Name: Lhomme in vivo des essais biologiques pour la mesure de tissu-spécifique des médiateurs inflammatoires et nociceptifs (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-12-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 54 s
Description: Apprenez la microdialyse cutanée in vivo pour mesurer les médiateurs inflammatoires et nociceptifs chez l'homme. Cette technique permet d'étudier les mécanismes de la douleur dans les tissus inflammés.

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L&#39;induction de l&#39;inflammation expérimentale: <ol><li> Un coup de soleil au premier degré est induite chez les non-tanné la peau d&#39;une cuisse avec l&#39;aide d&#39;un étalonnage, source de rayons ultraviolets B (Saalmann Multitester CFF LT 499, Saalmann GmbH, Hereford, Allemagne). Le coup de soleil est induite 24 heures avant de commencer une expérience microdialyse en appliquant trois fois la quantité de rayons UVB nécessaire pour causer des rougeurs complète de la peau exposée, ou trois fois la dose minimale érythémateuse (DME). Le MED est déterminé dans chaque sujet avant le lancement du projet. Livraison précise d&#39;énergie est assurée avec un UV-mètre (12 RM, le Dr Grobel UV-Electronic GmbH, Ettlingen, Allemagne). </li></ol> Cathéter et la collecte de l&#39;échantillon: <ol><li> Préparer une aire de repos avec des gants stériles, 1 porte-aiguille stérile, une seringue 1cc embout Luer avec une jauge de 23 (G) l&#39;aiguille, une seringue avec une aiguille 1cc 30G, 1% de lidocaïne, tampons d&#39;alcool, 2x2 compresses de gaze stériles, cathéters microdialyse attachée à une fin à une aiguille 23G 4cm (dialyse cutanée, Erlangen, Allemagne), et des tubes de 1,5 ml de collecte Microcent (E &amp; K Scientific, Santa Clara, CA.) avec une solution inhibiteur de protéase 4μl par échantillon 100 ul sur glace sèche. solution inhibiteur de la protéase est faite par instruction du fabricant en utilisant des comprimés inhibiteur de protéase cocktail (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Allemagne). </li><li> Préparer une solution à 1% d&#39;albumine humaine dans la solution de Ringer lactate et de l&#39;attirer dans la seringue embout Luer 1cc, en veillant à l&#39;absence de bulles d&#39;air restant dans la seringue. </li><li> Charger la seringue avec le 1% d&#39;albumine humaine enrichie solution de Ringer lactate dans le berceau (microdialyse multi-seringue en rack, Harvard Apparatus, South Natick, MA) monté sur une pompe à perfusion de haute précision (pompe 22, Harvard Apparatus, South Natick, MA ). Assurez-vous que la barre de la pompe à perfusion de conduite de la seringue est en plein contact avec le piston de la seringue. Réglez le débit de la pompe après avoir vérifié que le diamètre de seringue a été correctement entré dans la pompe. Taux de perfusion couramment utilisés varient entre 2 à 4μl/min. </li><li> Définir la zone que vous prévoyez pour recueillir votre échantillon à partir. Lors de l&#39;échantillonnage d&#39;une zone créée artificiellement enflammés, tels que les coups de soleil décrit ci-dessus, le plan sur l&#39;insertion du cathéter au bord de l&#39;insolation. </li><li> Nettoyez une petite zone sur les bords opposés de la lésion, ou sur le site vous avez l&#39;intention de recueillir votre échantillon à partir, avec l&#39;alcool. Ces zones seront nettoyées à l&#39;insertion prévu et les points de sortie pour le cathéter. Injecter juste assez lidocaïne intra-cutanée (en témoigne blanchissement de la peau à l&#39;injection) sur ces sites afin de créer une bulle très petite taille (maximum de 2 mm). L&#39;injection de quantité limitée tels des échanges intra-cutanée de lidocaïne à l&#39;entrée et de sortie du cathéter de microdialyse ne devrait pas modifier les résultats de l&#39;essai biologique, mais ne font l&#39;insertion du cathéter significativement moins douloureuse pour les sujets de l&#39;étude. </li><li> Utiliser des techniques aseptiques, insérer le cathéter de microdialyse avec l&#39;aide d&#39;une aiguille 23G attachés sur toute la longueur de la zone de la peau explorées. La profondeur de l&#39;insertion est à l&#39;interface entre derme et l&#39;hypoderme. Insertion à une profondeur suffisante peut être vérifié optiquement. Comme l&#39;aiguille et le cathéter attachés sont déplacés vers l&#39;avant, l&#39;aiguille doit provoquer un peu de place-plissement de la peau ainsi que quelques blanchissement de la peau. Aucun saignement devrait se produire. Si le saignement ne se produit, cela indique que l&#39;aiguille se trouve plus profond que prévu et la profondeur d&#39;insertion doit être ajustée. Une fois que l&#39;aiguille a été poussé à travers le point de sortie de la peau, rincer les cathéters avec 1% d&#39;albumine enrichi solution de Ringer lactate jusqu&#39;à ce que vous voyez gouttelettes le long de la longueur du cathéter. Ceci est fait en prenant soin d&#39;insérer la fin aiguille d&#39;une seringue (aiguille 23G) dans l&#39;extrémité distale du cathéter de microdialyse et injectant lentement solution. </li><li> Après le rinçage du cathéter tirez doucement sur l&#39;aiguille pour nourrir le cathéter fixé par la peau. Une manipulation délicate est nécessaire parce que les cathéters sont de petit diamètre, et par conséquent fragile. Tirez le cathéter jusqu&#39;à ce qu&#39;il soit complètement à travers la peau, c&#39;est à dire la base du tube en plastique intégrant plus de l&#39;extrémité distale du cathéter touche la peau au point d&#39;entrée. Comme mentionné ci-dessus, peu ou pas de saignements à la fin de la procédure confirme le positionnement du cathéter optimal. </li><li> Fixez l&#39;extrémité distale du cathéter à la pointe de l&#39;aiguille de la seringue 23G de repos dans le rack de la pompe à perfusion. Les soins sont nécessaires pour éviter la perforation de l&#39;aiguille à travers la paroi du cathéter, ce qui causerait des fuites potentielles. </li><li> Couper l&#39;aiguille à l&#39;extrémité proximale du cathéter. </li><li> En utilisant ¼ de pouce ruban rose, fixez le tube de 1,5 ml de collecte préparés Microcent à la peau à proximité du site de sortie du cathéter. Placez l&#39;extrémité du cathéter dans le tube de collecte pour permettre la collecte des microdialysat. Démarrer la pompe de perfusion à r prédéterminésmangé et par intermittence vérifier que le volume livré et recueillies correspondent. Dans le cas où les volumes ne correspondent pas, la fuite du site d&#39;entrée de peau doit être exclu (peut parfois être résolu en tirant sur la partie du cathéter qui est incorporé par les tubes en plastique plus étroitement sur le site d&#39;entrée de peau). Alternativement, un cathéter peut être nécessaire de remplacer si les volumes livrés et recueillis ne correspondent pas. </li><li> Une fois l&#39;échantillonnage terminé, les échantillons sont placés sur la glace sèche jusqu&#39;à ce stockage à -80 ° C. </li></ol>

