Cultures enrichies : Cultiver des micro-organismes aérobies et anaérobies dans des milieux sélectifs et différentiels

1. Préparation

1. Avant de commencer, lavez-vous soigneusement les mains et mettez des gants de taille appropriée.
2. Stériliser la surface de travail avec 5 % d'hypochlorite de sodium (blanchiment) et bien sécher.
3. Placez une boucle isolante dans un flacon Erlenmeyer vide de 120 ml afin qu'il ne touche pas le dessus du banc pendant le travail.

2. Médias et cultures de croissance

1. Rassemblez quatre assiettes de Mannitol Salt Agar (MSA), eosin Methylène agar bleu (EMB), et huit agar de soja tryptique (TSA) du réfrigérateur (ceux-ci peuvent être achetés commercialement).
2. Placer les assiettes sur l'aire de travail nettoyée.
3. Rassemblez les cultures suivantes de bouillon : Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, et Proteus vulgaris. Soyez prudent : comme il s'agit d'organismes aérobies, les bouchons des tubes doivent être légèrement lâches.
4. Placez toutes les cultures dans un support de tube à essai sur la surface de travail nettoyée.

3. Transfert de cultures et d'incubation

1. Tenez-vous debout ou asseyez-vous sur le banc avec tous les matériaux à portée de main.
2. Pour utiliser la technique aseptique pour transférer les bactéries dans la plaque, d'abord la flamme de la boucle jusqu'à ce qu'elle soit orange rougeoyante - puis laissez-la refroidir dans l'air.
3. Pendant que la boucle se refroidit, prenez la culture de bouillon de E. coli,puis ouvrez le bouchon à l'aide de votre doigt rose.
4. Flamme l'ouverture du tube rapidement. Cela empêche la contamination.
5. Trempez la boucle dans le tube et striez l'organisme sur le premier quadrant d'une plaque d'OGE.
6. Après la première série est effectuée, la flamme de la boucle, puis effectuer une deuxième série traversant la première série qu'une ou deux fois. Cela permettra l'isolement d'une seule colonie et déterminera s'il y a une contamination.
7. Répétez cette opération jusqu'à ce que les quatre quadrants de la plaque aient été striés.
8. Maintenant, transférez chacun des quatre organismes de la même manière de placage de série de sorte que le produit final soit une plaque MSA, une plaque d'EMB, et deux plaques séparées de TSA par organisme.
9. Une fois que tous les organismes ont été transférés, enflammez la boucle une dernière fois et rangez-la.
10. Placer 1 plaque TSA avec chaque organisme dans le paquet de gaz, puis secouer un sachet de gaz avant de le placer dans la chambre à côté des plaques. Scellez fermement.
11. Incuber toutes les assiettes à 37oC pendant la nuit.
12. Stériliser la surface de travail une dernière fois avec 5% d'eau de Javel.

4. Résultats de lecture et d'enregistrement

1. Retirez les plaques de l'incubateur et placez-les sur un banc de laboratoire propre
2. Prenez note de la croissance des organismes sur chaque plaque de votre ordinateur de laboratoire. En particulier, prenez des notes détaillées sur :
   1. Nombres et taille des colonies (si présent) sur chaque assiette, pour chaque souche plaquée
   2. Apparition de l'agar entourant les colonies poussant sur les plaques MSA
   3. Apparition de toutes les colonies poussant sur les plaques de l'OGE
   4. Différences de croissance entre les plaques TSA cultivées à l'extérieur par rapport à l'intérieur de l'emballage de gaz