et interventions

  1. Assignez au hasard vingt souris mâles APP/PS1 âgés de 6 mois à un groupe modèle pour la maladie d’Alzheimer (groupe AD, n = 10) et à un groupe électroacupuncture (groupe EA, n = 10). Assigner dix souris C57BL/6N correspondantes à un groupe témoin normal (groupe N, n = 10).
  2. Identifiez les trois points d’acupuncture sur la tête pour l’intervention : GV20 (Baihui), GV26 (Shuigou) et GV29 (Yintang).
    REMARQUE : La localisation des points d’acupuncture est basée sur l'« Atlas des points d’acupuncture animaux » formulé par la Société de recherche expérimentale sur l’acupuncture de l’Association chinoise d’acupuncture-moxibustion. GV20 est situé au milieu entre les extrémités des deux oreilles ; GV29 se situe au milieu entre les extrémités médiales des sourcils ; et GV26 se situe sous la cloison nasale de la souris, à la jonction des deux tiers inférieurs et du tiers supérieur de la ligne médiane de la fente labiale. Le schéma est illustré à la Figure 1.
  3. Administrez une stimulation par électroacupuncture au groupe EA une fois par jour pendant 20 minutes sur 15 jours consécutifs.
    1. Attachez la souris solidement à l’aide de manchons de retenue en tissu sur mesure identiques. Assurez-vous que le corps est confortablement enveloppé pendant que la tête reste complètement exposée pour une insertion précise de l’aiguille et une respiration normale.
    2. Préparez des aiguilles d’acupuncture stériles jetables (0,25 mm × 13 mm).
    3. Appliquez une méthode de piqûre rapide (insertion rapide et retrait immédiat sans rétention) sur le point d’acupuncture GV26 (Shuigou) à l’aide de l’aiguille stérile.
    4. Connectez les poignées des aiguilles à GV20 et GV29 aux clips de sortie d’un appareil électronique d’électroacupuncture.
    5. Régler les paramètres de stimulation de l’appareil pour délivrer une onde continue et clairsemée, avec une fréquence de 2 Hz, une tension constante de 2 V et une intensité de courant de 0,1 mA.
    6. Observez attentivement la souris et vérifiez que l’intensité de la stimulation provoque un léger tremblement rythmique de la tête de la souris.
  4. Maintenir les souris des groupes N et AD dans des conditions d’habitation identiques sans aucune intervention. Soumettez les groupes N et AD aux mêmes procédures quotidiennes de manipulation et de contention que le groupe EA tout au long de la période de 15 jours afin d’assurer la cohérence dans les conditions expérimentales.

3. Le test du labyrinthe aquatique de Morris (MWM)

REMARQUE : Le cadre comportemental (Morris Water Maze) s’appuie sur nos travauxantérieurs 5.

