Name: DAL-Ligature: un modèle murin dinfarctus du myocarde (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-14T23:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Apprenez la technique de ligature de l'artère coronaire antérieure gauche chez la souris pour créer un modèle fiable d'infarctus du myocarde. Cette méthode chirurgicale permet d'étudier les mécanismes pathophysiologiques de l'ischémie cardiaque.

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Les auteurs remercient Christiane Pahrmann pour son aide technique et l&#39;histologie du spectacle.

<html> Souris Balb / C d&#39;un poids minimum de 20g à l&#39;âge de 8 à 12 semaines sont achetés auprès de Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld). Les souris sont logées dans des conditions classiques, nourris avec des granulés de souris standard et eau ad libitum. Anesthetize souris avec l&#39;isoflurane (2%) en utilisant une chambre d&#39;induction. <ol><li> Rasez la zone du cou et le côté gauche de la cage thoracique et de désinfecter à l&#39;aide d&#39;éthanol à 80%. </li><li> Placez la souris sur son dos et placer un masque sur sa bouche et le nez pour maintenir l&#39;anesthésie. </li><li> Vérifiez les réflexes pincer la queue et les pattes arrières pour être sûr que la souris est suffisant anesthésiés. </li><li> Sous vue microscopique effectuer une incision médiane cervical séparant la peau, des muscles et du tissu couvrant la trachée. </li><li> Lorsque la trachée est exposé couper un petit trou dans le tissu entre deux anneaux cartouche en dessous de la glotte pour insérer la sonde endotrachéale (figure 1). Insérez la sonde endotrachéale tenant la partie crânienne de la trachée à l&#39;aide de micro forecepts chirurgicale. Vérifiez le mouvement thoracique pour être sûr que les deux poumons sont bien aérés. </li><li> Le taux de respiration (RR) devrait être d&#39;environ 110 par minute, avec une pression inspiratoire de 17 à 18cm H 2 O. Retournez la souris attentivement, couché sur son côté droit, face à son côté gauche. Effectuer une thoracotomie leftsided entre le 3 ème et 4 ème de la côte, et de disséquer les tissus et les muscles soigneusement, en utilisant une Cauter pour prévenir les saignements. </li><li> Ouvrez le thorax attentivement, une fois le thorax est ouvert, trouver le cœur, sans toucher le poumon avec un objet pointu. Maintenant, enlevez la partie du sac péricardique qui recouvre le cœur. </li><li> Le DAL est situé entre l&#39;artère pulmonaire et l&#39;oreillette gauche. Utilisez un 8-0 Prolène suture (Ethicon, Norderstedt, Allemagne) pour ligaturer l&#39;artère interventriculaire antérieure proximale avec une suture simple (figure 2). </li><li> Placer un drain thoracique (28G, un cathéter veineux), entre le 4 ème et 5 ème de la côte. </li><li> Fermer l&#39;incision thoracique en couches, en utilisant 6-0 Prolène sutures course (Ethicon, Norderstedt, Allemagne) pour adapter les côtes et les points de suture Prolène 4-0 fonctionnement (Ethicon, Norderstedt, Allemagne) pour fermer la peau. </li><li> Égoutter le thorax à l&#39;aide d&#39;une seringue 2ml soigneusement (figure 3). Placez la souris sur son dos. Maintenant, prenez la sonde endotrachéale et d&#39;adapter les anneaux cartouche trachéale avec un point unique à l&#39;aide des sutures 7-0 Prolène (Ethicon, Norderstedt, Allemagne). </li><li> Placez le masque sur la souris et fermer la peau à l&#39;aide Prolène 4-0 courir sutures (Ethicon, Norderstedt, Allemagne). </li></ol> Validation Il existe différentes possibilités pour confirmer le succès de la LAD-ligature. Le test de la troponine peut être effectuée 6 à 18 heures après la chirurgie, en utilisant seulement 150 L de sang, sans la nécessité d&#39;euthanasier l&#39;animal. Le sang est appliqué à un kit de test personnalisés troponine (T TROP sensible, Roche, Mannheim) (figure 4). La troponine est une protéine régulatrice dans les filaments d&#39;actine de la cellule musculaire, il ya différents isotypes dans les trois types de muscles. La cTnI et de cTnT isotypes sont trouvés dans le cœur et sont libérés des lésions tissulaires. Le test normalisé pour la troponine T (cTnT) est basé sur deux anticorps monoclonaux spécifiques du cœur, l&#39;un des pièges de la troponine dans l&#39;échantillon de sang, le second est un marqueur. La zone infarcie peut être identifiée macroscopiquement après 3 jours (figure 5). TTC (2,3,5-triphényltétrazolium chlorure) la viabilité des tissus coloration des mesures utilisées pour évaluer la taille d&#39;infarctus. Bleu Evans (1,5%, 1,0 ml) dans un tampon phosphate salin (PBS) est injecté dans la cavité ventriculaire gauche à mesurer la surface du myocarde ischémique. La souris est euthanasié et le cœur est récolté et sectionnés en tranches. Les tranches de tissu sont incubés dans une solution de PBS% TTC, pH 7,4 à 37 ° C pendant 20min. Les tissus sont fixés dans 10% de PBS-formol tamponné nuit à 2-8 ° C. TTC est administré ex vivo pour la teinture bleu Evans-négatif domaines (figure 6). Pour l&#39;histologie de la souris doit être euthanasié et le cœur doit être intégré pour un traitement ultérieur. Après avoir effectué des coupes en paraffine, les lames sont colorées au H &amp; E (hématoxyline-éosine) ou trichrome de visualiser les tissus fibreux (figure 7). <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig1.jpg" alt="Figure 1" /> Figure 1: tube trachéal. 1A: Exposed trachée, après incision cervicale ventrale. 1B: trachée est ouvert deux anneaux cartilagineux caudale au larynx. 1C: tube trachéal est insérée dans la trachée. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig2.jpg" alt="Figure 2" /> Figure 2: Le coeur est exposée à travers une thoracotomie du côté gauche, le DAL est ligaturé. t &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig3.jpg" alt="Figure 3" /> Figure 3: Après le thorax est fermé, un drain pleural est effectué. La souris est toujours sous anesthésie. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig4.jpg" alt="Figure 4" /> Figure 4: Deux lignes apparaissent après quelques minutes lorsque le test est positif de troponine. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig5.jpg" alt="Figure 5" /> Figure 5: Affiche le coeur explanté. 5A: Vue macroscopique du cœur avec la zone ischémique avec une couleur fanée blanchâtre. 5B: Coupe transversale du cœur infarci, la zone ischémique montre dans le coin supérieur droit.

