Name: Primaire cellules épithéliales bronchiques humaines Cultivé à partir dexplants (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-03-26T17:10:00.000+00:00
Duration: 14 min 32 s
Description: Découvrez une méthode fiable pour cultiver des cellules épithéliales bronchiques primaires à partir d'explants tissulaires humains. Ce protocole utilise une interface air-liquide pour obtenir des cellules ciliées différenciées, essentielles pour l'étude des mécanismes des maladies pulmonaires et le criblage pharmacologique.

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Les auteurs sont très reconnaissants au Dr Richard Inculet pour fournir les tissus bronchiques. Éthique de la recherche approbations du Conseil ont été obtenus à partir de Saint-Joseph de Hamilton et l&#39;Université de Western Ontario / London Health Sciences Centre (Dr. David McCormack), les tissus et les Archives du Comité, Département de pathologie. Nous remercions également Ernie Spitzer (microscopie électronique, Université McMaster) pour fournir TEMs de nos cultures ALI, et Farkas Daniela pour fournir une partie des matériaux nécessaires à la immunomarquage. Ce travail a été financé par une subvention terme Bloquer l&#39;Ontario Thoracic Society, le Dr Asma Yaghi a été soutenue par une bourse FSORC, soins de santé St-Joseph de Hamilton, Ontario, Canada.

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<li>Wetering, S. van <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+secretory+leukocyte+proteinase+inhibitor+%28SLPI%29+production+by+human+bronchial+epithelial+cells%3A+increase+of+cell-associated+SLPI+by+neutrophil+elastase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Investig.+Med%22%5BJournal%5D)">Regulation of secretory leukocyte proteinase inhibitor (SLPI) production by human bronchial epithelial cells: increase of cell-associated SLPI by neutrophil elastase.</a> J. Investig. Med. 48, 359-366 (2000).</li>
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</ol>

Dans cette étude, nous avons présenté des méthodes détaillées pour la culture et l&#39;expansion de l&#39;enseignement primaire cellules épithéliales bronchiques humaines. Nous avons démontré comment des explants et des greffes de tissu bronchique, cultivées dans un milieu qui favorise la croissance des cellules épithéliales, peut fournir une source continue de cellules des voies respiratoires épithéliales humaines pour les études de non-différenciées des modèles cellulaires (immergée) et différencié (cultivés sur l&#39...

Autres exigences: incubateur, du cabinet de sécurité biologique (BSC), une centrifugeuse, des plaques de culture de 100 mm, tubes stériles (15 ml, 50 ml et 2 ml), embouts de pipette stérile, poignée de scalpel et de lames, de petits ciseaux pointus, des blouses de laboratoire et des gants. Ceux-ci peuvent être obtenus auprès de vos fournisseurs préférés.

primaire cellules épithéliales bronchiques humaines cultivé à partir d&#39;explants

Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

Cellules épithéliales bronchiques humaines sont nécessaires pour les modèles cellulaires de la maladie et pour étudier l&#39;effet des excipients et des agents pharmacologiques sur la fonction et la structure des cellules épithéliales humaines. Ici nous décrivons en détail la méthode de culture des cellules épithéliales bronchiques du tissu bronchique qui est récolté par le chirurgien au moment de la chirurgie du poumon (cancer du poumon par exemple ou une chirurgie de réduction du volume pulmonaire). Avec l&#39;approbation de l&#39;éthique et le consentement éclairé, le chirurgien prend ce qui est nécessaire pour la pathologie et nous fournit une partie bronchique qui est éloignée des zones malades. Le tissu est ensuite utilisé comme source d&#39;explants qui peuvent être utilisés pour la culture primaire des cellules épithéliales bronchiques en culture. Segments bronchiques environ 0,5 à 1 cm de long et 1 cm de diamètre ≤ sont rincés à l&#39;EBSS froide et l&#39;excès de tissu parenchymateux est enlevé. Les segments sont à ciel ouvert et hachées dans 2 à 3 mm<sup&gt; 3</sup&gt; Des morceaux de tissu. Les pièces sont utilisées comme source de cellules primaires. Après plaques 100mm revêtement de la culture pendant 1-2 heures avec une combinaison de collagène (30 ug / ml), la fibronectine (10 ug / ml), et de la BSA (10 pg / ml), les plaques sont rayés dans les zones 4-5 et tissus les pièces sont placées dans les zones rayé, puis un milieu de culture (DMEM / Ham F-12 avec des additifs) adapté à la croissance des cellules épithéliales est ajouté et les plaques sont placées dans une étuve à 37 ° C dans 5% de CO<sub&gt; 2</sub&gt; L&#39;air humidifié. Le milieu de culture est changé tous les 3-4 jours. Les cellules épithéliales se développer à partir des pièces formant les anneaux d&#39;environ 1,5 cm de diamètre dans les 3-4 semaines. Explants peuvent être réutilisées jusqu&#39;à 6 fois en les déplaçant dans de nouvelles plaques pré-enduites. Les cellules sont levées à l&#39;aide de trypsine / EDTA, mis en commun, comptés, et re-plaqué dans les flacons T75 Bind cellulaire pour augmenter leur nombre. Flacons T75 ensemencé avec 2-3 millions de cellules grandissent à 80% de confluence dans les 4 semaines. Élargi primaires des cellules épithéliales humaines peuvent être cultivées et autorisés à différencier sur l&#39;interface air-liquide. Les méthodes décrites ici fournissent une source abondante de cellules épithéliales bronchiques humaines provenant de tissus fraîchement isolées et permettent d&#39;étudier ces cellules comme des modèles de la maladie et pour la pharmacologie et des examens toxicologiques.

Nous décrivons ici une méthode détaillée pour la culture primaire des cellules épithéliales bronchiques humaines à partir d&#39;explants de tissus des voies aériennes bronchiques humaines, y compris la croissance différenciée sur une interface air-liquide. Cette méthode fournit une source abondante de cellules primaires pour enquêter sur le rôle de l&#39;épithélium des voies aériennes dans la santé des poumons et des maladies humaines.

Primaire cellules épithéliales bronchiques humaines Cultivé à partir d&#39;explants

Des cellules épithéliales bronchiques humaines sont nécessaires pour les modèles cellulaires de maladies et pour étudier l'effet des excipients et des agents pharmacologiques sur le...

Dans cet article, nous décrivons un protocole de culture et d'expansion de cellules épithéliales bronchiques humaines à partir de segments bronchiques humains fraîchement isolés. Ce protocole comprend cinq sections : le codage et le grattage, les plaques de culture de cent millimètres, la réparation du tissu bronchique, les greffes de tissu bronchique en explant, le passage des cellules épithéliales bronchiques humaines ciliées en croissance, et les cellules épithéliales bronchiques humaines sur transwell. Avant de commencer, notez que toutes les étapes sont réalisées dans une hotte de sécurité biologique.Sauf indication contraire, veuillez consulter la section Matériaux, réactifs et préparation et vous assurer que vous avez préparé correctement. Les opérations suivantes : codage, culture de solutions mères, milieu, solutions de dissociation, revêtement et grattage. Les plaques de culture de cent millimètres doivent être effectuées dans le bst.Conservez tout en stérile. Placez des plaques de culture stériles de cent millimètres et la solution de revêtement. Dans la pipette BST, faites tournoyer deux millilitres de solution de revêtement dans une plaque de cent millimètres afin d'en

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Cellules épithéliales nasales, obtenues par grattage superficiel de la biopsie des volontaires humains, sont expansées et transférées sur des inserts de culture tissulaire. Après avoir atteint la confluence, les cellules sont cultivées à l'interface air-liquide, ce qui donne des cultures de cellules ciliées et non ciliées. Cultures de cellules épithéliales nasales différenciées fournissent des modèles expérimentaux viables pour l'étude de la muqueuse respiratoire.

Culture de cellules humaines épithéliales nasales à l&#39;interface Air Liquide

Cette publication démontre des méthodes permettant de prélever et de cultiver avec succès la muqueuse épithéliale nasale d’enfants, et de reprogrammer ces cellules en cellules souches pluripotentes induites (iPSC).

Cultiver des cellules primaires épithéliales nasales des enfants et des Reprogrammer dans les cellules souches pluripotentes induites

Les cellules épithéliales bronchiques humaines primaires sont difficiles à transduire. Ce protocole décrit la production de lentivirus et leur concentration ainsi que les conditions de culture optimales nécessaires pour réaliser des transductions très efficaces dans ces cellules tout au long de la différenciation vers un épithélium pseudo-stratifié.