  1. Préparation de l’appareil
    1. Placez un réservoir d’eau circulaire (90 cm de diamètre, 50 cm de profondeur) dans la salle d’essai. Remplissez le réservoir d’eau (22 ± 2 °C) jusqu’à une profondeur de 30 cm.
    2. Ajoutez 0,5 kg de lait écrémé en poudre à l’eau pour la rendre opaque. Divisez virtuellement le réservoir en quatre quadrants égaux (I, II, III et IV).
    3. Positionner une plateforme de secours (circulaire, 5 cm de diamètre, 28 cm de hauteur) au centre du quadrant I.
    4. Placez des indices visuels distincts de différentes formes sur le mur intérieur de chaque quadrant pour aider la souris à apprendre et mémoriser l’emplacement de la plateforme.
    5. Montez un appareil photo numérique à 2 m au-dessus du centre du réservoir au plafond et connectez-le à un système d’acquisitiond’image 6.
  2. Habituation
    1. Retirez la plateforme du réservoir la veille du test de la plateforme cachée. Laissez la souris nager librement dans l’aquarium pendant 90 secondes le matin et l’après-midi pour s’acclimater à l’environnement expérimental.
  3. Test de plateforme cachée
    1. Effectuez le test de plateforme cachée pendant cinq jours consécutifs.
    2. Sélectionnez les points de départ des deuxième, troisième et quatrième quadrants, respectivement, afin de vous assurer que chaque point de départ est équidistant du centre du char.
    3. Placez la souris dans l’eau, face à la paroi de l’aquarium. Laissez la souris observer son environnement pendant 10 secondes après avoir été placée dans l’eau.
    4. Enregistrez la latence d’évasion et la trajectoire de nage si la souris localise la plateforme cachée et reste dessus pendant 5 secondes dans une limite de 60 secondes. Guidez la souris manuellement sur la plateforme si elle ne la trouve pas dans les 60 secondes.
    5. Laissez l’animal rester sur la plateforme pendant 10 secondes pour observer et mémoriser l’emplacement, et notez la latence d’évasion à 60 secondes.
  4. Test de sonde spatiale
    1. Retirez la plateforme cachée du char après cinq jours consécutifs d’entraînement sur la plateforme cachée.
    2. Placez chaque souris dans l’eau depuis l’un des points de départ situés dans le deuxième, troisième ou quatrième quadrant. Laissez la souris nager librement pendant 60 secondes. Notez le parcours de nage et le temps passé dans le quadrant cible (quadrant I).
    3. Ramenez toutes les souris dans leur cage d’origine immédiatement entre les essais pour minimiser le contact direct avec l’expérimentateur.

4. Analyse du western blot

  1. Euthanasiez six souris par groupe 24 heures après la fin de l’intervention de 15 jours. Disséquez rapidement et isolez les tissus hippocampiques frais sur la glace.
  2. Peser les tissus de l’hippocampe et les placer dans des tubes de microcentrifuge pré-refroidis. Ajouter un tampon de lyse RIPA froid complété avec un cocktail inhibiteur de protéase à 1 % et un cocktail inhibiteur de phosphatase à 1 % au rapport de 10 μL tampon par 1 mg de tissu.
  3. Homogénéisez les tissus en profondeur à l’aide d’un homogénéiseur tissulaire mécanique sur glace. Centrifugez les homogénaires à 12 000 x g pendant 15 minutes à 4 °C pour éliminer les débris cellulaires. Recueillez soigneusement le surnageant et transférez-le dans un nouveau tube de microcentrifugeuse pré-refroidi.
  4. Mélangez les échantillons de protéines avec un tampon de charge SDS 5× et faites bouillir le mélange à 95 °C pendant 10 minutes pour dénaturer complètement les protéines. Chargez des quantités égales de protéines (20 μg) par puits sur un gel SDS-PAGE à 15 %. Inclure un marqueur de poids moléculaire de protéine pré-coloré dans un puits adjacent.
  5. Faites fonctionner le gel d’empilement à une tension constante de 80 V pendant 30 minutes, puis résoudre les protéines dans le gel séparateur à 120 V jusqu’à ce que le front de colorant bleu de bromophénol atteigne le fond du gel.
  6. Transférez les protéines séparées sur une membrane de fluorure de polyvinylidène (PVDF) de 0,22 μm à un courant constant de 250 mA pendant 90 minutes sur la glace. Bloquez la membrane PVDF avec 5 % de lait écrémé écrémé dissous dans une solution saline tamponnée à tris contenant 0,1 % Tween 20 (TBST) pendant 1 heure à température ambiante avec une agitation douce sur un shaker.
  7. Incubez la membrane avec un anticorps primaire contre Aβ (dilué [1:1000] dans un tampon bloquant) et un anticorps primaire contre GAPDH (dilué [1:5000] dans un tampon bloquant) pendant la nuit à 4 °C sur un shaker horizontal. Incubez la membrane avec un anticorps secondaire conjugué à la peroxydase du raifort (HRP) (dilué [1:2000] dans un tampon bloquant) pendant 1 h à température ambiante.
  8. Lavez la membrane trois fois avec du TBST pendant 10 minutes chacune pour éliminer les anticorps secondaires non liés.
  9. Appliquez un substrat à chimiluminescence améliorée (ECL) sur la membrane et capturez le signal à l’aide d’un système d’imagerie chimiluminescence.
  10. Quantifiez les intensités des bandes protéiques à l’aide du logiciel ImageJ (version 1.53a). Normaliser les valeurs en niveaux de gris des bandes cibles à celles du GAPDH, et calculer les niveaux relatifs d’expression des protéines d’intérêt.

