Name: Dissection de lhippocampe gyrus denté de souris adulte (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-17T20:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Découvrez la dissection du gyrus denté de souris adulte sous stéréomicroscope pour les études en neurosciences. Cette technique permet d'obtenir des échantillons intacts pour analyses transcriptomiques et protéomiques.

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Nous remercions le Dr Yoko Nabeshima l&#39;Université de Kyoto pour son instruction sur la technique de dissection et Mme Aki Miyakawa au Fujita University Health pour son soutien au cinéma. Ce travail a été soutenu par le Programme pour la promotion des recherches fondamentales en sciences de la santé de l&#39;Institut national de l&#39;innovation biomédicale, une subvention en aide pour la recherche scientifique sur les priorités de recherche dans le cerveau les zones-intégrative (Shien) - à partir du MEXT au Japon, et par une subvention en aide à partir crête de la Japan Science and Technology Agency.

Dissection de gyrus denté hippocampique <ol><li> Dans une souris profondément anesthésiés, soigneusement disséquer le cerveau hors du crâne et de le placer dans la glace froide tampon phosphate salin (PBS). </li><li> Dans une boîte de Petri contenant PBS glacé, coupé le cerveau le long de la fissure longitudinale du cerveau à l&#39;aide d&#39;un couteau chirurgical, et de couper les régions postérieures à lambda (mésencéphale, le rhombencéphale et le cervelet). </li><li> Placez le côté médial hémisphère cérébral et, en utilisant une pince, retirer délicatement le diencéphale (thalamus et l&#39;hypothalamus) sous un microscope de dissection. Cela permettra d&#39;exposer la face médiale de l&#39;hippocampe, permettant la visualisation du gyrus denté. Le gyrus denté se distingue de la corne d&#39;Ammon par les écarts entre eux. Blessure à l&#39;hippocampe ou dans les environs, il sera plus difficile d&#39;isoler le gyrus denté. </li><li> Insérez une forte aiguille à pointe (par exemple, de calibre 27-aiguille) dans chaque côté du gyrus denté (limites du gyrus denté et la corne d&#39;Ammon; figure 1), et faites glisser les aiguilles superficiellement le long de l&#39;axe septo-temporelle de l&#39;hippocampe à isoler le gyrus denté. </li><li> Ramassez le gyrus denté isolés à l&#39;aide d&#39;une aiguille ou une pince et le placer dans un tube d&#39;échantillon. Les échantillons ainsi obtenus denté tissus gyrus peut être utilisé immédiatement pour toute analyse ou stockés dans un congélateur pour une utilisation ultérieure. </li><li> Isoler le gyrus denté de l&#39;autre hémisphère cérébral en utilisant la même méthode. </li></ol> Quantitative PCR en temps réel Le gyrus denté a été isolé en utilisant la méthode ci-dessus et l&#39;hippocampe reste a été disséqué comme échantillon de corne d&#39;Ammon de souris de type sauvage. PCR en temps réel de la bêta-actine, TDO2, DSP, Mrg1b et Tyro3 ont été effectuées avec le gyrus denté et des échantillons de la corne d&#39;Ammon, comme décrit précédemment 1. Amorces 5&#39;-CTGGCGAGATCACGATGACG et 5&#39;-AAGCTACGCTGTTGTCTAACC ont été utilisés pour Mrg1b et GCCTCCAAATTGCCCGTCA et 5&#39;-CCAGCACTGGTACATGAGATCA pour Tyro3. L&#39;analyse des microréseaux Expériences biopuces ont été effectués avec des hommes souris de type sauvage et les souris hétérozygotes pour l&#39;alpha-isoforme de calcium / calmoduline-dépendante protéine kinase II (alpha-CaMKII + / - souris), comme décrit précédemment 1. En bref, l&#39;ARN isolé de l&#39;hippocampe tout ou gyrus denté de souris de type sauvage et mutant a été hybridée avec une matrice de souris Génome 430 2.0 (Affymetrix, Santa Clara, CA), et chaque GeneChip a été scannée par un scanner Affymetrix GeneChip 3000 (GCS3000) . L&#39;analyse a été réalisée avec GeneChip Microarray Analysis Suite version 5.0.