Optimal Lentivirus Production et culture cellulaire Conditions nécessaires pour réussir Cellules transduction humains primaires épithéliales bronchiques

Cet article fournit une méthodologie détaillée pour les approches de dissociation tissulaire et de fractionnement cellulaire permettant l’enrichissement de cellules épithéliales viables à partir de régions proximales et distales du poumon humain. Ici, ces approches sont appliquées pour l’analyse fonctionnelle des cellules progénitrices épithéliales pulmonaires grâce à l’utilisation de modèles de culture d’organoïdes 3D.

Isolement et enrichissement des cellules progénitrices épithéliales pulmonaires humaines pour la culture organoïde

Nous décrivons ici l’isolement, l’amplification et la différenciation des cellules primaires de l’épithélium nasal humain (HNE) à l’interface air-liquide et un protocole de biobanque permettant de congeler avec succès puis de décongeler l’HNE amplifiée. Le protocole analyse les propriétés électrophysiologiques des cellules HNE différenciées et la correction de la sécrétion de chlorure liée au CFTR sur différents traitements modulateurs.

Cellules épithéliales nasales humaines primaires : la biobanque dans le contexte de la médecine de précision

Le protocole présente une méthode permettant de dériver des organoïdes pulmonaires humains à partir de tissus pulmonaires primaires, d’élargir les organoïdes pulmonaires et d’induire une différenciation proximale pour générer des organoïdes des voies respiratoires 3D et 2D qui phénopient fidèlement l’épithélium des voies respiratoires humaines.

Établir des organoïdes pulmonaires humains et une différenciation proximale pour générer des organoïdes matures des voies respiratoires

Le présent protocole décrit les cellules alvéolaires de type 2 dérivées de cellules souches pluripotentes de type 2 induites par l’homme (iAT2s). Ces cellules peuvent être cultivées en tant que sphères auto-renouvelées en culture 3D ou adaptées à la culture d’interface air-liquide (ALI).

Génération de sphères 3D et de cultures d’interface air-liquide 2D de cellules épithéliales pluripotentes de type 2 dérivées de cellules souches pluripotentes induites par l’homme

Les progrès récents dans les protocoles de différenciation des cellules souches pluripotentes induites par l’homme permettent la dérivation par étapes de types de cellules spécifiques à un organe. Ici, nous fournissons des étapes détaillées pour la maintenance et l’expansion des cellules basales des voies respiratoires dérivées de l’iPSC et leur différenciation en épithélium mucociliaire dans des cultures d’interface air-liquide.

Génération de cultures d’interface air-liquide de cellules épithéliales des voies respiratoires à partir de cellules souches pluripotentes humaines

Présenté ici est une méthode reproductible, abordable et robuste pour l’isolement et l’expansion des cellules épithéliales bronchiques primaires pour la biobanque à long terme et la génération de cellules épithéliales différenciées par culture à l’interface air-liquide.

Isoler les cellules épithéliales bronchiques du tissu pulmonaire réséqué pour les biobanques et établir des cultures d’interface air-liquide bien différenciées

La culture d’interface air-liquide est couramment utilisée pour développer un épithélium des voies respiratoires pseudostratifié en différenciant les cellules épithéliales bronchiques humaines normales primaires qui imitent la face apicale des voies respiratoires pulmonaires. Nous décrivons ici un protocole simple pour déterminer sa qualité en surveillant ses propriétés biophysiques, telles que la fonction ciliaire et l’intégrité de la membrane.

Détermination de la fonction ciliaire et de l’imperméabilité membranaire de l’épithélium des voies respiratoires pulmonaires pseudostratifié

Découvrez une méthode fiable pour cultiver des cellules épithéliales bronchiques primaires à partir d'explants tissulaires humains. Ce protocole utilise une interface air-liquide pour obtenir des cellules ciliées différenciées, essentielles pour l'étude des mécanismes des maladies pulmonaires et le criblage pharmacologique.

Primaire cellules épithéliales bronchiques humaines Cultivé à partir d'explants

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