5. [18F]Radiosynthèse AV-45

  1. Effectuer un radiomarquage par substitution nucléophile de 3,0 mg du composé précurseur par [18F]KF.
  2. Purifiez le produit à l’aide de chromatographie liquide haute performance (HPLC) pour obtenir une pureté radiochimique (RCP) supérieure à 95 %.
  3. Dissoudre le composé marqué dans de l’éthanol.
  4. Diluez la solution avec 0,9 % de chlorure de sodium, puis préparez le produit final dans un éthanol à 10 % pour une utilisationultérieure 7.

6. Imagerie PET in vivo

  1. Sélectionnez quatre souris au hasard dans chaque groupe expérimental.
    1. Placez la souris sur un coussin chauffant à eau circulante (37 °C) ou sous une lampe chauffante pendant 5 à 10 minutes avant la procédure pour favoriser la vasodilatation des nervures caudales.
    2. Sécuriser la souris dans un dispositif de protection à rongeurs cylindrique transparent adapté, en laissant la queue complètement exposée. Désinfectez la queue et visualisez mieux les veines latérales en essuyant la peau avec un écouvillon à 70 % d’éthanol.
  2. Extraire le radiotraceur AV-45 formulé[18F]dans une seringue à insuline de 0,5 mL équipée d’une aiguille. Préparez un volume d’injection d’environ 100 à 150 μL pour atteindre une dose radioactive cible de 3,0 MBq (pureté radiochimique > 95 %)2.
  3. Mesurez et enregistrez la radioactivité initiale de la seringue remplie de traceurs à l’aide d’un calibrateur de dose.
  4. Insérez l’aiguille, biseauté vers le haut, à un faible angle (environ 10°–20°) dans la veine latérale de la queue. Attendez 60 minutes après l’administration, puis anesthésiez la souris par inhalation d’isoflurane à 2 %.
  5. Positionnez la souris et obtenez un PET scan statique tridimensionnel de 15 minutes.
  6. Reconstruisez les données PET à l’aide d’un algorithme d’optimisation d’espérance tridimensionnelle à sous-ensembles ordonnés (OSEM).
  7. Traiter les données reconstituées avec le logiciel PMOD (version 4.5).
    1. Co-enregistrer les données sur un modèle cérébral adapté aux souris de petite à moyenne taille au sein du module de fusion PMOD. Permettre au logiciel de délimiter automatiquement les régions d’intérêt (ROI) dans le cerveau de la souris.
  8. Calculez les valeurs standardisées d’absorption (SUV). Obtenez le ratio standardisé de la valeur d’absorption (SUVR) en comparant le SUV de chaque ROI à celui duCerevel 8.
    REMARQUE : La variabilité acceptable de la dose administrée (2,0–3,8 MBq) prend en compte les fluctuations quotidiennes du rendement des radiotraceurs et le poids corporel individuel de la souris. Parce que les quantifications ultérieures reposent sur le rapport de valeurs d’absorption standardisé (SUVR) — qui normalise la région cible par rapport à une région de référence (le cervelet) — les variations absolues de dose dans cette plage ne compromettent pas les résultats comparatifs de l’imagerie. La tomographie par émission de micropositons (Micro-PET) est illustrée à la Figure 2.