<ol><li>Angst, M. S., Clark, J. D., Carvalho, B., Tingle, M., Schmelz, M., Yeomans, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+profile+in+human+skin+in+response+to+experimental+inflammation%2C+noxious+stimulation+and+administration+of+a+COX-inhibitor%3A+A+microdialysis+study%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Cytokine profile in human skin in response to experimental inflammation, noxious stimulation and administration of a COX-inhibitor: A microdialysis study.</a> Pain. 139, 15-27 (2008).</li>
</ol>

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

L&#39;utilisation combinée des techniques de microdialyse et la technologie immuno multiplex est un précieux temps réel, in vivo bioessai humaine offrant un aperçu des événements biochimiques dans les tissus d&#39;intérêt. Combiné avec des tests comportementaux tels que tests de douleur, la méthode permet d&#39;étudier les interactions complexes des produits biochimiques médiation douleur et l&#39;inflammation. La méthode est prometteuse pour 1) l&#39;identification de biomarqueurs spécifiques de tissu médiation douleur et l&#39;inflammatio...

<table><tbody><tr><td>Cathéter de microdialyse</td><td>Outil</td><td>Dialyse dermique</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Pompe 22</td><td>Outil</td><td>Harvard Apparatus</td><td>552219</td><td></td></tr><tr><td>Saalmann Multitester SBB LT 400</td><td>Outil</td><td>Saalmann GmbH</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Radiomètre RM-12 IP-65</td><td>Outil</td><td>Dr. Grobel UV Elektronik GmbH</td><td>82120000/81112100</td><td></td></tr><tr><td>Inhibiteur complet de protéinase</td><td>Réactif</td><td>Roche Group</td><td>11836145001</td><td></td></tr><tr><td>Microtube centrifuge</td><td>Outil</td><td>E&amp;amp;K Scientific</td><td>380150-X</td><td></td></tr><tr><td>Albumine à 5 %</td><td>Réactif</td><td>ZLB Behring</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Soluté de Ringer lactaté</td><td>Réactif</td><td>Hospira Inc.</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Xylocaine-MPF</td><td>Autre</td><td>AstraZeneca</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Seringue de 1 mL</td><td>Outil</td><td>BD Biosciences</td><td>309602</td><td></td></tr></tbody></table>

l&#39;homme in vivo des essais biologiques pour la mesure de tissu-spécifique des médiateurs inflammatoires et nociceptifs