<ol><li>Atkins, B. Z., Hueman, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+cardiomyoplasty+improves+diastolic+properties+of+injured+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Cellular cardiomyoplasty improves diastolic properties of injured Heart.</a> J Surg Res. 85 (2), 234-242 (1999).</li>
<li>Jaquet, K., KT, K. rause <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+myocardial+scar+size+after+implantation+of+mesenchymal+stem+cells+in+rats%3A+what+is+the+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Reduction of myocardial scar size after implantation of mesenchymal stem cells in rats: what is the mechanism.</a> Stem Cells Dev. 14 (3), 299-309 (2005).</li>
<li>Joung, B., Kim, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+mononuclear+stem+cells+transplanted+in+rat+infarct+myocardium+improved+the+electrical+conduction+without+evidence+of+proarrhythmic+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Yonsei+Med+J%22%5BJournal%5D)">Bone marrow mononuclear stem cells transplanted in rat infarct myocardium improved the electrical conduction without evidence of proarrhythmic effects.</a> Yonsei Med J. 48 (5), 754-764 (2007).</li>
</ol>

Financement La présente étude a été soutenue par l&#39;Université de Hambourg Hôpital (MK, Femme Habilitation Grant), DFG (SS, SCHR992/3-1), ISHLT (TD, 2009 Prix de recherche). Déclaration Tous les animaux ont reçu des soins humains en conformité avec les Principes de protection des animaux de laboratoire, des expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives et règlements établis par la Société nationale pour la recherche médicale et le Guide pour les soins et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire publié par le National Institutes of Health (Instituts nationaux de santé de publication 85-23, révisée en 1985). Tous les animaux ont été obtenus à partir de Charles River Laboratories (Sulzfeld, Allemagne) et ont été maintenus dans les installations de soins aux animaux de l&#39;Hôpital universitaire Eppendorf à Hambourg. Les animaux ont reçu la norme chow et eau ad libitum.