7. Analyse statistique

  1. Effectuer toutes les analyses statistiques à l’aide du logiciel SPSS (version 19.0).
  2. Présentez les données en moyenne ± écart-type (DS).
  3. Appliquez une ANOVA unidirectionnelle pour analyser les résultats des tests de la plateforme cachée.
  4. Analysez les données du test de sonde spatiale et de l’imagerie PET à l’aide d’ANOVA à mesures répétées ou d’ANOVA unidirectionnelle, suivies de tests post-hoc LSD pour des comparaisons par paires.

Résultats

Effet de l’électroacupuncture sur la fonction cognitive chez les souris APP/PS1

Pour évaluer la capacité d’apprentissage spatial, les souris ont suivi des essais d’entraînement du jour 1 au jour 5. Dans le test de la plateforme cachée (Figure 3A,B), la latence d’évasion des souris dans tous les groupes a montré une tendance à la baisse au cours de la période d’entraînement. Comparé au groupe N, le groupe DA présentait une latence d’évasion significativement prolongée (p < 0,05), indiquant des déficits d’apprentissage et de mémoire prononcés chez les souris APP/PS1 âgées de 6 mois. La latence d’échappement dans le groupe AD était significativement plus longue que dans les groupes N et EA (p < 0,01). Notamment, au jour 5, la latence d’évasion dans le groupe EA était nettement plus courte que dans le groupe AD (p < 0,05) (Figure 3C). Après la période d’entraînement de 5 jours, la mémoire spatiale a été évaluée à l’aide du test de sonde spatiale. Le ratio du temps passé à nager dans le quadrant cible (plateforme) et le temps total de nage était calculé ; un ratio plus élevé indique une meilleure rétention de mémoire. Les résultats ont montré que le rapport temps de nage dans le groupe AD était significativement inférieur à celui du groupe N (p < 0,01). En revanche, le groupe EA présentait un ratio significativement plus élevé que le groupe AD (p < 0,01). Cependant, le ratio dans le groupe EA est resté inférieur à celui du groupe N (p < 0,05) (Figure 3D).

Le nombre de passages à niveau des quais, qui reflète la précision de la mémoire spatiale, a également été analysé. Un plus grand nombre de croisements suggère une meilleure rétention de la mémoire. Le groupe AD a montré nettement moins de passages de quais que le groupe N (p < 0,05), tandis que le groupe EA a montré une augmentation significative par rapport au groupe AD (p < 0,05). Néanmoins, le groupe EA avait tout de même moins de croisements que le groupe N (p < 0,05) (Figure 3E).

Effets de l’électroacupuncture sur le dépôt d’Aβ dans l’hippocampe de l’APP/PS1 mice

Le dépôt d’Aβ a été évalué à l’aide d’imagerie PET, et le rapport de valeur d’absorption standardisé (SUVR) du traceur Aβ radiomarqué a été calculé dans l’hippocampe des souris APP/PS1 (Figure 4A). Les micro-PET scans ont révélé que le groupe N et le groupe EA présentaient des valeurs de SUVR significativement plus faibles que le groupe AD (Figure 4B). Une analyse quantitative supplémentaire a confirmé que le SUVR hippocampique et l’Aβ du groupe EA étaient significativement plus élevés que ceux du groupe N (p < 0,05), tandis qu’ils restaient significativement inférieurs à ceux du groupe AD après l’intervention électroacupuncture (p < 0,05) (Figure 4C).

Effets de l’électroacupuncture sur l’expression de la protéine Aβ

Après les évaluations comportementales et d’imagerie, l’expression de la protéine Aβ dans l’hippocampe a été évaluée via l’analyse Western blot (Figure 5A). L’analyse quantitative a révélé que l’expression relative d’Aβ dans le groupe AD était significativement élevée par rapport au groupe N (p < 0,05). Le groupe EA a montré une réduction significative de l’expression de l’Aβ hippocampique par rapport au groupe AD (p < 0,05). Cependant, les niveaux d’expression dans le groupe EA sont restés plus élevés que ceux du groupe N, indiquant que, bien que l’intervention ait effectivement atténué l’accumulation d’Aβ, elle n’a pas complètement éliminé les plaques existantes (Figure 5B).

