Détermination de la réactivité et le titre du sérum en utilisant un dosage d'hémagglutination

Détermination de la réactivité et du titre sérique à l’aide d’un dosage de l’hémagglutinine. Une nation de gluten est une réaction qui a lieu entre des anticorps solubles et des antigènes particulaires. Il peut s’agir de cellules ou de molécules porteuses.

Les épitopes à la surface du porteur permettent à un anticorps de se lier et de réticuler le porteur, ce qui conduit à la formation d’un réseau complexe appelé complexe antigène-anticorps. L’agglutination Hem est une forme spécifique d’agglutination où les anticorps se lient aux globules rouges, qui agissent comme l’antigène particulaire. Les globules rouges sont des cibles utiles car ils sont à la fois facilement disponibles et les résultats sont facilement visibles à l’œil nu.

Les échantillons de sérum sont dilués en série, puis placés dans une plaque UBO de 96 puits. Une suspension de globules rouges Riva est ensuite ajoutée. Lorsque les anticorps présents à une forte concentration, la liaison aux globules rouges a lieu, formant un grand réseau.

Lorsque ce réseau se dépose par gravité, il s’adapte à la forme de la plaque ubo. Vu d’en haut, une large feuille de globules rouges est visible. Il s’agit d’une réaction positive de l’hémagglutinine.

Lorsque les niveaux d’anticorps sont faibles, aucun réseau ne peut se former et les globules rouges épousent la forme de la plaque UBO et se concentrent à la base en formant une petite pastille. Il s’agit d’une réaction d’agglutination négative de l’ourlet. Ce diagramme montre une réaction positive.

Les cellules forment un réseau au fur et à mesure qu’elles se déposent, elles épousent la forme de la plaque inférieure en U. À gauche et à droite, nous voyons la vue de dessus où l’on voit une large feuille de globules rouges. Si une quantité intermédiaire d’anticorps est présente, la formation de quelques lettres sera observée.

L’agglutination Hem permet également la réactivité de différents échantillons de sérum à tester contre l’antigène connu. Le titre de l’échantillon de sérum peut également être déterminé. Le titre étant la dernière dilution où une réaction positive a été observée.

Normalement, plus la concentration d’anticorps dans l’échantillon de sérum est élevée, plus le titre est élevé. Ce schéma montre une réaction d’agglutination négative de l’ourlet. Anticorps insuffisants pour réticuler les globules rouges.

Au fur et à mesure que les cellules se déposent par gravité, elles glissent sur le côté du puits en formant une pastille serrée au fond. Le schéma de droite montre les globules rouges vus d’en haut. Pour cette expérience, vous aurez besoin d’une plaque inférieure en U de 1 96 puits.

Il est essentiel d’utiliser une plaque inférieure en U, car les plaques à fond plat ne permettront pas aux cellules de se sédimenter en une pastille, ce qui rend l’interprétation impossible. Un animal capable de délivrer 50 microlitres teste le sérum, une suspension à 1 % de cellules Riva et une solution unique de sérum physiologique tampon verone dans chaque puits de rangée. Un à 12, délivrez 50 microlitres de sérum salin

Il est utilisé comme diluant. Placez maintenant 50 microlitres de sérum dans le puits, A. Il s’agit de votre première dilution en deux.

À l’aide du perpet, assurez-vous que l’échantillon de sérum est bien mélangé. Une fois mélangé, retirez 50 microlitres du puits A un et transférez-les dans le puits A deux. Il s’agit de votre deuxième dilution d’un sur deux, ce qui vous donne une dilution de quatre fois.

Poursuivre cette série de dilution en utilisant les puits trois à 11. Ne placez pas de sérum dans, eh bien, 12 car il s’agit de votre contrôle négatif salin tampon roal. Maintenant, prenez votre suspension à 1 % de cellules Riva, qui a été soigneusement mélangée et transférez 50 microlitres dans, eh bien, un à travers le puits A 12.

Une fois les cellules ajoutées, couvrez la plaque et tapotez doucement la plaque pour vous assurer que les échantillons et les cellules sont mélangés. Maintenant, incuber à 37 degrés pendant 60 minutes. Un incubateur humidifié est approprié.

Au cours de la période d’incubation de 60 minutes, des interactions antigéniques auront lieu et les cellules commenceront à se stabiliser. La séquence vidéo que vous visionnez est une photographie en accéléré de l’ensemble de la période de 60 minutes. Il s’agit d’un gros plan des puits cinq à 10.

Nous avons déjà examiné, eh bien, 12, qui était votre contrôle VBS dans ce cas. Eh bien, les cellules avaient formé une pastille serrée, ce qui indiquait que le test avait fonctionné correctement. Les puits cinq et six sont des exemples d’agglutination positive de l’ourlet.

Eh bien, sept est un exemple de résultat d’agglutination intermédiaire tandis que les puits huit, neuf et 10 sont négatifs pour l’agglutination par ourlet. Sur la base de ce résultat, le titre serait déterminé en fonction de la dilution pour le puits, sept, car il s’agissait du dernier puits, où une réaction positive a été observée.