Marquage rétrograde de cellules ganglionnaires de la rétine par l'application de fluoro-or sur la surface du colliculus supérieur

Résumé

Cette vidéo décrit la méthode de marquage rétrograde de RGC en appliquant fluoro-or (FG) sur la surface du colliculus supérieur (CS). Technique consiste à percer le crâne, l'aspiration du cortex, et en appliquant une éponge de gélatine sur la surface dorsale entière de SC.

Résumé

Cellules ganglionnaires rétiniennes (CGR) de comptage est essentiel d'évaluer la dégénérescence rétinienne notamment dans le glaucome. Fiable étiquetage CJR est fondamentale pour évaluer les effets de tout traitement. Chez le rat, environ 98% des CGR est connu pour des projets à l'controlatéral colliculus supérieur (CS) (Forrester et Peters, 1967). Application fluoro-or (FG) sur la surface de l'étiquette SC peut presque tout le CGR, de sorte que nous pouvons nous concentrer sur ce neurone rétinien plus vulnérables dans le glaucome. FG est repris par les terminaisons axonales des cellules ganglionnaires de la rétine et au niveau bilatéral transporté par voie rétrograde à son soma dans la rétine. Comparer avec marquage rétrograde de RGC en mettant FG au moignon du nerf optique sectionné pendant 2 jours, l'ingérence de la survie du CJR est minimisé. Comparer avec coloration violet de crésyl que CGR taches, les cellules amacrines et de l'endothélium des vaisseaux sanguins dans la couche des cellules ganglionnaires de la rétine, cette méthode d'étiquetage est plus spécifique à la CJR. Cette vidéo décrit la méthode de marquage rétrograde de RGC en appliquant FG sur la surface du SC. Les procédures chirurgicales comprennent le forage du crâne; aspirer le cortex pour exposer le SC et en appliquant une éponge de gélatine sur la surface dorsale entière de SC sont présentés. Conseils utiles pour éviter une hémorragie intracrânienne et l'aspiration de la SC ont été donnés.

Protocole

1. Anesthésier le rat par injection intra-péritonéale de la kétamine (80mg/kg) et de xylazine (8mg/kg) (rapport de volume à 02h01). Appliquer une pommade stérile lubrifiant oculaire pour éviter le dessèchement de la cornée pendant la chirurgie.
2. Rasez les poils de tête (de l'œil au niveau de l'oreille) et fixer la tête sur la scène la tête par une tête de pince et fixer ses incisives dans la barre d'incisive.
3. Désinfectée la zone d'opération avec une solution de povidone iodée à 10%, suivi par l'alcool à 70%.
4. Coupez la peau et des muscles afin d'exposer le crâne et les sutures (sagittal, sutures coronale et transversale) (figure 1). Appliquer analgésique, bupivicaïne comme une éclaboussure zone d'incision (à ne pas dépasser 2 mg / kg).
5. Percez un trou de crâne (ø 2x2 mm, 0,5 mm à la fois de sutures sagittale et transversale) de chaque côté de la suture sagittale. Eviter la rupture des méninges et des sinus couchent sous les sutures.
   
   
   Figure 1. Poinçons sur le crâne de rat vivant.
   
   
6. Couper les méninges par des ciseaux à ressort, éviter les déchirements.
7. Aspirer le contenu cérébral qui se trouve sur la surface dorsale du colliculus supérieur avec soin par la pompe à vide et trois check-points peuvent être observés:
   1. la couleur de modifications du tissu cérébral du gris au blanc au gris
   2. arrêt de l'aspiration lorsque le fluide céphalo-rachidien incolore sortent
   3. attentivement l'agrandir au plus bas niveau d'aspiration horizontalement afin d'exposer le colliculus supérieurs jaunâtres couverts par la durée
8. Aspirer le contenu du cerveau au cours SC jusqu'à quatre bords de la SC peut être observé directement sous le microscope. La partie du cortex cérébral retirée doit être réduit au minimum afin d'éviter des effets secondaires indésirables (par exemple, dysfonctionnement moteur). Soyez prudent de ne pas toucher les sinus.
9. Absorber le liquide dans le trou avec une bande de coton fin stériles pour rendre la surface de la SC aussi sec que possible. Ensuite, placez une fine couche de gélatine éponge imbibée de pré-Fluoro-Gold 6% sur la surface du SC (FG est repris par les terminaisons axonales des cellules ganglionnaires de la rétine et au niveau bilatéral transporté par voie rétrograde à son soma dans la rétine).
10. Remplissez le trou avec Gelfoam et fermer la plaie cutanée avec des clips de suture.
11. Les animaux ont été autorisés à récupérer sous la lampe à incandescence pour garder au chaud. Analgésique, la buprénorphine (100mcg/kg), est appliqué par voie orale dans l'eau potable pour les 5 jours après l'étiquetage SC.

Discussion

1. Pourquoi utiliser cette méthode chirurgicale pour la numération des cellules ganglionnaires rétiniennes?
   
   Chez le rat environ 98% des cellules ganglionnaires de la rétine (CJR) sont connus pour des projets à l'controlatéral colliculus supérieur (CS). Application fluoro-or sur la surface de l'étiquette SC peut presque tout le CGR, de sorte que nous pouvons nous concentrer sur ce neurone rétinien plus vulnérables dans le glaucome. Comparer avec marquage rétrograde de RGC en mettant FG au moignon du nerf optique sectio...