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Figure 1 : Schéma montrant l’emplacement des points d’acupuncture GV20 (Baihui), GV26 (Shuigou) et GV29 (Yintang) chez la souris. Cette figure a été réutilisée avec l’autorisation de Sun et al.5. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figurine.

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Figure 2 : Tomographie par émission de micropositons (Micro-PET). L’IRIS PET/CT (Inviscan) est un système d’imagerie préclinique pour souris et rats, présentant une sensibilité élevée (>9 %) et une résolution spatiale de 1 mm avec un champ axial de 96 mm. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figurine.

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Figure 3 : Effet de l’électroacupuncture sur la fonction cognitive. (A) Appareil MWM. (B) Les souris ont été testées à l’aide de l’appareil du labyrinthe aquatique Morris (MWM). (C) Tendances de la latence d’évasion lors du test de plateforme cachée. Comparé au groupe N, ◆◆p < 0,05 ; comparé au groupe de la maladie d’Alzheimer (AD), ▲▲p < 0,05. (D) Proportion du temps de nage dans le premier quadrant. Comparé au groupe N, ◆◆p < 0,05 ; comparé au groupe AD, ▲▲p < 0,05. (E) Nombre de traversées de quai dans le quadrant du quai. Comparé au groupe N, ◆◆p < 0,05 ; comparé au groupe AD, ▲▲p < 0,05. Cette figure a été réutilisée avec l’autorisation de Sun et al.5. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figurine.

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Figure 4 : Effets de l’électroacupuncture sur le dépôt d’Aβ. (A) La région d’intérêt de l’hippocampe de souris est affichée en vert. (B) Images de tomographie par émission de micro-positons de Aβ chez des souris de chaque groupe. (C) Comparaison des rapports de valeurs d’absorption standardisés de [18F]AV-45 (SUVR ; région cible/cervelet) dans l’hippocampe de chaque groupe, quantifiés par micro-TEP. Comparé au groupe N, ◆◆p < 0,05 ; comparé au groupe de la maladie d’Alzheimer (MA), ▲▲p < 0,05. Cette figure a été réutilisée avec l’autorisation de Sun et al.5. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figurine.

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Figure 5 : Effets de l’électroacupuncture sur l’expression des protéines Aβ. (A) Bandes de blot occidentales représentatives montrant les niveaux d’expression de Aβ (4 kDa) et GAPDH (146 kDa) comme contrôle de charge. Les bandes illustrent une faible expression d’Aβ dans le groupe N, une expression élevée dans le groupe AD, et une expression réduite dans le groupe EA par rapport au modèle AD. (B) Analyse quantitative de l’expression relative de Aβ par rapport au GAPDH entre les groupes expérimentaux. Comparé au groupe N, ◆◆p < 0,05 ; comparé au groupe de la maladie d’Alzheimer (AD), ▲▲p < 0,05. Cette figure a été réutilisée avec l’autorisation de Sun et al.5. Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figurine.