En résumé, cette vidéo permet de visualiser le modèle DAL-ligature, étape par étape, et identifie les données DAL-ligature des souris aussi facilement réalisables procédures chirurgicales.

dal-ligature: un modèle murin d&#39;infarctus du myocarde

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Les modèles de recherche de l&#39;infarctus et l&#39;ischémie myocardique sont indispensables pour étudier les processus aigus et chroniques pathobiologiques et physiopathologiques de l&#39;ischémie myocardique et de développer et d&#39;optimiser le traitement futur. Deux méthodes différentes de créer une ischémie myocardique sont effectuées sur des rongeurs de laboratoire. La première méthode est de créer cryo infarctus, une technique rapide mais inexacte, où un cryo-plume est appliqué sur la surface du cœur (1-3). En utilisant cette méthode, le chercheur ne peut garantir que la cryo-cicatriciel entraîne une ischémie, également une blessure vastes du myocarde est créé, qui montre que les effets secondaires physiopathologiques sont pas liés à un infarctus du myocarde. La deuxième méthode est la ligature permanente de l&#39;artère interventriculaire antérieure (AIA). Ici, le DAL est ligaturé avec un point unique, formant une ischémie qui peut être vu presque immédiatement. En fermant la DAL, aucun flux sanguin supplémentaire est permise dans cette zone, tandis que les tissus environnants du myocarde est presque pas affecté. Cette intervention chirurgicale imite les aspects pathobiologiques et physiopathologiques se produisant dans l&#39;infarctus liés à l&#39;ischémie myocardique. La méthode introduite dans cette vidéo démontre la procédure chirurgicale d&#39;un modèle de souris infarctus par ligature de la LAD. Ce modèle est pratique pour les études pathobiologiques et physiopathologiques ainsi que sur les immunobiologiques infarctus du myocarde. La technique montrée offre une grande précision et une bonne corrélation avec les coupes histologiques.

Cette vidéo montre comment utiliser un modèle rapide et fiable pour étudier les processus pathobiologiques et physiopathologiques de l&#39;ischémie myocardique.

DAL-Ligature: un modèle murin d&#39;infarctus du myocarde

Les modèles de recherche sur l'infarctus et l'ischémie myocardique sont essentiels pour étudier les processus pathobiologiques et pathophysiologiques aigus et chroniques ...

Une incision cervicale médiane est réalisée pour exposer la trachée, et un petit trou est pratiqué dans la trachée afin d'insérer un tube endotrachéal. La souris est placée sur son côté droit et une thoracotomie gauche est effectuée entre la troisième et la quatrième côte. Le cœur est exposé et l'artère coronaire antérieure (LAD) est ligaturée par un seul point de suture.Après la mise en place d'un drain thoracique et la fermeture de l'incision, le thorax est drainé en aspirant soigneusement la seringue. Enfin, la souris est retournée sur le dos.Le tube trachéal est retiré et la trachée ainsi que l'incision cervicale sont fermées. Bonjour, je suis Sonya Refa. Je suis professeure d'immunologie et de chirurgie cardiaque au Département de chirurgie cardiovasculaire du Centre cardiaque universitaire de Hambourg.Notre laboratoire se concentre sur l'immunobiologie des cellules souches et l'immunologie de la transplantation. Aujourd'hui, nous allons vous présenter le modèle de ligature LID. Nous utilisons ce modèle dans notre laboratoire pour étudier l'effet de la thérapie par cellules souches afin de régénérer le cœur après un infarctus du myocarde.Et je suis KA Wan, étudiante à l'Univer

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De nombreuses manipulations génétiques et / ou injections intra-myocardique de gènes, de protéines, de cellules et / ou biomatériaux sont superposées la dimension du temps dans des études de l'ischémie aiguë / reperfusion et le remodelage chronique chez la souris. Cette vidéo illustre les procédures de microchirurgie de l'ischémie / reperfusion, la ligature des artères coronaires permanente, et les études d'injection intramyocardique.