<ol><li>Yamasaki, N., Maekawa, M., Kobayashi, K., Kajii, Y., Maeda, J., Soma, M., Takao, K., Tanda, K., Ohira, K., Toyama, K., Kanzaki, K., Fukunaga, K., Sudo, Y., Ichinose, H., Ikeda, M., Iwata, N., Ozaki, N., Suzuki, H., Higuchi, M., Suhara, T., Yuasa, S., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alpha-CaMKII+deficiency+causes+immature+dentate+gyrus%2C+a+novel+candidate+endophenotype+of+psychiatric+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Brain%22%5BJournal%5D)">Alpha-CaMKII deficiency causes immature dentate gyrus, a novel candidate endophenotype of psychiatric disorders.</a> Mol. Brain. 1, 6-6 (2008).</li>
<li>Insausti, A. M., Megias, M., Crespo, D., Cruz-Orive, L. M., Dierssen, M., Vallina, I. F., Insausti, R., Florez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+volume+and+neuronal+number+in+Ts65Dn+mice%3A+a+murine+model+of+Down+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Hippocampal volume and neuronal number in Ts65Dn mice: a murine model of Down syndrome.</a> Neurosci. Lett. 253, 175-175 (1998).</li>
<li>Redwine, J. M., Kosofsky, B., Jacobs, R. E., Games, D., Reilly, J. F., Morrison, J. H., Young, W. G., Bloom, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dentate+gyrus+volume+is+reduced+before+onset+of+plaque+formation+in+PDAPP+mice%3A+a+magnetic+resonance+microscopy+and+stereologic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Dentate gyrus volume is reduced before onset of plaque formation in PDAPP mice: a magnetic resonance microscopy and stereologic analysis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 1381-1381 (2003).</li>
<li>Lein, E. S., Zhao, X., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+a+molecular+atlas+of+the+hippocampus+using+DNA+microarrays+and+high-throughput+in+situ+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Defining a molecular atlas of the hippocampus using DNA microarrays and high-throughput in situ hybridization.</a> J. Neurosci. 24, 3879-3879 (2004).</li>
<li>Matsuo, N., Yamasaki, N., Ohira, K., Takao, K., Toyama, K., Eguchi, M., Yamaguchi, S., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+activity+changes+underlying+the+working+memory+deficit+in+alpha-CaMKII+heterozygous+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neural activity changes underlying the working memory deficit in alpha-CaMKII heterozygous knockout mice.</a> Front. Behav. Neurosci. 3, 20-20 (2009).</li>
<li>Franklin, K. B. J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFranklin%2C+KBJ+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press Inc.. San Diego. (1997).</li>
</ol>

Les expérimentations animales ont été effectuées en conformité avec l&#39;Institut National de Guide de santé pour les soins et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire, et approuvé par le comité de soins des animaux et l&#39;utilisation à Fujita universitaire de santé.

