Name: Etudier lagressivité chez les drosophiles (mouches des fruits) (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 6 s
Description: Découvrez une méthode pour étudier l'agressivité chez Drosophila melanogaster en configurant des combats contrôlés. Cette approche utilise des vials d'isolement pour observer les comportements agressifs en neurobiologie comportementale.

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1. Assemblage des parois de la chambre <ol><li> Prenez deux lames de verre ordinaire, marquer le milieu des deux bords et en utilisant une règle droite tranchant comme un guide, le score du verre avec le tailleur de diamant. </li><li> Faites glisser le tailleur de diamant en arrière à quelques reprises jusqu&#39;à ce que vous entendez un bruit de grattage. </li><li> Laver le verre, et le tenant à deux serviettes en papier sur un récipient de verre brisé, appliquez une légère pression à proximité de la ligne a marqué avec le côté marqué face à vous de briser la lame en deux moitiés. </li><li> Appliquez généreusement l&#39;adhésif de verre le long d&#39;un bord d&#39;un morceau de verre et pousser un second morceau de verre contre l&#39;adhésif à un angle droit de la première pièce. Placer sur une surface plane (aluminium, papier ciré ou de papier ordinaire) et permettent de mettre au moins une heure. </li><li> Après une heure, répéter l&#39;application de l&#39;étape adhésif pour former une chambre carrée et laisser durcir pendant la nuit. <img src="/files/ftp_upload/old/155_2008_9_3_3/155_figure-01.png" alt="Figure 1" width="358" height="266" /> </li></ol> 2. Placer les murs dans une boîte de Pétri <ol><li> Prenez le sommet d&#39;une boîte de Petri et de remplissage à une profondeur d&#39;au moins 5 mm avec une solution chauffée de 2% d&#39;agarose (micro-ondes de l&#39;agarose dans de l&#39;eau déminéralisée jusqu&#39;à ce qu&#39;il se dissout complètement). </li><li> Attendez quelques minutes, mais tout en restant dissous, placer les murs de la chambre dans le centre du plat. Prenez le fond de la boîte de Pétri, placez-le côté bas en haut. En utilisant une aiguille chauffée à la flamme droite de dissection, faire une série de petits trous (&gt; 1mm) dans le centre de la parabole pour la ventilation. Faire un trou plus grand (diamètre ~ 4 mm) légèrement sur le côté pour l&#39;introduction de mouches dans la chambre. Placer un morceau de ruban d&#39;étiquettes amovibles sur le grand trou. <img src="/files/ftp_upload/old/155_2008_9_3_4/155_figure-02.png" alt="Figure 2" width="447" height="207" /> <img src="/files/ftp_upload/old/155_2008_9_3_5/155_figure-03.png" alt="Figure 3" width="328" height="211" /> </li></ol> 3. Faire la coupe des aliments <ol><li> Chauffer un flacon de nourriture volée au point où la nourriture est fondu. Utiliser une pipette Pasteur pour transférer la nourriture à un flacon à scintillation fermetures de le remplir pour former une surface plane au sommet. Soyez prudent pour éviter les bulles d&#39;air et laisser refroidir. </li><li> Faire la pâte de levure fraîche par broyage d&#39;une petite quantité de levure sèche et quelques gouttes d&#39;eau dans un mortier et un pilon. Ajouter plus de levure ou de l&#39;eau jusqu&#39;à la consistance est assez épaisse pour permettre à une petite goutte visibles pour être capté par un cure-dent et appliquée au centre de la surface de la nourriture. </li><li> Placer le flacon de nourriture dans le centre de la chambre et placez au fond de la boîte de Pétri, inversé de sorte que les côtés sont en place et de ne pas obscurcir la vue, au-dessus de la chambre. Introduire deux vieilles mouches 3-5 jours par aspiration dans la chambre par le plus grand trou dans le haut. Couvrir le trou avec du ruban adhésif et placez un morceau de papier filtre noir avec une coupe de 2 cm trou dedans dans le plat dessus. </li><li> Placez une lampe de bureau au-dessus de la chambre, assez loin qu&#39;il ne sera pas la chaleur de la chambre, et placé de sorte qu&#39;il s&#39;allume la surface des aliments. L&#39;assemblée entière devrait idéalement être placé dans un environnement à forte humidité et une température de 22-25 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/155_2008_9_3_6/155_figure-04.png" alt="Figure 4" width="284" height="212" /> </li></ol> 4. Commencez filmer à travers la paroi avant de la chambre où les mouches sont sur le foodsurface.

etudier l&#39;agressivité chez les drosophiles (mouches des fruits)

Studying Aggression in Drosophila (fruit flies)