Discussion

Visualiser et quantifier A dépôt dans l’hippocampe offre une fenêtre clé sur la progression pathologique del’AD 9. Bien que plusieurs modalités de neuroimagerie existent, atteindre une traduction à haute résolution, quantitative et inter-espèces reste un obstacle majeur. Par exemple, l’imagerie à fluorescence proche infrarouge est fréquemment limitée par la résolution spatiale, et l’IRM — bien que capable de cartographier les altérations structurelles — exige souvent des doses d’agents à contraste excessivement élevées pour délimiter les plaques amyloïdes in vivo. En revanche, la TEP représente un outil translationnel optimal, permettant l’évaluation dynamique de la neuroinflammation, du métabolisme du glucose et de l’accumulation d’A dans les modèles animaux et les populationscliniques 10,11. L’imagerie moléculaire via TEP facilite non seulement un diagnostic précoce et une stadification pathologique précise. mais il est également indispensable pour surveiller l’engagement cible et l’efficacité des nouveaux traitements contre la maladied’Alzheimer 12. L’avènement de la technologie micro-PET dans le domaine préclinique a considérablement élargi l’utilité de la PET au-delà des contextes cliniques et de la recherche sur les primates non humains. Caractérisée par une résolution spatiale supérieure et une grande sensibilité adaptée aux champs de vision de petits champs de vision, la micro-PET permet aux chercheurs de suivre longitudinalement la progression neurodégénérative dans des modèles derongeurs 13,14. De manière cruciale, des indicateurs quantitatifs établis tels que le SUVR calculé par rapport aux régions de référence dépourvues de pathologie robuste A, comme le cervelet, peuvent être transposés sans effort du laboratoire auchevet 15. Historiquement, l’imagerie TEP utilisant des traceurs spécifiques a montré une sensibilité diagnostique élevée (jusqu’à 90 %) et une spécificité élevée (89 %) pour la maladiede 16 et 17 de la maladie d’arxie. Alors que le traceur PIB [11C]PIB a révolutionné la visualisation précoce de l’amyloïde, sa courte demi-vie a limité son déploiementgénéralisé 18. Le développement ultérieur et l’approbation de la FDA en 2012 de [18F]AV-45 (Florbetapir) ont atténué ceslimitations, offrant une demi-vie plus longue ainsi qu’une excellente affinité de liaison et une sélectivité pour Aβ. Par conséquent, [18F]AV-45 est devenu un incontournable tant pour les diagnostics cliniques que pour les évaluationsprécliniques 20.

Plusieurs étapes critiques et modifications potentielles doivent être prises en compte lors de l’utilisation de ce protocole. Premièrement, un contrôle rigoureux des paramètres de radiosynthèse est essentiel ; toute déviation de la quantité de précurseur ou de la température de réaction peut gravement compromettre la pureté et le rendement radiochimiques de [18F]AV-45. Deuxièmement, un alignement stéréotaxique précis lors de l’imagerie TEP est essentiel pour éviter les effets de volume partiel, qui peuvent fausser artificiellement les calculs des SUVR dans les petites régions hippocampiques de souris. Pour résoudre les faibles rapports signal/bruit dans les images PET, les chercheurs doivent vérifier l’activité spécifique du traceur injecté et s’assurer que la profondeur de l’anesthésie à l’isoflurane reste stable, car le mouvement respiratoire peut flouter les images.

Cette méthodologie présente certaines limites. Bien que le micro-PET AV-45 fournisse une vue macroscopique de la charge régionale Aβ, sa résolution spatiale ne permet pas de visualiser des plaques amyloïdes microscopiques uniques. De plus, l’intervention électroacupuncture de 15 jours mise en œuvre dans cette étude a démontré une atténuation significative de la charge d’Aβ par rapport aux souris de la DA non traitées ; cependant, étant donné que le dégagement complet des plaques Aβ établies nécessite généralement des mois d’intervention soutenue, le paradigme actuel reflète principalement une modulation précoce de la dynamique soluble d’Aβ ou un arrêt du dépôt progressif plutôt qu’un dégagement complet de la plaque structurelle. De plus, obtenir des TEP avant et après l’intervention sur le même sujet offrirait un contrôle longitudinal plus fort, une stratégie qui devrait être adoptée dans de futurs projets expérimentaux.

En résumé, les résultats de cette étude suggèrent que l’intervention par électroacupuncture (EA) atténue significativement l’accumulation d’Aβ et préserve la fonction cognitive spatiale chez les souris APP/PS1. La base mécanistique de cette amélioration pourrait concerner les effets neuromodulateurs de la stimulation des acupoints21 du vaisseau gouverneur (Du Mai), qui ont été anatomiquement liés aux réseaux fasciaux et neurovasculaires favorisant le flux sanguin céphalique et les voies de dégagement. En fournissant des preuves d’imagerie moléculaire solides et quantifiables, ce protocole souligne l’importance d’intégrer les modalités thérapeutiques traditionnelles à la neuroimagerie avancée. Ce cadre méthodologique ouvre la voie à des recherches plus approfondies sur les voies thérapeutiques de l’acupuncture dans la lutte contre la MA.