Le gyrus denté occupe environ 25% à 30% du volume de la formation hippocampique 2,3. Il a une composition cellulaire unique et joue un rôle crucial dans les fonctions cérébrales différentes. Par conséquent, des techniques pour isoler le gyrus denté sont utiles pour analyser les événements qui se produisent précisément dans cette région. Ici, nous avons démontré une procédure efficace disséquer le gyrus denté de l&#39;hippocampe de souris adultes et confirmé la précision de la technique. Premièrement, l&#39;étude histologique a révélé que le gyrus denté a été séparé sans contamination par d&#39;autres régions (figure 1), indiquant que d&#39;un échantillon gyrus denté pur peut être préparé. Deuxièmement, nous avons confirmé que le tissu est disséqué gyrus denté en effectuant des PCR en temps réel du gyrus denté de gènes spécifiques, TDO2 et DSP, et Ammon Corne gènes enrichis, et Mrg1b Tyro3 4 (figure 2). Les expressions d&#39;ARNm de TDO2 (p = 0,000023; N = 4 et 4, respectivement) et DSP (p = 0,0000030; N = 4 et 4, respectivement) dans les échantillons gyrus denté ont été détectés à des niveaux bien évidemment plus élevé, alors que Mrg1b (p = 0.000080; N = 4 et 4, respectivement) et Tyro3 (p = 0,00017; N = 4 et 4, respectivement) ont été des niveaux inférieurs, à ceux dans les échantillons de la corne d&#39;Ammon. Les niveaux d&#39;expression de bêta-actine ne diffère pas dans ces échantillons (p = 0,11; N = 4 et 4, respectivement). Ainsi, nous pourrions vérifier si oui ou non le gyrus denté a été précisément disséqué par conducteur tel temps réel simple expériences de PCR. Troisièmement, afin d&#39;évaluer l&#39;utilité de cette méthode de dissection, nous avons comparé le niveau d&#39;expression d&#39;ARNm de l&#39;hippocampe entier avec celle du gyrus denté. Hippocampe entier et gyrus denté obtenu à partir du type sauvage (N = 9 et 4, respectivement) et l&#39;alpha-CaMKII + / - souris (= N 18 et 4, respectivement) ont été traitées pour l&#39;analyse des microréseaux, et pour tous les gènes marqués, le double changement a été calculée en divisant la valeur mutant par la valeur de type sauvage. Les résultats indiquent que les changements dans l&#39;expression des ARNm, en particulier du gyrus denté molécules spécifiques tels que DSP et TDO2, ont été détectés jusqu&#39;à une multiplication par 5 de la sensibilité dans les échantillons gyrus denté par rapport à l&#39;ensemble des échantillons hippocampique (tableau 1). Nous avons précédemment démontré que l&#39;alpha-CaMKII + / - souris présentent des comportements humains liés à des troubles psychiatriques tels que troubles de la mémoire de travail et un rythme exagérée infradien 1,5. Par ailleurs, les caractéristiques morphologiques et électrophysiologiques des neurones dans le gyrus denté des souris mutantes sont étonnamment semblables à celles des neurones immatures gyrus denté chez les rongeurs normaux, indiquant que les neurones dans ces souris mutantes ne parviennent pas à se développer jusqu&#39;à maturité 1. Les immatures l&#39;expression denté gyrus et régulé à la baisse de la DSP et TDO2 ARNm dans l&#39;alpha-CaMKII + / - souris sont compatibles avec la conclusion selon laquelle DSP et TDO2 peuvent être utilisés comme marqueurs de cellules granulaires matures dans le gyrus denté (Ohira et al, non publié. données). Pris ensemble, cette technique de dissection pratique et précis peut être utilisé de manière fiable pour des études axées sur le gyrus denté. Tissus gyrus denté obtenus en utilisant cette méthode est applicable à d&#39;autres types d&#39;analyses aussi bien, y compris les analyses de biologie cellulaire et en protéomique. <img src="/files/ftp_upload/1543/1543fig1.jpg" alt="Figure 1" /> Figure 1. Vérification du gyrus denté isolée par l&#39;étude histologique. Une coupe coronale du cerveau après avoir isolé gyrus denté a été traitée pour la coloration de Nissl (panneau de gauche), et un schéma adapté à partir du cerveau de souris représente la atlas6 approximativement le même niveau de la section représentée dans le panneau de gauche (panneau de droite). Les flèches indiquent les directions de l&#39;insertion de l&#39;aiguille à pointe. La barre d&#39;échelle, de 1 mm. <img src="/files/ftp_upload/1543/1543fig2.jpg" alt="Figure 2" /> Figure 2. Vérification du gyrus denté isolés par PCR en temps réel. Le gyrus denté et de la corne d&#39;Ammon s obtenus à partir de quatre souris de type sauvage ont été traitées pour PCR en temps réel de la bêta-actine, TDO2, DSP, Mrg1b et Tyro3. Les résultats sont présentés en moyenne ± SEM. Pour l&#39;analyse statistique, le test de Student t s a été employé, et les valeurs de p sont suivis: la bêta-actine, p = 0,11; TDO2, p = 0,000023 (** 1); Dsp, p = 0,0000030 (** 2); Mrg1b, p = 0.000080 (** 3); Tyro3, ​​p = 0,00017 (** 4). Tableau 1. . Analyse des microréseaux de l&#39;hippocampe et le gyrus denté ensemble des gènes exprimés différentiellement dans le gyrus dentelé et l&#39;hippocampe ensemble de l&#39;alpha-CaMKII + / - souris ont été déterminés en calculant le pli de changement de celle détectée dans les souris de type sauvage. Les données ont été analysées pour la signification statistique en utilisant le test t de Student s entre type sauvage et l&#39;alpha-CaMKII + / - souris. Parmi les gènes dont l&#39;expression exposées p &lt;0,05 dans lesle gyrus denté de l&#39;alpha-CaMKII + / - souris par rapport à celle des souris de type sauvage, les 50 premiers gènes sont répertoriés. Notez que le nombre d&#39;échantillons pour gyrus denté sont beaucoup moins que ceux pour l&#39;ensemble hippocampe. AffyID, Affymetrix sonde identifiant; CKII, l&#39;alpha-CaMKII + / - souris; WT, souris de type sauvage. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="2"> Denté gyrus (p &lt;0,05) WT: n = 4, CKII + / -: n = 4 </td><td></td><td colspan="2"> Hippocampe entier WT: n = 9, CKII + / -: n = 18 </td></tr><tr><td> Titre Gene </td><td> Genebank </td><td> AffyID </td><td></td><td> Pliez le changement </td><td> valeur p </td><td></td><td> Pliez le changement </td><td> valeur p </td></tr><tr><td> desmoplakine </td><td> AV297961 </td><td> 1435494_s_at </td><td></td><td> 0,011018913 </td><td> 7.02694E-06 </td><td></td><td> 0,037021003 </td><td> 1.86126E-13 </td></tr><tr><td> desmoplakine </td><td> AV297961 </td><td> 1435493_at </td><td></td><td> 0,014369734 </td><td> 7.86747E-06 </td><td></td><td> 0.04232106 </td><td> 1.00579E-12 </td></tr><tr><td> tryptophane 2,3-dioxygénase </td><td> AI098840 </td><td> 1419093_at </td><td></td><td> 0,020986484 </td><td> 5.23546E-09 </td><td></td><td> 0,101037776 </td><td> 4.14823E-13 </td></tr><tr><td> nephronectin </td><td> AA223007 </td><td> 1452106_at </td><td></td><td> 0,075479901 </td><td> 1.05191E-08 </td><td></td><td> 0,234001154 </td><td> 1.66301E-15 </td></tr><tr><td> nephronectin </td><td> AA223007 </td><td> 1452107_s_at </td><td></td><td> 0,079457767 </td><td> 1.40433E-07 </td><td></td><td> 0,177974715 </td><td> 3.9758E-12 </td></tr><tr><td> thyrotropine libérant des récepteurs hormonaux </td><td> M59811 </td><td> 1449571_at </td><td></td><td> 0,103105815 </td><td> 0,003093796 </td><td></td><td> 0,801412732 </td><td> 0,283994361 </td></tr><tr><td> ryanodine récepteurs 1, le muscle squelettique </td><td> X83932 </td><td> 1427306_at </td><td></td><td> 0,104825517 </td><td> 3.38513E-07 </td><td></td><td> 0,650685017 </td><td> 0,000308462 </td></tr><tr><td> ignorant hélice boucle hélice 1 </td><td> NM_010916 </td><td> 1419533_at </td><td></td><td> 9.431896 </td><td> 6.7979E-06 </td><td></td><td> 4,078815314 </td><td> 5.27E-11 </td></tr><tr><td> COPINE membre de la famille IX </td><td> BB274531 </td><td> 1454653_at </td><td></td><td> 9.159157 </td><td> 7.99492E-06 </td><td></td><td> 1,797304153 </td><td> 0,000296375 </td></tr><tr><td> doublecortine-like kinase 3 </td><td> BB326709 </td><td> 1436532_at </td><td></td><td> 0,109336662 </td><td> 1.95278E-07 </td><td></td><td> 0.56697229 </td><td> 2.62633E-08 </td></tr><tr><td> calpaïne 3 </td><td> AF127766 </td><td> 1426043_a_at </td><td></td><td> 0,111269769 </td><td> 8.07053E-06 </td><td></td><td> 0,370956608 </td><td> 2.04421E-14 </td></tr><tr><td> Adulte striatum hommes corpus d&#39;ADNc, RIKEN pleine longueur enrichi la bibliothèque, clone: ​​C030023B07 produit: inclassable, pleine séquence de l&#39;insert </td><td> BB357628 </td><td> 1460043_at </td><td></td><td> 0,118712341 </td><td> 6.16926E-07 </td><td></td><td> 0,682339204 </td><td> 2.33001E-06 </td></tr><tr><td> collagène et la fixation du calcium FEM domaines 1 </td><td> AV264768 </td><td> 1437385_at </td><td></td><td> 0,124043978 </td><td> 3.65669E-05 </td><td></td><td> 0,488394112 </td><td> 4.05538E-06 </td></tr><tr><td> bêta-amyloïde (A4) précurseur de liaison aux protéines, la famille A, membre 2 de liaison aux protéines </td><td> AK013520 </td><td> 1431946_a_at </td><td></td><td> 7.7986307 </td><td> 1.2098E-06 </td><td></td><td> 2,099164713 </td><td> 1.67047E-06 </td></tr><tr><td> calbindine 28K </td><td> BB177770 </td><td> 1456934_at </td><td></td><td> 0,130255444 </td><td> 3.32186E-06 </td><td></td><td> 0,572605751 </td><td> 1.99157E-10 </td></tr><tr><td> Le locus transcrit </td><td> AV328597 </td><td> 1443322_at </td><td></td><td> 0,133290835 </td><td> 5.43583E-06 </td><td></td><td> 0,562767164 </td><td> 7.56544E-06 </td></tr><tr><td> neuropeptide Y Y2 récepteurs </td><td> NM_008731 </td><td> 1417489_at </td><td></td><td> 0,135319609 </td><td> 0,000113407 </td><td></td><td> 0,781498474 </td><td> 0.00394504 </td></tr><tr><td> protéine Ras responsive element binding 1 </td><td> BE197381 </td><td> 1428657_at </td><td></td><td> 0,138235114 </td><td> 7.93691E-07 </td><td></td><td> 0,651220705 </td><td> 2.94209E-05 </td></tr><tr><td> la ligne neurotrophique dérivé des cellules gliales famille des récepteurs des facteurs alpha 2 </td><td> BB284482 </td><td> 1433716_x_at </td><td></td><td> 0,139062563 </td><td> 2.35371E-06 </td><td></td><td> 0,669544709 </td><td> 0,000214146 </td></tr><tr><td> préproenképhaline 1 </td><td> M13227 </td><td> 1427038_at </td><td></td><td> 6.9850435 </td><td> 2.39074E-08 </td><td></td><td> 1,766018828 </td><td> 0,000250501 </td></tr><tr><td> RIKEN gène ADNc 1810010H24 </td><td> BI729991 </td><td> 1428809_at </td><td></td><td> 6.8658915 </td><td> 1.88516E-05 </td><td></td><td> 2.77573142 </td><td> 6.81865E-09 </td></tr><tr><td> ryanodine récepteurs 1, le muscle squelettique </td><td> BG793713 </td><td> 1457347_at </td><td></td><td> 0,151364292 </td><td> 3.35612E-05 </td><td></td><td> 0,503144617 </td><td> 4.32907E-05 </td></tr><tr><td> protocadhérine 21 </td><td> NM_130878 </td><td> 1418304_at </td><td></td><td> 0,152671849 </td><td> 8.57783E-06 </td><td></td><td> 0,670714726 </td><td> 1.56309E-05 </td></tr><tr><td> homologue cornichon 3 (Drosophila) </td><td> NM_028408 </td><td> 1419517_at </td><td></td><td> 0,153724144 </td><td> 8.90755E-06 </td><td></td><td> 0.95780695 </td><td> 0,661055608 </td></tr><tr><td> harakiri, BCL2 protéines en interaction (ne contient que BH3 domaine) </td><td> BQ175572 </td><td> 1439854_at </td><td></td><td> 0,154284407 </td><td> 2.0118E-05 </td><td></td><td> 0.56516812 </td><td> 4.86925E-09 </td></tr><tr><td> glucides (N-acétyl 4-0) sulfotransférase 9 </td><td> AK017407 </td><td> 1431897_at </td><td></td><td> 0,155238951 </td><td> 5.37423E-06 </td><td></td><td> 1.14910007 </td><td> 0,215637733 </td></tr><tr><td> calpaïne 3 </td><td> AI323605 </td><td> 1433681_x_at </td><td></td><td> 0,160871988 </td><td> 1.07655E-05 </td><td></td><td> 0,477164757 </td><td> 1.33753E-11 </td></tr><tr><td> doigt de zinc, de domaine contenant 5 CCHC </td><td> BQ126004 </td><td> 1437355_at </td><td></td><td> 0,161812078 </td><td> 3.08262E-06 </td><td></td><td> 0,421252632 </td><td> 0.01152969 </td></tr><tr><td> loricrine </td><td> NM_008508 </td><td> 1448745_s_at </td><td></td><td> 0,165129967 </td><td> 1.86362E-05 </td><td></td><td> 0,639733409 </td><td> 0,000729772 </td></tr><tr><td> spondine 1, (f-spondine) des protéines de la matrice extracellulaire </td><td> BC020531 </td><td> 1451342_at </td><td></td><td> 0,168035879 </td><td> 6.67867E-07 </td><td></td><td> 0,821042412 </td><td> 0,023650765 </td></tr><tr><td> RIKEN ADNc