L&#39;agression est un comportement inné qui a évolué dans le cadre de la défense ou l&#39;obtention de ressources. Ce comportement social complexe est influencé par des facteurs génétiques, hormonaux et environnementaux. Dans de nombreux organismes, l&#39;agressivité est essentielle à la survie, mais l&#39;agression contrôle et de répression dans des contextes distincts est également devenu plus important. Ces dernières années, les invertébrés sont devenus de plus en plus utiles comme systèmes modèles pour étudier la base génétique et les systèmes biologiques des comportements sociaux complexes. Ceci est dû en partie au répertoire diversifié de comportements manifestés par ces organismes. Dans la vidéo qui l&#39;accompagne, nous décrivons une méthode pour analyser l&#39;agressivité chez la drosophile dont la conception englobe importantes contraintes éco-éthologiques. Détails inclure des mesures pour: faire une chambre de combat; isoler et de peinture mouches; ajoutant mouches dans la chambre de combattre, et se bat enregistrement vidéo. Cette approche est actuellement utilisée pour identifier les gènes candidats importants dans l&#39;agression et à l&#39;élaboration du circuit neuronal qui sous-tend la sortie d&#39;agression et d&#39;autres comportements sociaux.

Etudier l&#39;agressivité chez les drosophiles (mouches des fruits)

L'agression est un comportement inné qui a évolué dans le cadre de la défense ou de l'obtention de ressources. Ce comportement social complexe est influencé par...

Je m'appelle Sarah Ertel et je suis postdoctorante dans le laboratoire d'Ed Kravitz au sein du Département de neurobiologie de la faculté de médecine de Harvard. Je m'appelle Sibu. Je suis étudiant en médecine en provenance d'Allemagne et je fais un stage de recherche ici au laboratoire Kravitz.Et nous souhaitons vous montrer comment nous organisons des combats et étudions l'agressivité chez les drosophiles. La première étape consiste à préparer des flacons d'isolement, ce qui implique de faire fondre au micro-ondes le milieu nutritif pour mouches, puis d'ajouter 1,5&nbsp;mL de ce milieu dans un tube de culture une fois qu'il a durci. Ensuite, on le ferme avec du coton.La première étape consiste à obtenir des mouches socialement naïves, des mouches qui n'ont vu aucune autre mouche. Pour ce faire, nous prélevons des puces au stade tardif des souches de mouches qui nous intéressent, puis nous retirons soigneusement les puces du flacon à l’aide de pinces. Prenez le flacon d'isolement préparé, retirez le coton et placez délicatement le puy à l'intérieur, refermez-le et étiquetez le flacon. Ces puy sont replacés dans l'incubateur à cycle jour-nuit avec contrôle climatique. Le lendemain, nous vérifions s'ils se sont refermés, puis nous notons la date à laquelle les mouches se sont fermées.Ensuite, nous les élevons pendant trois à cinq jours, et durant cette période, nous appliquons de la peinture sur le dos de l'abdomen des mouches afin de pouvoir les identifier. Nous fabriquons maintenant des chambres pour les combats proprement dits. Pour cela, nous utilisons deux simples lames de microscope, nous mesurons le milieu et traçons des marques à l’aide d’une pointe de cutter en diamant, griffant la surface, puis nous cherchons un bord et la lame de microscope doit se casser facilement en deux. D'accord.Ensuite, nous collons les bords des lames ensemble avec de la colle adhésive. Puis les deux moitiés sont collées ensemble pour former une boîte. Nous pouvons la nettoyer avec de l'éthanol à 70 %, puis un peu d'eau pour éliminer les résidus de doigts.Remplissez le fond de la chambre avec de l'agarose à 1 % et placez la chambre à l'intérieur. Cela fournit de l'humidité aux mouches. Ensuite, nous voulons donner aux mouches quelque chose pour laquelle se battre.Ainsi, même si la taille réelle de la chambre peut être considérée comme un territoire, nous fournissons de la nourriture aux mouches. Et nous plaçons cette nourriture dans un flacon de scintillation. Cela confère un niveau supplémentaire de territorialité possible, que certaines mouches pourraient être amenées à défendre.Je vais donc prendre la nourriture fraîchement chauffée au micro-ondes et la verser dans les godets alimentaires, qui sont en réalité des bouchons de scintillation, et qui serviront d'arène de combat où les mouches se battront ultérieurement. Il est important de former une légère convexité afin de pouvoir observer toute la surface. Vous devez également éviter la formation de bulles d'air, car elles gêneraient les mouches lorsqu'elles marchent sur le godet alimentaire, ce dernier devant justement attirer les mouches.Nous ajouterons également une goutte de pâte de levure au centre du godet alimentaire. Et nous devons d'abord préparer la pâte de levure. Nous prenons donc de la pâte de levure vivante, nous la mettons dans un godet alimentaire, puis nous ajoutons une goutte d'eau et nous mélangeons jusqu'à l'obtention d'une pâte.Une fois que les godets ont refroidi, vous placez la pâte de levure, ou simplement une petite goutte, au centre du godet. Nous sommes actuellement dans la salle de comportement, l'une de nos deux salles dédiées à ce type d'expérimentation. Cette pièce est entièrement obscure lorsque toutes les lumières sont éteintes, et elle est contrôlée en humidité et en température.Nous maintenons donc la température à 25 degrés et essayons de garder l'humidité supérieure à 40 % afin de contrôler les mouches dans autant de conditions que possible. Ce que je vais faire maintenant, c'est installer les combats. Nous avons apporté les godets de nourriture que nous avions préparés précédemment, et je vais les insérer dans ces chambres.Tentez de les placer au milieu de la chambre. Nous remettons le couvercle. Bon. Et je vais utiliser cet aspirateur pour aspirer les mouches, exactement une paire de mouches.Je vais donc prendre deux mouches, les aspirer ici, puis les insérer dans la chambre. C'est ce que je vais faire. Maintenant, je tiens le flacon de cette manière parce que les mouches ont tendance à remonter contre la gravité et vers la lumière, elles ont donc naturellement tendance à aller vers le haut.Il est donc plus facile pour moi de les attraper lorsque j'enlève le coton. Comme vous pouvez le voir, j'ai actuellement les deux mouches dans l'entonnoir. Je dois également m'assurer que, puisqu'il s'agit de mouches peintes, je choisisse une mouche peinte et une mouche non peinte.Ou si nous utilisons deux couleurs, un individu peint d'une couleur et un autre d'une couleur différente, mais ayant le même génotype. J'insère maintenant les deux dans la chambre prévue à cet effet. J'enlève la bille de cire.Il y a un petit trou par lequel je vais insérer les mouches, et j'essaie de positionner le couvercle de manière à ce que les mouches ne puissent pas s'échapper lorsque je tape. Elles tombent un peu, puis je souffle doucement, juste assez pour ne pas devoir les souffler trop fort, ce qui les perturberait. Elles mettent entre trois et disons 40 minutes à se calmer et à examiner l'environnement dans la chambre.Ensuite, ils commenceront à occuper la coupelle de nourriture et le combat débutera. Maintenant, je vais prendre toute la chambre et la placer devant la caméra, puis j’ajusterai la hauteur afin d’obtenir un angle légèrement incliné sur la coupelle de nourriture, permettant ainsi de voir l’intégralité de celle-ci. Toute la coupelle de nourriture doit être nette.Et la pièce dans laquelle ces tests d'agression sont mis en place est importante. Il s'agit d'une pièce isolée, maintenue à l'abri du passage et du bruit. Elle est conservée à 25 degrés et nous essayons de maintenir l'humidité entre 45 et 55 % afin de garder les mouches en bonne santé et en bonne condition dans cette situation.Et nous atténuons également la lumière du plafonnier afin que la lumière provenant du godet alimentaire constitue aussi un attrait pour les mouches. L'utilisation du DFA comme système modèle et de ce type de montage nous permet d'observer non seulement l'intensité de l'agressivité, mais aussi les schémas spécifiques d'agression que nous constatons. Les comportements spécifiques qui nous intéressent particulièrement concernent la manière dont le cerveau est connecté pendant le développement, puis comment cela se manifeste chez l'adulte qui n'a pas appris ces comportements.Ils sortent donc immédiatement dès qu'ils commencent à interagir avec les autres mouches. Ils savent comment bondir, ils savent comment être agressifs. Nous voulons donc savoir comment ces comportements sont intégrés dans le système nerveux des mouches et comment ils sont ensuite contrôlés.