Ligature de l&#39;artère coronaire et injection intramyocardique dans un modèle murin d&#39;infarctus

La procédure chirurgicale utilisée pour induire un infarctus du myocarde expérimental chez la souris commence par thoracotomie gauche, entre le troisième et le quatrièmes nervures afin de visualiser la surface antérieure du cœur et le poumon gauche. L'artère coronaire gauche est ligaturée, la poitrine est fermée et la souris est autorisé à se rétablir spontanément.

Technique de modification de ligature de l&#39;artère coronaire chez la souris

Dans cette vidéo, nous décrivons une intervention chirurgicale visant à générer un modèle murin d’infarctus du myocarde en ligaturant de façon permanente l’artère coronaire descendante antérieure gauche.

Génération d’un modèle murin d’infarctus du myocarde : une procédure chirurgicale pour la ligature permanente de l’artère coronaire descendante antérieure gauche dans un modèle murin

Nous introduisons une méthode chirurgicale pour induire expérimental d'ischémie / reperfusion (I / R) des blessures pour simuler un infarctus du myocarde (IM) dans les modèles de souris qui permet une plus grande clarté dans le positionnement de la ligature sur l'artère interventriculaire antérieure gauche (LAD) d'augmenter la reproductibilité d'expériences MI chez la souris.

Un modèle murin d&#39;ischémie myocardique-reperfusion par ligature de l&#39;artère interventriculaire antérieure

L’insuffisance cardiaque est la principale cause d’hospitalisation et une cause majeure de mortalité. Un modèle de ligature permanente de l’artère coronaire descendante antérieure gauche chez la souris est appliqué pour étudier le remodelage ventriculaire et le dysfonctionnement cardiaque après un infarctus du myocarde. La technique des mesures hémodynamiques invasives chez la souris est présentée.

Ligature permanente de l&#39;artère interventriculaire antérieure coronaire chez la souris: Un modèle de post-infarctus du myocarde et de remodelage de l&#39;insuffisance cardiaque

Nous fournissons une méthode fiable pour la ligature de l’artère descendante antérieure gauche (LAD) dans un modèle murin. Cette méthode est comparativement moins invasive que les autres méthodes, impliquant l’intubation endotrachéale, une approche de thoracotomie gauche et la thoracentèse. Cette méthode peut être utilisée comme modèle pour l’infarctus du myocarde (IM) aigu et chronique.

Murine gauche interventriculaire antérieure (LAD) Coronary Artery Ligature: un modèle amélioré et simplifié pour Myocardial Infarction

Ici nous décrivons une procédure chirurgicale montrant comment réaliser la ligature permanente de l'artère coronaire descendante gauche-antérieure chez les souris. Ce modèle est d'une grande pertinence pour étudier la pathophysiologie de l'infarctus du myocarde et les processus biologiques concomitants.

Modèle d'infarctus myocarde de Murine utilisant la ligation permanente de l'artère coronaire descendante antérieure gauche

Nous décrivons ici une méthode simple et reproductible qui peut induire un infarctus du myocarde ou une lésion d’ischémie-reperfusion myocardique chez la souris par ligature de précision de l’artère coronaire descendante antérieure gauche par micromanipulation.

Induction d’un infarctus du myocarde et d’une lésion d’ischémie-reperfusion myocardique chez la souris

Présenté ici est une procédure chirurgicale pour la ligature permanente de l’artère coronaire gauche chez la souris. Ce modèle peut être utilisé pour étudier la physiopathologie et la réponse inflammatoire associée après un infarctus du myocarde.

Ligature de l’artère coronaire gauche: un modèle murin chirurgical d’infarctus du myocarde

Isolement murin îlots pancréatiques

Apprenez la technique de ligature de l'artère coronaire antérieure gauche chez la souris pour créer un modèle fiable d'infarctus du myocarde. Cette méthode chirurgicale permet d'étudier les mécanismes pathophysiologiques de l'ischémie cardiaque.

DAL-Ligature: un modèle murin d'infarctus du myocarde

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