du gène A930035E12 </td><td> AV348640 </td><td> 1429906_at </td><td></td><td> 5.9086795 </td><td> 1.747E-07 </td><td></td><td> 1,470383201 </td><td> 0,104085454 </td></tr></tbody><tbody><tr><td> BB247294 RIKEN pleine longueur enrichi, 7 jours cervelet nouveau-né Mus musculus clone d&#39;ADNc A730018G18 3 &#39;, la séquence d&#39;ARNm. </td><td> BB247294 </td><td> 1447907_x_at </td><td></td><td> 5.9047494 </td><td> 1.04931E-05 </td><td></td><td> 1,968147585 </td><td> 0.00010636 </td></tr><tr><td> Domaine FERM contenant 3 </td><td> BB099015 </td><td> 1437075_at </td><td></td><td> 5.860216 </td><td> 0,000345581 </td><td></td><td> 2,780297178 </td><td> 1.83072E-06 </td></tr><tr><td&gt; Neuronale pentraxine 2 / / / protéine hypothétique LOC100044234 </td><td> NM_016789 </td><td> 1420720_at </td><td></td><td> 5.7568517 </td><td> 1.34227E-06 </td><td></td><td> 2,652516957 </td><td> 0,000206279 </td></tr><tr><td> Séquences transcrites </td><td> BG076361 </td><td> 1460101_at </td><td></td><td> 5.657735 </td><td> 2.5015E-06 </td><td></td><td> 1,296248831 </td><td> 0.22870031 </td></tr><tr><td> spondine 1, (f-spondine) des protéines de la matrice extracellulaire </td><td> BC020531 </td><td> 1424415_s_at </td><td></td><td> 0.17783576 </td><td> 1.01658E-06 </td><td></td><td> 0,836181248 </td><td> 0,001380141 </td></tr><tr><td> calbindine 28K </td><td> BB246032 </td><td> 1448738_at </td><td></td><td> 0,180317904 </td><td> 1.35961E-05 </td><td></td><td> 0,647334052 </td><td> 4.12268E-09 </td></tr><tr><td> MARCKS-like 1 </td><td> AV110584 </td><td> 1437226_x_at </td><td></td><td> 0,186235935 </td><td> 1.47067E-06 </td><td></td><td> 0,499291387 </td><td> 2.34984E-08 </td></tr><tr><td> matrilin 2 </td><td> BB338441 </td><td> 1455978_a_at </td><td></td><td> 0,187783528 </td><td> 6.19122E-05 </td><td></td><td> 0.8967688 </td><td> 0,282337853 </td></tr><tr><td> matrilin 2 </td><td> BC005429 </td><td> 1419442_at </td><td></td><td> 0,188195795 </td><td> 0,000105295 </td><td></td><td> 0,915528892 </td><td> 0.35282097 </td></tr><tr><td> spondine 1, (f-spondine) des protéines de la matrice extracellulaire </td><td> BQ175871 </td><td> 1442613_at </td><td></td><td> 0,189956563 </td><td> 9.41195E-06 </td><td></td><td> 0,861033222 </td><td> 0.1394266 </td></tr><tr><td> arrestine 3, la rétine </td><td> NM_133205 </td><td> 1450329_a_at </td><td></td><td> 5.2130346 </td><td> 2.90599E-05 </td><td></td><td> 3,944218329 </td><td> 1.07437E-07 </td></tr><tr><td> RIKEN ADNc du gène A330050F15 </td><td> AV325555 </td><td> 1457558_at </td><td></td><td> 0.19186781 </td><td> 0,000119342 </td><td></td><td> 0,660282035 </td><td> 2.47342E-05 </td></tr><tr><td> contactin 3 </td><td> BB559510 </td><td> 1438628_x_at </td><td></td><td> 0,194404608 </td><td> 4.08641E-07 </td><td></td><td> 0,918742591 </td><td> 0,022545297 </td></tr><tr><td> calbindine 28K </td><td> BB246032 </td><td> 1417504_at </td><td></td><td> 0,196381321 </td><td> 2.24182E-05 </td><td></td><td> 0,619305124 </td><td> 3.6222E-06 </td></tr><tr><td> libération de la gastrine peptide </td><td> BC024515 </td><td> 1424525_at </td><td></td><td> 4.9436426 </td><td> 3.00588E-05 </td><td></td><td> 2,752845903 </td><td> 5.72954E-07 </td></tr><tr><td> Sortiline liés de domaine contenant des récepteurs VPS10 3 </td><td> AK018111 </td><td> 1425111_at </td><td></td><td> 4.885766 </td><td> 1.03645E-05 </td><td></td><td> 1.29051599 </td><td> 0,029733649 </td></tr><tr><td> récepteur de la dopamine D1A </td><td> BE957273 </td><td> 1455629_at </td><td></td><td> 4.869493 </td><td> 3.77525E-05 </td><td></td><td> 1,815881979 </td><td> 0,000516498 </td></tr><tr><td> proprotéine convertase subtilisine / Kexin type 5 </td><td> BB241731 </td><td> 1437339_s_at </td><td></td><td> 0,210528027 </td><td> 7.83039E-05 </td><td></td><td> 0,574126078 </td><td> 9.15496E-05 </td></tr></tbody><tbody><tr><td> récepteurs d&#39;interleukine 1, de type I </td><td> NM_008362 </td><td> 1448950_at </td><td></td><td> 0,210572243 </td><td> 9.64524E-06 </td><td></td><td> 0,241135352 </td><td> 2.79816E-08 </td></tr></tbody></table>

