Zebrafish entier Mont haute résolution double fluorescent In Situ Hybridation

Cette procédure nous permet de déterminer les modèles d’expression génique dans les embryons de poisson-zèbre à haute résolution, une sonde ribo antisens est hybridée à l’ARNm cible complémentaire. La sonde Ribo marquée est reconnue par un anticorps qui est conjugué à une enzyme peroxydase : l’aramide conjugué au fluoro quatre est ajouté aux embryons et la peroxydase convertit l’IDE en un composé hautement réactif. Conduisant à un dépôt stable du fluoro, quatre IDE non liés sont emportés, révélant le modèle subcellulaire détaillé de la distribution de l’ARNm.

L’expression d’un deuxième gène peut être observée à l’aide d’une sonde distinctement marquée et d’un tyrom fluoro four différent, ce qui permet une comparaison détaillée de l’expression. Bonjour, je m’appelle Tim Brent et je travaille dans le laboratoire de Scott Holly au Département de biologie moléculaire, cellulaire et du développement de l’Université de Yale. Aujourd’hui, nous allons vous montrer une procédure pour l’hybridation in situ double fluorescente in situ à haute résolution de monture entière d’embryons de poisson-zèbre zèbre en laboratoire.