Déclarations de divulgation

Tous les auteurs n’ont déclaré aucun conflit d’intérêts potentiel.

Remerciements

Cette recherche a été soutenue par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (n° 82004482, 82274654, 82274644), la Fondation des sciences naturelles de Pékin (n° 7252219), ainsi que par le Fonds de cultivation de l’innovation du Sixième Centre médical de l’Hôpital général de l’APL (n° CXPY202405). Nous remercions Biorender (biorender.com) pour avoir fourni les outils graphiques utilisés dans cette étude.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
[18F]AV-45Laboratoire radiopharmaceutique de l’Université normale de Pékin&mdash ; &mdash ;Le traceur le plus utilisé dans l’industrie
0,22 & mu ; Membrane m PVDFBeyotimeFFP71Transfert de film efficace
Gel SDS-PAGE à 15 %BeyotimeP0066Entrave la migration des protéines de petites molécules
5 et fois ; Tampon de chargement SDSBeyotimeP0015Assurez-vous de rayures nettes et une séparation précise.
Souris mâle APP/PS1 de 6 moisCavenberg (Suzhou) Laboratoire de Recherche Animale Co., Ltd.SCXK (Su) 2018-0002Largement utilisé pour la recherche sur la maladie d’Alzheimer.
  ;
Mâle C57BL/6 sourisCavenberg (Suzhou) Laboratoire de Recherche Animale Co., Ltd.SCXK (Su) 2018-0002Pour le groupe contrôle normal
A&bêta ; anticorpsProteintech25524-1-APDétection de A & bêta ; Monomère
Aiguilles d’acupuncture stériles jetablesZhongYan TaiHe Medical Instrument Co., LtdZYTH2013030504Outils d’acupuncture courants
Substrat ECLThermo Fisher (Pierce)  ; 32106 (500 mL)Détection des protéines cibles
Appareil d’électroacupuncture (EA)Beijing Huawei Industrial Development Co., Ltd.HANSLH202Équipements d’électroacupuncture couramment utilisés en Chine
GAPDHProteintech23567-1-CBProtéine de référence classique (1:5000)
Anticorps secondaire conjugué HRPThermo Fisher Scientific (Invitrogen)31430 (2 mL) / C31430100 (100 et mu ; L)Détection des protéines cibles (1:2000)
Logiciel ImageJNIH  ; Version 1.53aAnalyse des valeurs en niveaux de gris de bandes
IsofluraneCentaure30135687 (250 ml)Anesthésie rapide et sûre des souris
PTOMOGRAPHIE (PET-CT)Système d’imagerie IRIS PET/CTIRISSensibilité élevée au PET et excellentes performances quantitatives
Cocktail inhibiteur de phosphataseBeyotimeP0055BMaintenir l’état de phosphorylation des protéines
Logiciel PMODPMOD Technologies  ; Version 4.5 & nbsp ;Utilisé pour  ; traitement et analyse des données d’images PET
Marqueur de poids moléculaire de protéine pré-coloréThermo Fisher (Pierce)26619 (2 fois ; 250 & micro ; L)  ;Surveillance de l’électrophorèse et du transfert de membranes   ;
Cocktail inhibiteur de protéaseBeyotimeP1046Inhibition à large spectre de l’activité endogène des protéases
Tampon de lyse RIPABeyotimeP0013CMaintien de la modification par phosphorylation des protéines
Lait écrémé en poudre utilisé dans l’appareil du Labyrinthe d’Eau de MorrisYili6907992637815Rendre l’eau opaque et cacher les plateformes sous-marines
Le système de labyrinthe aquatique de MorrisChengdu Taimeng Software Co., Ltd.WMT-100SÉquipements pour labyrinthe aquatiques largement utilisés en Chine

Références

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