dissection de l&#39;hippocampe gyrus denté de souris adulte

Dissection of Hippocampal Dentate Gyrus from Adult Mouse

L&#39;hippocampe est l&#39;une des zones les plus étudiées dans le cerveau en raison de son rôle fonctionnel important dans le traitement de la mémoire et l&#39;apprentissage, sa remarquable plasticité des cellules neuronales, et son implication dans l&#39;épilepsie, les maladies neurodégénératives et les troubles psychiatriques. L&#39;hippocampe est composé de régions distinctes; le gyrus denté, qui comprend principalement les neurones granulaires, et la corne d&#39;Ammon, qui comprend principalement des neurones pyramidaux, et les deux régions sont reliées par deux circuits anatomiques et fonctionnelles. Beaucoup de différents ARNm et des protéines sont exprimées sélectivement dans le gyrus denté, et le gyrus denté est un site de la neurogenèse adulte, c&#39;est de nouveaux neurones sont continuellement générés dans le gyrus denté pour adultes. Afin d&#39;étudier l&#39;expression des ARNm et des protéines spécifiques pour le gyrus denté, microdissection laser est souvent utilisé. Cette méthode a toutefois quelques limitations, comme la nécessité d&#39;appareils spéciaux et des procédures de manipulation compliquée. Dans ce protocole d&#39;enregistrements vidéo, nous démontrons une technique de dissection pour enlever le gyrus denté de souris adulte sous un stéréomicroscope. Échantillons gyrus denté préparés en utilisant cette technique sont adaptés à toute épreuve, y compris la transcriptomique, la protéomique, et les analyses de biologie cellulaire. Nous avons confirmé que le tissu est disséqué gyrus denté en effectuant des PCR en temps réel du gyrus denté de gènes spécifiques, le tryptophane 2,3-dioxygénase (TDO2) et desmoplakine (DSP), et d&#39;Ammon Corne gènes enrichis, 1b du gène Meis-connexes (Mrg1b ) et TYRO3 protéine tyrosine kinase 3 (Tyro3). Les expressions des ARNm TDO2 et DSP dans les échantillons gyrus denté ont été détectés à des niveaux plus élevés de toute évidence, alors que Mrg1b et Tyro3 ont des niveaux plus bas que ceux dans les échantillons de la corne d&#39;Ammon. Afin de démontrer l&#39;avantage de cette méthode, nous avons effectué une analyse des microréseaux d&#39;ADN en utilisant des échantillons de l&#39;hippocampe et le gyrus denté entière. L&#39;expression de l&#39;ARNm du TDO2 et DSP, qui sont exprimés de manière sélective dans le gyrus denté, dans l&#39;hippocampe ensemble de l&#39;alpha-CaMKII + / - souris, exposées 0,037 et 0,10 fois les changements par rapport à celle des souris de type sauvage, respectivement. Dans le gyrus denté isolée, cependant, ces expressions exposées 0,011 et 0,021 fois changements par rapport à celle des souris de type sauvage, ce qui démontre que les changements d&#39;expression génique dans le gyrus denté peuvent être détectés avec une plus grande sensibilité. Pris ensemble, cette technique de dissection pratique et précis peut être utilisé de manière fiable pour des études axées sur le gyrus denté.

Une technique de dissection de l&#39;enlèvement du gyrus denté de souris adulte sous un stéréomicroscope a été démontrée dans ce protocole d&#39;enregistrements vidéo.

Dissection de l&#39;hippocampe gyrus denté de souris adulte

L'hippocampe est l'une des zones du cerveau les plus étudiées en raison de son rôle fonctionnel important dans le traitement de la mémoire et l'apprentissage, son...

Le hippocampe est l'une des régions cérébrales les plus étudiées en raison de son rôle fonctionnel important dans le traitement de la mémoire. Sa neuroplasticité remarquable et son implication dans l'épilepsie, les maladies neurodégénératives et les troubles psychologiques en font un sujet d'intérêt majeur. L'hippocampe est composé de régions distinctes : le gyrus dentelé, le CA1 et le CA3.Le gyrus DTO est un site de neurogenèse et de nombreuses recherches peuvent inclure votre intérêt pour cette région. Dans ce protocole vidéo enregistré, nous présentons une technique de dissection permettant de prélever les gels DTO entiers chez l'adulte sous microscope stérile. Cette technique nous permet d'isoler des gels DTO entiers et intacts.La technique est très utile car une grande quantité de protéines, de méso et de neurones provenant des échantillons de gel entérique peut être obtenue et utilisée pour tout type d'analyse, y compris les analyses transcriptomiques, protéomiques et de biologie CE. Voici le Dr Gil. Il démontre ici son excellente technique de dissection dans cette vidéo.Il, j'ai regardé un film et j'ai été impressionné par la dextérité et la fluidité avec lesquelles vous disséquez le gyrus. Vous possédez la technique d'un expert. Combien de fois avez-vous dû pratiquer cette technique pour atteindre ce niveau de compétence ?J'ai réalisé plus de 100 dissections de GY vintage selon cette technique, mais il m'a probablement fallu seulement 20 dissections pour atteindre ce niveau de maîtrise. Pensez-vous que quiconque s'intéressant à cette technique puisse acquérir cette compétence ? Oui, je le pense.Mais vous devez avoir un bon contrôle de vos mains et de vos doigts. Y a-t-il des astuces que vous pouvez nous donner ou des éléments auxquels nous devrions faire attention lors de l'exécution de cette technique ? Oui. Lors du retrait du dia, il est très important de ne pas endommager l'hippocampe ou la zone environnante.Une telle blessure rendra difficile l'identification des limites entre la ténite et la position d'origine du bras. Conserver ces limites chez ce patient est crucial. Merci. Ici.Très bien, commençons. Placez le cerveau dans du HighCo.PVS. Coupez le cerveau selon le plan longitudinal al.Coupez ces lésions en arrière du laden. Placez le penia médial cellulaire côté opposé vers le haut et retirez les plusieurs. C'est le côté mesuré de l'hippocampe.Vous pouvez observer la limite de Ditis et de la région CS trois. Insérez une aiguille sur chaque côté de Ditis et faites glisser l'aiguille le long de l'axe temporal septal jusqu'à ce que l'hippocampe soit isolé.I.

