$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Dans le domaine de l’orthopédie, des lésions telles que les lésions cartilagineuses et les lésions dans la zone avasculaire (zone blanche) du ménisque entraînent souvent une destruction irréversible des articulations et une perte de fonction, conduisant finalement à l’arthrose. Cela s’explique en grande partie par la faible capacité régénérative de ces tissus, qui résulte d’un manque d’apport direct en sang et en lymphatiques, ainsi que de la présence de cellules très différenciées avec une capacité limitée de prolifération etde migration 1,2,3,4. Pour relever ce défi, diverses stratégies cliniques ont été explorées, notamment l’utilisation des exosomes 5,6, la transplantation autologue ou allogénique de chondrocytes 7,8, et les approches d’ingénierietissulaire 9,10,11,12. Ces dernières années, les cellules souches mésenchymates (MSC) se sont révélées comme une source cellulaire prometteuse pour la réparation régénérative, grâce à leur potentiel de différenciation multilignée et leurs propriétés immunomodulatrices, offrant un nouvel espoir pour la régénération du cartilage 13,14,15,16.
Malgré leur potentiel thérapeutique, les CMS présentent une hétérogénéité significative. Même au sein d’une seule source tissulaire, telle que la moelle osseuse ou le cordon ombilical, des sous-populations distinctes de CSM peuvent présenter une variabilité considérable dans la capacité de prolifération, le potentiel de différenciation multilignée (en particulier la différenciation chondrogénique) et la fonction régénérative invivo 17,18,19. Par conséquent, l’identification précise et l’isolement des sous-populations de MSC définies fonctionnellement — telles que celles ayant une capacité chondrogénique accrue — sont essentielles pour faire progresser notre compréhension de leurs propriétés biologiques et améliorer l’efficacité de la réparation du cartilage. Cela représente une étape cruciale dans notre recherche.
Au fur et à mesure de l’avancement de la recherche, un nombre croissant de nouvelles protéines membranaires ont été identifiées comme marqueurs de sous-populations de MSC fonctionnellement distinctes. Cependant, traduire ces découvertes en stratégies efficaces de tri cellulaire reste techniquement un défi. Le tri cellulaire activé par fluorescence conventionnel (FACS), bien que puissant, nécessite des instruments spécialisés et une expertise technique, limitant son accessibilité dans de nombreux laboratoires. En revanche, le tri des cellules immunomagnétiques — bien que plus largement utilisé — est limité par la disponibilité limitée des réactifs commerciaux, principalement conçus pour quelques cibles membranaires bien établies. Par conséquent, pour de nombreux marqueurs nouvellement découverts ayant une signification biologique potentielle, il n’existe pas de billes magnétiques commercialement disponibles, ce qui rend difficile l’enrichissement spécifique de ces précieuses sous-populations MSC.
Pour surmonter cette limitation, la présente étude vise à établir et à standardiser un protocole flexible, rentable et efficace pour la sélection positive des cellules. Cette approche repose sur la conjugaison indirecte d’anticorps conjugués à la phycoérythrine (PE) disponibles dans le commerce avec des billes immunomagnétiques anti-PE. Des rapports antérieurs ont démontré que les MSC positifs à la podoplanine (PDPN+) possèdent une capacité supérieure à la maintenance et à la différenciation de la racine par rapport à leurs homologues PDPN-20. De plus, l’implication des MSC PDPN+ dans la régénération du cartilage et la progression de l’arthrose (OA) a été documentée dans lalittérature 21,22. En utilisant la podoplanine (PDPN) — un marqueur candidat récemment identifié des sous-populations fonctionnelles de MSC — comme cible modèle, nous avons trié les cellules PDPN positives des MSC dérivées de la moelle osseuse. Nous fournissons un protocole détaillé, étape par étape, couvrant la préparation de la suspension unicellulaire, le marquage des anticorps et des billes magnétiques, ainsi que la séparation magnétique. De plus, nous évaluons le rendement, la positivité post-tri du PDPN et la prolifération/activité métabolique basée sur CCK-8 des cellules triées. En standardisant ce protocole, nous visons à fournir aux chercheurs une méthode polyvalente et accessible pour isoler les sous-populations cellulaires cibles en utilisant des anticorps compatibles contre des marqueurs de surface cellulaire accessibles, facilitant ainsi la recherche fondamentale sur les cellules souches et les futures applications translationnelles en médecine régénérative.