Name: Culture de la souris de neurones précurseurs de cellules souches (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 27 min 44 s
Description: Découvrez la culture de neurones précurseurs isolés du cortex embryonnaire de souris. Cette méthode permet d'étudier le développement cérébral et les mécanismes de neurogenèse in vitro.

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<ol><li> Précurseurs neuronaux de la souris (PNJ) ont été isolés à partir du cortex E12.5 embryon. </li><li> Couches de la peau et mésenchymateuses ont été retirés de vésicules télencéphalique disséqué. </li><li> Les vésicules ont été incubés dans de la trypsine 0,05% à 0,02% EDTA et 0,2% de BSA dans du HBSS pendant 20 minutes à 37 ° C. </li><li> Trypsinisation a été arrêté par un volume égal de 1 inhibiteur mg / ml trypsine de soja (Sigma # T6522) dans HBSS. </li><li> Tissu de digestion ont été dissociées en utilisant plusieurs séries de trituration avec des pipettes Pasteur polie au feu. </li><li> Les cellules ont été lavées une fois avec 0,2% de BSA dans du HBSS et étalées à 50.000 cellules / ml sur la laminine enduit de lamelles dans les médias avec 20 ng / ml EGF, 10 ng / ml FGF2 (R &amp; D Systems ou Peprotech), et 2 ug / ml d&#39;héparine ( Sigma). </li></ol>

<ol><li>Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+indirect+roles+of+CNS+dorsal+midline+cells+in+choroid+plexus+epithelial+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation.</a> Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).</li>
<li>Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+human+neural+precursor+cells+by+laminin+and+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins.</a> J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).</li>
</ol>

De grands progrès dans notre compréhension du développement du SNC et biologie des cellules souches ont été rendues possibles par notre capacité à récolter, isoler et cultiver des cellules embryonnaires souches neurales. Cette vidéo montre la dissection du cortex de souris E12.5 cérébrale et la désagrégation ultérieure et la culture d&#39;embryons des cellules souches neurales. Beaucoup d&#39;autres d&#39;autres méthodes similaires ont été employées avec succès par d&#39;autres chercheurs.

<table><tbody><tr><td>Ciseaux droits pour iris</td><td>Outil</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-11</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux moyens</td><td>Outil</td><td>Fine Science Tools</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux micro</td><td>Outil</td><td>Fine Science Tools</td><td>15002-08</td><td></td></tr><tr><td>Pinces courbées</td><td>Outil</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td></td></tr></tbody></table>

culture de la souris de neurones précurseurs de cellules souches

Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors

Primaire cultures de cellules souches neurales sont utiles pour étudier les mécanismes sous-jacents développement du système nerveux central. Recherche sur les cellules souches va augmenter notre compréhension du système nerveux et peut nous permettre de développer des traitements pour les maladies du cerveau actuellement incurables et des blessures. En outre, les cellules souches doivent être utilisés pour la recherche sur les cellules souches destinées à l&#39;étude détaillée des mécanismes de différenciation neuronale et transdifférenciation et les signaux environnementaux et génétiques qui dirigent la spécialisation des cellules dans des types cellulaires particuliers. Cette vidéo montre une technique utilisée pour désagréger les cellules à partir du jour 12,5 prosencéphale embryonnaire dorsale de souris. La procédure de dissection comprend la récolte d&#39;embryons de souris E12.5 de l&#39;utérus, en supprimant la «peau» avec de fines pinces à disséquer, et enfin d&#39;isoler des morceaux de cortex cérébral. Après la dissection, le tissu est digéré et dissociées mécaniquement. Les cellules resuspendues dissociées sont ensuite cultivées en &quot;cellules souches&quot; des médias qui favorise la croissance des cellules souches neurales.

Cette vidéo décrit la méthode utilisée pour l&#39;isolement de neuroprecursors du cortex en développement de souris embryonnaires. La procédure pour la suppression des embryons dans l&#39;utérus, la dissection du tissu cortical, et digérant le cortex cérébral est démontré isolés.

Culture de la souris de neurones précurseurs de cellules souches

Les cultures primaires de cellules souches neurales sont utiles pour étudier les mécanismes sous-jacents au développement du système nerveux central. La recherche sur les cellules souches augmentera...

