Étalon interne

1. manipulation des échantillons correct : Faire une Solution

1. Prenez un bécher propre et masse la quantité correcte de l’échantillon dedans. Enregistrer le réel masse utilisée. Dans cet exemple, une solution de l’adénine est faite dans une fiole jaugée pour utilisation comme étalon interne pour l’analyse suivante. La masse de l’adénine est de 100 mg. Faire pas directement la masse dans une fiole jaugée parce qu’il a un long cou et l’adénine ne peuvent pas être facilement ajoutée ou supprimée.
2. Ajouter environ 25 mL de solvant (en l’occurrence le diméthylsulfoxyde (DMSO)) pour le bécher et laisser il mélanger pour dissoudre. Dans cet exemple, la solution finale est faite dans une fiole jaugée de 50 mL, ainsi qu’ajouter environ 25 mL donc le gobelet peut être rincé et la solution composée au volume final.
3. Une fois que le solide est dissout, verser la solution dans la fiole jaugée.
4. Rincer le becher et bar avec de petites quantités de solvant, environ 10 mL, remuer et verser le rinçage dans la fiole jaugée. Répéter deux fois plus. Cela aide à assurer le transfert de la solution adéquate.

2. préparation d’une courbe de tarage Standard interne

1. Préparer les échantillons standards souhaités pour l’analyse de la chromatographie en phase gazeuse. Dans cet exemple, caféine est extraite du café à l’aide de l’acétonitrile et puis l’adénine est utilisé comme étalon interne pour mesure.
2. Pour les échantillons de caféine, peser la quantité d’échantillon nécessaire pour faire l’échantillon de 1 mg/mL. Si vous utilisez une fiole jaugée de 10 mL, qui est de 10 mg.
3. Peser l’analyte dans un bécher, ajouter quelques mL de solvant (méthanol ici) se dissoudre, puis transvaser quantitativement dans la fiole jaugée à l’aide de 3 rinçages.
4. Faire 3 normes plus de façon similaire avec 0,2, 0,5 et 2 mg/mL de caféine.
5. Mettre 1 mL de chaque caféine standard dans un flacon d’échantillonnage.
6. Ajouter 0,2 mL de l’étalon interne de 2 mg/mL adénine dans chaque flacon d’échantillon.
7. Exécuter l’expérience de la chromatographie en phase gazeuse avec chaque norme de caféine. Pour chaque chromatogramme, calculer le rapport entre la surface des pics de la caféine contre la norme.
8. Faire une parcelle de la zone rapport vs le ratio de concentration. La pente de cette courbe est le facteur de réponse.

3. préparation d’un véritable échantillon avec étalon interne pour chromatographie en phase gazeuse

1. Préparer l’échantillon souhaité pour l’analyse de chromatographie en phase gazeuse. Dans cet exemple, la caféine est extraite de café à l’aide d’acetrontrile.
2. Pour l’échantillon de café, masse avec 2 g de café dans un bécher de 100 mL. Noter le poids exact du café.
3. Ajouter 20 mL d’acétonitrile dans le bécher.
4. Laisser reposer pendant 20 min, en remuant fréquemment.
5. Filtrer le Marc de café à l’aide d’un papier filtre dans un entonnoir.
6. Rincer le filtre en papier x 3 avec de petites quantités d’acétonitrile (5 mL).
7. Mesurer le volume final du filtrat. Il devrait être d’environ 35 mL.

4. exécuter l’échantillon et calculer la Concentration

1. Prélever 1 mL de l’échantillon d’extrait de café et ajouter 0,2 mL de l’étalon interne dans un flacon. Placer la fiole dans support échantillonneur automatique.
2. Exécuter une analyse de GC de l’échantillon. S’assurer que les conditions de GC sont tels que la caféine et l’adénine se séparent. Dans cet exemple, isothermes séparations sont effectuées à 200 ° C.
3. Après l’analyse, calculer l’aire du pic pour les PIC de l’étalon interne et le pic de l’analyte. En utilisant leurs ratios, calculer la quantité de caféine dans l’échantillon.

5. résultats : Analyse de GC de caféine avec étalon interne

1. Analyse de GC de la caféine est illustré à la Figure 1. Adénine est utilisé comme étalon interne. Le rapport entre la surface des pics peut être mesuré et comploté contre le rapport des concentrations. La pente de la courbe est le facteur de réponse (en l’occurrence 1,8).
2. La figure 2 illustre un chromatogramme d’un échantillon de café avec étalon interne d’adénine. Le rapport entre la surface du pic est 1,78. En utilisant le facteur de réponse et la concentration de l’adénine (0,33 mg/mL), la concentration de caféine dans l’échantillon inconnu est calculée à 0,33 mg/mL.

Figure 1. Terrain de calibrage à l’aide d’un étalon interne. Une parcelle des ratios de concentration vs zone rapports pour 3 échantillons standards de caféine (1, 0,5 et 0,2 mg/mL) avec étalon interne de 0,33 mg/mL adénine ajouté à chacune. La pente de la droite est de 1,8, qui est le facteur de réponse.

Figure 2. Chromatogramme de café avec étalon interne adénine. Une parcelle de la réponse du détecteur FID aux échantillons. Les trois principaux sommets sont l’adénine (IS), la caféine et l’acide palmitique.