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Cet article décrit les procédures pour la préparation de coupes d'hippocampe de rats et de souris transgéniques pour l'étude des altérations synaptiques associés au vieillissement du cerveau et liée à l'âge des maladies neurodégénératives comme la maladie d'Alzheimer.

Préparation des coupes d&#39;hippocampe aiguë chez des rats et des souris transgéniques pour l&#39;étude des altérations synaptiques au cours du vieillissement et de l&#39;amylose pathologie

Cette vidéo montre l’enregistrement de l’activité du réseau neuronal rythmique, également connue sous le nom d’oscillations thêta, dans un hippocampe isolé. Des électrodes sont insérées dans diverses couches et positions spatiales pour détecter et analyser les oscillations thêta. Cela montre les compositions neuronales uniques et la connectivité du réseau neuronal à travers les différentes couches de l’hippocampe.

Enregistrement in vitro des oscillations thêta dans l’hippocampe de souris

Cet article présente une méthodologie complète pour préparer et...

Amélioration de la préparation et la conservation de l&#39;hippocampe Tranches de souris pour un enregistrement très stable et reproductible de potentialisation à long terme

Nous décrivons deux méthodes de visualisation et de quantification de l’arborisation dendritique dans l’hippocampe de modèles murins : l’imagerie en temps réel et l’imagerie en profondeur de champ étendue. Alors que la première méthode permet un traçage topographique sophistiqué et une quantification de l’étendue de la ramification, la seconde permet une visualisation rapide de l’arbre dendritique.

Évaluation de l&#39;arborisation dendritique dans le gyrus denté de la région de l&#39;hippocampe chez la souris

Un protocole de génération d’un système de co-culture composé de neurones dérivés de cellules souches pluripotentes induites (iPSC), de neurones corticaux primaires et d’astrocytes est décrit. Ce système de co-culture permet de détecter la formation de contacts et de circuits synaptiques entre de nouveaux neurones dérivés d’iPSC et des neurones corticaux préexistants exprimant la channelrhodopsine-2.

Une approche pour l&#39;évaluation optogénétiques formation des connexions neuronales dans un système de co-culture

Cette méthode décrit une préparation chronique qui permet un accès optique à l'hippocampe de souris vivantes. Cette préparation peut être utilisée pour effectuer l'imagerie optique longitudinale de la plasticité structurale neuronale et de la plasticité cellulaire suscitée par l'activité sur une période de plusieurs semaines.

Imagerie longitudinale à deux photons de l'hippocampe dorsal CA1 chez les souris vivantes

Il s’agit d’un protocole pour la préparation des tranches aiguës de l’adulte et le vieillissement hippocampi souris qui tire parti de la perfusion transcardique et la coupe de tranches avec la glace-froid NMDG-aCSF pour réduire les dommages hypoxiques au tissu. Les tranches qui en résultent restent en bonne santé pendant de nombreuses heures et conviennent aux corrections à long terme et aux enregistrements sur le terrain.

Minimiser l’hypoxie dans les tranches hippocampales des souris adultes et vieillissantes

Cet article vise à décrire un protocole systématique pour obtenir des tranches horizontales de cerveau hippocampal chez la souris. L’objectif de cette méthodologie est de préserver l’intégrité des voies de fibre hippocampal, telles que le chemin perforant et le tractus de fibre moussée pour évaluer les processus neurologiques liés au gyrus dentate.

Tranches hippocampiques horizontales du cerveau de souris

Nous présentons un protocole pour préparer des tranches aiguës de l’hippocampe dorsale-intermédiaire des souris. Nous comparons cette préparation transversale avec le tranchage coronal en termes de qualité des enregistrements et de préservation des caractéristiques morphologiques des neurones enregistrés.

Préparation de tranches aiguës de l’hippocampe dorsal pour l’enregistrement des cellules entières et la reconstruction neuronale dans le gyrus bosselé de souris adultes

Ici, nous démontrons comment combiner la transfection des neurones primaires de rongeurs de l’hippocampe avec l’imagerie confocale de cellules vivantes pour analyser les effets induits par les protéines pathologiques sur le transport axonal et identifier les voies mécanistes médiant ces effets.

Utilisation de l’imagerie de cellules vivantes pour mesurer les effets de protéines pathologiques sur le transport axonal dans les neurones primaires de l’hippocampe

Découvrez la dissection du gyrus denté de souris adulte sous stéréomicroscope pour les études en neurosciences. Cette technique permet d'obtenir des échantillons intacts pour analyses transcriptomiques et protéomiques.

Dissection de l'hippocampe gyrus denté de souris adulte

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