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Biologie

L’agression est un comportement inné et l’expérience de combat antérieure affecte la stratégie de combat et l’issue des combats ultérieurs chez les mouches. Cette vidéo décrit un test utilisé pour étudier le comportement agressif de la drosophile. L'exemple de protocole présente le test effectué dans une configuration qui élimine la manipulation des mouches et réduit donc le stress des animaux, qui aurait autrement un impact sur les performances des sujets.

drosophile Essai d’agression : une méthode pour tester la plasticité comportementale chez les mouches

Dans cet article, vidéo, nous décrivons un test automatisé pour mesurer l'effet de la faim ou de satiété sur le comportement dépend olfactif de recherche de nourriture dans le fruit de mouche adulte Drosophila melanogaster.

Une simple mouche Essai de comportement alimentaire dans Drosophila

Ici, nous présentons un protocole pour quantifier l’évitement des individus stressés. Ce paradigme est à la fois puissant et facile à utiliser et peut être utilisé pour évaluer l’influence des gènes et de l’environnement sur un type d’interaction sociale chez Drosophila melanogaster.

Essai simple pour la quantification de l'évitement social en Drosophila melanogaster

Au cours de la mouche des fruits combats, les comportements observés, combattre la dynamique, et l'apprentissage et la mémoire associée sont influencés par les conditions expérimentales. Le protocole présenté ici décrit une nouvelle procédure qui élimine entièrement la manipulation des mouches pendant les expériences. Cela améliore la dynamique de combat et permet la formation d'effets de «perdant» forts.

Une nouvelle approche qui élimine la manipulation pour l&#39;étude de l&#39;agression et le «perdant» dans Effet<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Nous décrivons un protocole pour induire enrichissante et nonrewarding expériences dans les mouches des fruits (Drosophila melanogaster) en utilisant la consommation volontaire d'éthanol en tant que mesure des changements dans les états de récompense.

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Drosophila Courtship Conditionnement en tant que mesure de l&#39;apprentissage et de la mémoire

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Flypub étudier l’éthanol induit la désinhibition comportementale et la sensibilisation

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