Chromatographie en phase gazeuse (CG) couplée à un détecteur à ionisation de flamme

1. initialisation de la GC

1. Le gaz vecteur hélium et air et régler les manomètres sur l’instrument.
2. Allumez le four à colonne à une température élevée (typiquement 250 ° C ou plus) à cuire dans la colonne. Ne pas dépasser la température maximale de la colonne. Cela supprimera tous les contaminants. Laissez-le cuire pendant au moins 30 min avant d’exécuter un échantillon.

2. faire un fichier de méthodes

1. Dans le logiciel de contrôle de l’instrument, entrée toutes les valeurs souhaitées pour un fichier de méthodes. Tout d’abord, définir les paramètres de l’échantillonneur automatique. Définir le nombre de rinçages avant exécution, post-exécution rinçages et rince avec l’échantillon. Ces rinçages nettoyer la colonne entre les différents échantillons.
2. La quantité injectée est généralement de 1 µL. Un coefficient de fractionnement est généralement définie car injecter tout d’un échantillon peut surcharger la colonne. Si le coefficient de fractionnement est 100 : 1, cela signifie que pour chaque 1 partie qui est injecté dans l’instrument 100 parties va perdre.
3. Les phase mobile des paramètres d’entrée. Le débit est contrôlé par le jeu de pression. Des débits plus rapides conduisent à des séparations plus rapides, mais il y a moins de temps pour l’analyte et interagir avec la colonne.
4. Entrer dans la programmation de température. Pour une course isotherme, réglez la température de la séparation et puis une fois pour la séparation. Pour une gradient d’élution, entrez la température de départ et indisponibilité, la température de finale et temps et la vitesse de la rampe en ° C/min. Un temps d’équilibrage est également défini qui permet à la colonne de cool dos vers le bas la température originale entre les exécutions.
5. Entrez les paramètres du détecteur. Un taux d’échantillonnage et de la température détecteur sera inscrite. Le détecteur doit toujours être une température plus élevée que la température de la colonne afin qu’aucun analyte se condense sur le détecteur.
6. Enregistrez le fichier de méthodes. Les paramètres peuvent doivent également être téléchargé alors qu’ils sont lus par le GC.

3. collecte de données de GC

1. Allumez le gaz d’hydrogène et veillez à ce que le manomètre est correctement défini. Allumer la flamme de l’analyseur FID.
2. Sur la grille de l’échantillonneur automatique, remplir le flacon de lavage avec le solvant de lavage, comme l’acétonitrile ou méthanol. Assurez-vous que le flacon de déchets est vide.
3. Préparation des échantillons. Si il n’y a aucune chance de particules présentes dans l’échantillon, filtrer l’échantillon. Parce que les résidus de plastique peuvent parfois être vu avec GC, utilisation seul verre seringues et flacons pour préparer votre échantillon de verre.
4. Remplir le flacon au moins la moitié d’échantillon ainsi la seringue de l’échantillonneur automatique est assurée pour ramasser de l’échantillon. Flacons pour échantillonneur automatique sont généralement 2 mL, mais si le volume de l’échantillon est limité, flacon plaquettes sont disponibles pour réduire le volume de l’échantillon nécessaire.
5. Chargez l’exemple vial(s) dans le rack pour échantillonneur automatique. Garder une trace de quelle position chaque échantillon est dans.
6. Avant la course, zéro à la référence de l’enregistreur sur le logiciel de l’ordinateur.
7. Les fichiers peuvent être collectées comme un même essai ou utiliser une table de lots pour essais multiples. Veillez à spécifier le nombre correct de flacon pour l’échantillon. Cliquez sur le bouton « Démarrer » et en faire un fichier.
8. Sont généralement analysé les données avec un logiciel. Les paramètres qui peuvent être mesurées incluent temps de rétention, hauteur de pic, surface de pic et nombre de plateaux théoriques.

4. résultats : GC analyse des échantillons de café

1. Dans cet exemple, analyse de GC-FID a été réalisée pour la caféine et l’acide palmitique, deux composés présents dans le café. La caféine est moins polaire que l’acide palmitique, qui a une queue d’alcane à chaîne longue. Ainsi, la caféine est moins conservée et élue tout d’abord sur la colonne non polaire de 95 % diméthylpolysiloxane et 5 % phényl-ARYLÈNE (Figure 1).
2. Partir du chromatogramme, on peuvent calculer la surface des pics. La surface des pics sont proportionnelles à la masse de carbone qui passe par le détecteur et ils peuvent être utilisés pour faire une courbe d’étalonnage de concentration de vs réponse instrument. Pour la Figure 1, la surface du pic est 27 315 pour la caféine et 18 852 pour l’acide palmitique.
3. Une mesure de l’efficacité de la colonne est N, le nombre de plateaux théoriques. N peut être calculé à partir du chromatogramme pour chaque pic. Pour la Figure 1, N est de 283 000 pour la caféine et 261 000 pour l’acide palmitique.
4. Figure 2 illustre l’effet de la température sur les séparations isothermes. Deux séparations sont recouvertes du même échantillon caféine et l’acide palmitique. Le premier est à 180 ° C et le second à 200 ° C. Les temps de rétention sont beaucoup plus petites pour l’exécuter une température plus élevée.

Figure 1. L’analyse des échantillons de la caféine et l’acide palmitique GC-FID. La caféine 5 mM standard élue tout d’abord, suivie de l’échantillon de l’acide palmitique 1 mM. La rampe de température était de 0,1 min à 150 ° C, suivie d’une rampe à 10 ° C/min à 220 ° C où la température est gardée pendant 5 min.

Figure 2. Analyse de GC-FID de courses isothermes d’un échantillon de café de torréfaction foncée. Une comparaison des GC-FID tourne à 180 ° C et 200 ° C pour un échantillon de café de torréfaction foncée. Les pics éluer beaucoup plus rapidement à une température de 200 ° C.