Human In-Vivo Bioassay for the Tissue-Specific Measurement of Nociceptive and Inflammatory Mediators

Ce bio-essai in vivo humaine peut être utilisée pour étudier des volontaires humains et des patients. Les échantillons sont prélevés à partir de sites pertinents, tels que les tissus de la peau via des cathéters insérés microdialyse aseptique (dialyse cutanée, Erlangen, Allemagne). Illustré dans cet exemple est la collection de liquide interstitiel de la peau enflammée expérimentalement chez des volontaires humains. Prélèvement d&#39;échantillon peut être combiné avec d&#39;autres tests expérimentaux. Par exemple, l&#39;évaluation simultanée de produits biochimiques libérés localement et de la sensibilité subjective à un stimulus douloureux de la peau enflammée expérimentalement fournit l&#39;essentiel biochimique et comportementale lien d&#39;identifier des biomarqueurs de la douleur et l&#39;inflammation. Présenté test dans l&#39;organisme humain vivant permet de comprendre mécanistes dans les processus spécifiques de tissus sous-jacents des douleurs et / ou l&#39;inflammation. La méthode est également bien adapté pour examiner l&#39;efficacité des interventions existantes ou nouvelles - telles que de nouveaux candidats médicaments - ciblant le traitement des affections douloureuses et / ou inflammatoire. Cet article propose une description détaillée sur l&#39;utilisation des techniques de microdialyse pour recueillir le liquide interstitiel lésion cutanée expérimentale enflammées des sujets de l&#39;étude humaine. Les échantillons de liquide interstitiel sont généralement traitées avec l&#39;aide de tests immunologiques multiplexe array billes permettant titrant jusqu&#39;à 100 analytes dans des échantillons de faible volume de 50 microlitres.

Une technique est présentée pour la collection in-vivo d&#39;échantillons de liquide interstitiel des tissus à partir de sites pertinents (peau ici, expérimentalement enflammés) pour la mesure de médiation biochimiques douleur et l&#39;inflammation.

L&#39;homme in vivo des essais biologiques pour la mesure de tissu-spécifique des médiateurs inflammatoires et nociceptifs

Ce bioessai humain in vivo peut être utilisé pour étudier des volontaires et des patients humains. Des échantillons sont prélevés sur des sites tissulaires pertinents, tels que la peau, via...

Cette vidéo commence 24 heures après l'induction d'un coup de soleil expérimental sur la cuisse d'un patient à l'aide d'une source lumineuse UV calibrée. Après l'application d'un anesthésique local, un cathéter de microdialyse est inséré entre les couches cutanée et sous-cutanée, puis est tiré à travers la peau. Une seringue de perfusion est fixée à l'extrémité proximale du cathéter, et l'activation de la pompe de perfusion induit l'écoulement et la collecte du microlysat.Les échantillons recueillis peuvent être stockés à moins 80 degrés Celsius jusqu'à ce que l'analyse des médiateurs de la nociception et de l'inflammation soit prête à être effectuée. Bonjour, je suis Martin Angst, du Département d'anesthésie de l'Université Stanford. Et bonjour, je suis Martha Tingle, infirmière chercheuse principale et responsable du Laboratoire de la Douleur Humaine, fondé par le Dr Angst en 1995 ici à l'Université Stanford.Aujourd'hui, nous allons vous présenter une procédure pour la mise en place de cathéters de microdialyse dans la peau inflammée expérimentale de participants humains afin de recueillir le liquide interstitiel. Nous utilisons cette technique dans notre laboratoire pour étudier

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Une technique pour recueillir et mesurer les médiateurs biochimiques plaie chirurgicale à des moments précis.

Recueillir et mesurer les médiateurs nociceptifs et inflammatoires dans les plaies chirurgicales

Algorithmes d'évaluer les seuils de douleur thermique et mécanique de la peau enflammée expérimentalement des sujets de l'étude humaine sont présentés. Les deux modèles de test douleurs nociceptives examiner séparément le traitement par les deux principaux périphériques populations de fibres nerveuses de transmettre la douleur, c'est à dire, non myélinisées de fibres myélinisées C et petites fibres A-delta.