Voici donc la première étape de l'isolement, de la dissociation et de la culture des cellules souches neurales. Tout d'abord, je vais revêtir une plaque de 24 puits. Elle n'est pas traitée pour la culture de tissus.Je vais l'enduire de laminine afin que les cellules adhèrent. Tout d'abord, je vais l'enduire d'un mélange d'eau et de poly-L-lysine. J'ajouterai environ 450 microlitres par puits.Je vais donc simplement, j'ai donc recouvert la moitié de la plaque, ces deux rangées ici, avec la solution de poly-D-lysine. Et je vais incuber pendant cinq minutes à température ambiante, directement dans la hotte. L'incubation a donc duré cinq minutes.Je vais simplement retirer la solution de PDL à l’aide d’un vide ici. Action d’aspiration. Maintenant, je vais rincer à nouveau les puits avec de l’eau, environ 450 microlitres.Aucun temps d'incubation réellement pour le rinçage à l'eau. Je vais simplement aspirer l'eau. Maintenant, je vais ajouter la solution de stratification.Le laminine est dissoute dans le milieu EM à deux microgrammes par millilitre. J'ajoute donc 450 microlitres de la solution de laminine à chaque échantillon ; pour l'instant, je recouvre du plastique. Vous auriez égaleme

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Biologie

Ici, nous montrons notre méthode pour isoler la souris épiderme des cellules souches neurales de crête (EPI-NCSC). Technique consiste à micro-dissection follicules moustaches, isoler le renflement et il placeing en culture de tissus. EPI-NCSC commencent à émigrer à partir d'explants renflement sur le substrat dans les 3 - 4 jours.

Souris épidermique Neural Stem Cell Crest (EPI-NCSC) cultures

Ce protocole vidéo démontre l'application du test Neurosphère pour l'isolement et l'expansion des cellules souches neurales de la éminences ganglionnaires du jour embryonnaire 14 cerveau de souris.

Établir embryonnaires de la souris culture de cellules souches neurales utilisant le test Neurosphère

Isolement de la crête neurale embryonnaire à partir du tube neural facilite l'utilisation...

Isolement et culture de cellules de crêtes neurales de tube neural embryonnaire murin

Cette vidéo présente un protocole détaillé pour isoler les parois du ventricule latéral du cerveau de souris adulte et effectuer une dissociation enzymatique du tissu pour obtenir des cellules uniques. Ces cellules sont ensuite soumises à des conditions de culture spécifiques qui favorisent sélectivement la prolifération des cellules souches neurales et favorisent leur différenciation en co-cultures d’oligodendrocytes et d’astrocytes.

Obtention d’une culture mixte d’oligodendrocytes et d’astrocytes à partir de cellules souches neurales de souris adultes

Cette vidéo présente une méthode de génération in vitro de cellules progénitrices neurales (NPC) à partir de cellules souches embryonnaires de souris (mESC). Les CSEm sont cultivées en suspension pour former des corps embryoïdes (EB), qui sont ensuite guidés pour se différencier en NPC via un traitement à l’acide rétinoïque dans une culture adhérente.

Technique de génération de cellules progénitrices neurales à partir de cellules souches embryonnaires de souris

Nous décrivons ici un protocole détaillé pour la production simultanée de cultures de cellules de précurseur de neurones, soit comme des monocouches ou des neurosphères adhérentes, à partir de la zone sous-ventriculaire et le gyrus denté de souris individuels adultes.

Une souris, deux cultures: Isolement et culture des cellules souches adultes de neurones à partir des deux Neurogenic Zones de souris individuelle

Ce protocole décrit en détail la méthode de génération de progéniteurs neuronaux à partir de cellules souches embryonnaires à l’aide d’une méthode monocouche sans sérum. Ces progéniteurs peuvent être utilisés pour dériver des types de cellules neurales matures ou pour étudier le processus de spécification neuronale et se prêtent à la mise à l’échelle de formats multipuits pour le criblage de composés.

Différenciation neurale des souris de cellules souches embryonnaires dans le sérum sans culture monocouche

La mise en place de systèmes de culture pour l’expansion des cellules souches neurales adultes (CSNa) permet l’examen et l’application des CSNa à des fins thérapeutiques. La zone sous-calleuse (SCZ) a récemment été reconnue comme une nouvelle région formant des neuroblastes chez les souris adultes. Ici, les méthodes d’isolement, d’expansion et de différenciation des SCZ-aNSC sont décrites.

Isolement et culture des adultes cellules souches neurales de la Subcallosal Zone Souris

Ici, nous présentons une nouvelle technique microchirurgicale pour isoler des cellules souches neurales de l’éminence E13 souris embryon ganglionnaire.

Isolement et Culture des embryons de souris des cellules souches neurales

Nous décrivons la procédure de différenciation in vitro des cellules souches embryonnaires de souris en cellules neuronales en utilisant la méthode de la goutte suspendue. De plus, nous effectuons une analyse phénotypique complète par RT-qPCR, immunofluorescence, séquençage de l’ARN et cytométrie en flux.

Différenciation et caractérisation des progéniteurs neuronaux et des neurones à partir de cellules souches embryonnaires de souris

Découvrez la culture de neurones précurseurs isolés du cortex embryonnaire de souris. Cette méthode permet d'étudier le développement cérébral et les mécanismes de neurogenèse in vitro.

Culture de la souris de neurones précurseurs de cellules souches

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