Déterminer la chaleur et le seuil de douleur mécanique dans la peau enflammée des sujets humains

Cette vidéo démontre la quantification des médiateurs inflammatoires au cours de l’infection en incubant des cellules immunitaires dérivées de tissus pulmonaires humains avec Haemophilus influenzae. La cytométrie en flux est utilisée pour mesurer la fluorescence des cytokines dans les lymphocytes marqués, en corrélation avec la production de cytokines pro-inflammatoires en réponse à une infection bactérienne.

Quantification des médiateurs inflammatoires dans des cellules dérivées de tissus humains infectés

Afin d'étudier les changements de fibres nerveuses nociceptives (intraépidermiques IENFs) dans les neuropathies douloureuses (PN), nous avons développé des protocoles qui pourraient examiner directement les modifications morphologiques tridimensionnels observés dans IENFs nociceptifs. Analyse tridimensionnelle de IENFs a le potentiel d'évaluer les changements morphologiques des IENF en PN.

L&#39;imagerie tridimensionnelle de nociceptifs fibres nerveuses intra-épidermiques dans des biopsies de peau humaine

Nous décrivons une méthode d'imagerie non-invasive permettant de distinguer les stades inflammatoires. Administration systémique de luminol révèle des zones d'inflammation aiguë dépendent activité MPO dans les neutrophiles. En revanche, l'injection de lucigénine permet de visualiser l'inflammation chronique dépend de l'activité Phox dans les macrophages.

In vivo méthode d&#39;imagerie à distinguer inflammation aiguë et chronique

Nous décrivons un protocole pour examiner l'évolution de l'hyperalgésie et de tolérance chez les souris induite par les opioïdes. Sur la base de la mesure des réponses nociceptifs thermiques et mécaniques des animaux naïfs et traités par la morphine, il permet de quantifier l'augmentation de la sensibilité à la douleur (hyperalgie) et diminuer de l'analgésie (tolérance) associée à l'administration d'opiacés chronique.

L&#39;évaluation de la tolérance induite par la morphine hyperalgésie et analgésique chez la souris utilisant thermiques et mécaniques nociceptifs modalités

Cet article explique l'application de l'imagerie fluorescente à l'aide d'une sonde d'imagerie optique activable pour visualiser l'activité in vivo des métalloprotéinases matricielles clés dans deux modèles expérimentaux différents d'inflammation.

Non invasif<em&gt; In Vivo</em&gt; Imagerie optique à fluorescence d&#39;une activité MMP inflammatoire à l&#39;aide d&#39;un agent d&#39;imagerie fluorescente activable

Les changements morphologiques se produisent dans les cellules de fibroblaste sensibles au système immunitaire après l'activation et favorisent des changements dans le recrutement cellulaire. Utilisation de l'imagerie à 2 photons en conjonction avec une protéine génétiquement modifiée spécifique au fibroblaste 1 (FSP1)-cre; tdTomato floxed-stop-floxed (TB/TB) ligne de souris et vert fluorescent marqué lipopolysaccharide-FITC, nous pouvons illustrer l'apport très spécifique de lipopolysaccharide...

In Vivo Deux-Couleur 2-Photon Imagerie des cellules de reporter génétiquement marqués dans la peau

Un protocole standard est décrit pour étudier l’activité antitumorale et la toxicité associée de l’IL-1α dans un modèle murin syngénique de HNSCC.

Evaluation de l’activité antitumorale in vivo des nanoparticules de polyanhydride IL-1α

Les méthodes immunochimiques établies pour mesurer les transmetteurs peptidiques in vivo reposent sur la microdialyse ou le prélèvement de fluide en vrac pour obtenir l’échantillon en vue d’une analyse hors ligne. Cependant, ceux-ci souffrent de limitations spatio-temporelles. Le présent protocole décrit la fabrication et l’application d’un biocapteur capacitif immunoprobe qui surmonte les limites des techniques existantes.

Mesure in vivo résolue dans le temps de la dynamique des neuropeptides par immunosonde capacitive dans le cœur porcin

Le protocole décrit comment mesurer l’hyperalgésie du genou chez la souris. Nous montrons des exemples dans des modèles murins de douleurs aiguës au genou ainsi que dans des modèles d’arthrose (OA).

Évaluation de l’hyperalgésie du genou chez la souris à l’aide de la mesure de l’application de pression

Apprenez la microdialyse cutanée in vivo pour mesurer les médiateurs inflammatoires et nociceptifs chez l'homme. Cette technique permet d'étudier les mécanismes de la douleur dans les tissus inflammés.

L'homme in vivo des essais biologiques pour la mesure de tissu-spécifique des médiateurs inflammatoires et nociceptifs

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